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《重庆医科大学》 2012年
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TCF7L2影响胰岛素分泌机制的研究

毕健琨  
【摘要】:目的:探讨TCF7L2影响葡萄糖分泌的机制。转录因子TCF7L2与GPR40基因启动子的相互作用。研究慢病毒介导RNA干扰(RNAi)致TCF7L2基因沉默对胰岛β细胞GPR40表达的影响。 方法:(1)采用染色质免疫沉淀(ChIP)技术,在胰岛β TC6细胞株中,用TCF7L2特异性抗体沉淀DNA,聚合酶联式反应(PCR)检测GPR40基因5ˊ特异性序列。(2)构建小鼠TCF7L2基因RNAi慢病毒载体,感染小鼠胰岛β TC6细胞株,进行Real time-PCR及Westernblotting鉴定干扰效率;(3)检测对照组与干扰组葡萄糖刺激后胰岛素分泌(GSIS)情况;(4)Real time-PCR及Western blotting检测TCF7L2稳定下调的小鼠胰岛βTC6细胞中GPR40mRNA以及蛋白水平。 结果:(1)在TCF7L2特异性抗体免疫沉淀的DNA片段中,扩增出GPR40基因5ˊ特异性序列。(2)成功构建小鼠TCF7L2基因RNAi慢病毒载体,使小鼠胰岛βTC6细胞中TCF7L2mRNA以及蛋白水平显著下调,TCF7L2的mRNA表达量较空白组与对照组分别下降72%以及78%(P0.05),TCF7L2的蛋白量显著低于对照组(P0.05);(3)干扰组中葡萄糖刺激的胰岛素分泌较对照组下降(P0.05)(;4)TCF7L2基因稳定下调后,胰岛β TC6细胞中GPR40mRNA以及蛋白水平明显下调,GPR40的mRNA表达量较空白组与对照组分别下降78%以及88%(P0.05),GPR40的蛋白量显著低于对照组(P0.05)。 结论:在胰岛βTC6细胞中,转录因子TCF7L2与GPR40基因启动子存在特异的结合区域,TCF7L2可能影响GPR40的表达调控。慢病毒介导的TCF7L2基因RNAi能实现TCF7L2基因的沉默,从而使GPR40表达下调,葡萄糖刺激的胰岛素分泌显著下降。TCF7L2通过GPR40影响葡萄糖刺激的胰岛素的分泌。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R587.1

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