TCF7L2影响胰岛素分泌机制的研究
【摘要】：目的：探讨TCF7L2影响葡萄糖分泌的机制。转录因子TCF7L2与GPR40基因启动子的相互作用。研究慢病毒介导RNA干扰（RNAi）致TCF7L2基因沉默对胰岛β细胞GPR40表达的影响。
方法：(1)采用染色质免疫沉淀（ChIP）技术，在胰岛β TC6细胞株中，用TCF7L2特异性抗体沉淀DNA，聚合酶联式反应（PCR）检测GPR40基因5ˊ特异性序列。(2)构建小鼠TCF7L2基因RNAi慢病毒载体，感染小鼠胰岛β TC6细胞株，进行Real time-PCR及Westernblotting鉴定干扰效率；（3）检测对照组与干扰组葡萄糖刺激后胰岛素分泌(GSIS)情况；（4）Real time-PCR及Western blotting检测TCF7L2稳定下调的小鼠胰岛βTC6细胞中GPR40mRNA以及蛋白水平。
结果：(1)在TCF7L2特异性抗体免疫沉淀的DNA片段中，扩增出GPR40基因5ˊ特异性序列。(2)成功构建小鼠TCF7L2基因RNAi慢病毒载体，使小鼠胰岛βTC6细胞中TCF7L2mRNA以及蛋白水平显著下调，TCF7L2的mRNA表达量较空白组与对照组分别下降72%以及78%（P0.05），TCF7L2的蛋白量显著低于对照组（P0.05）；（3）干扰组中葡萄糖刺激的胰岛素分泌较对照组下降（P0.05）（;4）TCF7L2基因稳定下调后，胰岛β TC6细胞中GPR40mRNA以及蛋白水平明显下调，GPR40的mRNA表达量较空白组与对照组分别下降78%以及88%（P0.05），GPR40的蛋白量显著低于对照组（P0.05）。
结论：在胰岛βTC6细胞中，转录因子TCF7L2与GPR40基因启动子存在特异的结合区域，TCF7L2可能影响GPR40的表达调控。慢病毒介导的TCF7L2基因RNAi能实现TCF7L2基因的沉默，从而使GPR40表达下调，葡萄糖刺激的胰岛素分泌显著下降。TCF7L2通过GPR40影响葡萄糖刺激的胰岛素的分泌。
【关键词】：染色质免疫沉淀 TCF7L2 RNA干扰 GPR40 【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2012
【分类号】：R587.1
【目录】：
- 英汉缩略语名词对照5-7
- 摘要7-9
- ABSTRACT9-11
- 前言11-15
- 参考文献13-15
- 第一部分 染色质免疫沉淀技术分析胰岛βTC6细胞中转录因子TCF7L2与GPR40基因启动子的结合15-24
- 材料与方法15-18
- 实验结果18-20
- 讨论20-22
- 参考文献22-24
- 第二部分 慢病毒介导TCF7L2基因RNAi对胰岛βTC6细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌及GPR40表达的影响24-37
- 材料与方法24-30
- 实验结果30-34
- 讨论34-35
- 参考文献35-37
- 全文总结37-38
- 附图38-39
- 文献综述39-46
- 参考文献44-46
- 致谢46-47
- 攻读硕士学位期间发表的学术论文47-48
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