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《重庆医科大学》 2012年
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结核性脑膜炎患者脑脊液单核细胞内结核抗原检测的应用研究

杨笑  
【摘要】:目的:结核性脑膜炎(Tuberculous meningitis, TBM)是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的中枢神经系统感染性疾病,约占结核病的7~10%,是以脑膜、大脑实质受损为主,并可波及脊髓、脊膜的非化脓性炎症。TBM临床症状复杂、不典型,早期影像学检查无特异性改变,而赖以诊断颅内感染的脑脊液生化、细胞学检查结果往往与其它类型颅内感染有所重叠,并不能简单借以鉴别感染类型。MTB是胞内寄生菌,机体受到MTB感染后,其首先被单核巨噬细胞吞噬,故使用免疫学方法检测脑脊液单核细胞内的结核杆菌特异性抗原或许可作为TBM诊断的较为简捷、敏感、并且特异性高的诊断方法。ESAT-6即6kDa早期分泌性抗原靶,是从MTB短期培养滤液中分离纯化出的一种低分子量分泌性蛋白,在早期感染的单核细胞内生长时,ESAT-6蛋白表达即明显提高,因此推测检测单核细胞内ESAT-6具有更好的敏感性。本实验第一部分选择结核分枝杆菌早期分泌抗原ESAT-6与PPD为检测对象,采用免疫荧光细胞化学染色的方法观察单核细胞的染色情况,判断结核抗原的存在,而第二部分在以上基础上通过激光扫描共聚焦显微镜技术(Laser scanning confocalmicroscope,LSCM)对部分TBM及对照组患者外周血及脑脊液单核细胞内的ESAT-6进行检测,同时对细胞做分层扫描,进行三维重建和ESAT-6相对荧光强度值测定而达到对细胞内结核抗原的定性、定量、定位及动态变化分析,进一步探寻TBM的发病机制。 方法:所有病例均来自宁夏医科大学附属医院神经内科、宁夏结核病医院2009年12月~2012年2月临床诊断为结核性脑膜炎的住院患者,共60例。其中男性32例,女性28例;发病年龄16岁~76岁,中位值年龄28.5岁;选用Thwaites等提出的TBM临床诊断标准作为纳入标准。对所有患者均进行脑脊液常规、生化、细胞学检查(MGG染色)和阿利新兰染色。免疫荧光细胞化学法标记外周血及脑脊液单核细胞内的PPD、ESAT-6抗原。采用荧光显微镜进行观察,部分涂片经LSCM观察并测定相对荧光强度。 结果:TBM组抗结核药物治疗前脑脊液标本MGG染色呈混合细胞学反应,淋巴细胞及激活淋巴细胞比例占主导;抗结核药物治疗15d脑脊液中性粒细胞计数略有减少,激活淋巴细胞比例明显增加;抗结核药物治疗30d脑脊液标本MGG染色呈淋巴细胞为主的混合细胞学反应,中性粒细胞老化,激活淋巴细胞仍较多,并可见激活的单核细胞。PPD、ESAT-6荧光免疫细胞化学染色检测结果示:TBM组外周血(PB)及脑脊液单核细胞中PPD的阳性检出率分别为63.3%(38/60)和83.33%(50/60);对照组PB及脑脊液单核细胞中PPD的阳性检出率分别是6.45%(4/62)和4.84%(3/62)。 TBM组PB及脑脊液单核细胞中ESAT-6的阳性检出率分别为53.33%(32/60)和76.67%(46/60);对照组PB及脑脊液单核细胞中ESAT-6阳性检出率均为3.23%(2/62)。PPD和ESAT-6在TBM患者中的检出率均明显高于非TBM患者。两组相比有显著统计学差异。ESAT-6较之PPD有着更好的特异性。 对20例ESAT-6阳性的TBM患者及20例ESAT-6阴性的对照组患者PB及脑脊液细胞涂片进行免疫荧光双标记后在LSCM下观察,结果见TBM组ESAT-6均匀分布于单核细胞胞浆和胞膜。阳性单核细胞体积略大,呈圆形或卵圆形。胞浆较松散,呈绿色荧光,而对照组阴性染色细胞则结合的荧光很少,普遍荧光强度极弱,所有胞核均呈蓝色。经检测,TBM组PB及脑脊液单核细胞ESAT-6平均荧光值分别为(22.45±13.35;26.55±11.34),与对照组(2.45±0.89;2.22±0.37)相比有显著统计学差异(P0.01)。对20例TBM患者于治疗3周后再次进行如上检测,结果治疗后的ESAT-6平均荧光值明显降低,治疗前后比较有统计学差异。 结论:(1)初步建立了利用免疫荧光细胞化学法检测TBM单核细胞内抗原的方法。(2)ESAT-6在TBM脑脊液单核细胞中有较好的表达,对照组中检出率低,提示其可以作为TBM临床检测指标。(3)开展利用LSCM对脑脊液细胞中的结核抗原进行定性、定位、定量及动态检测的方法将有利于进一步了解TBM的发病机制。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R529.3

【参考文献】
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1 王仲元,陈红兵,何秀云,张小刚,阎世明,董亚俊,姜晓宇,何珂,张吉平;斑点酶免疫渗滤法抗体检测对结核性脑膜炎诊断价值的评估[J];北京医学;2005年02期
2 岳剑宁,孔繁元,吴若芬,刘菊年,潘月英;应用共聚焦激光扫描显微镜对脑脊液淋巴白血病细胞线粒体的研究[J];北京医学;2005年04期
3 武俊平,吴琦;结核性脑膜炎诊断与治疗研究进展[J];国外医学.呼吸系统分册;2005年01期
4 孟兆华;何俊瑛;;结核性脑膜炎的脑脊液免疫学诊断新进展[J];国际检验医学杂志;2006年05期
5 杨天祝;共聚焦激光扫描显微镜术简介[J];河北医科大学学报;2002年05期
6 陈耀文,林珏龙,赖效莹,梅品超;激光扫描共聚焦显微镜系统及其在细胞生物学中的应用[J];激光生物学报;1998年02期
7 岳剑宁,孔繁元,吴若芬,刘菊年,潘月英;应用LSCM对脑脊液淋巴白血病细胞、淋巴瘤细胞内质网的研究[J];军医进修学院学报;2004年04期
8 何俊瑛,黄庆生,卜晖;脑脊液单核细胞内结核抗原检测对结脑早期诊断的意义[J];脑与神经疾病杂志;2005年03期
9 何俊瑛;刘士甫;朱艳霞;郭伟宾;洪坤;李美杰;邹月丽;;脑脊液单核细胞内ESAT-6检测对结核性脑膜炎的诊断意义[J];脑与神经疾病杂志;2010年03期
10 王宁山,侯熙德,范晓峰;脑脊液中结核杆菌DNA和特异性抗体检测对结核性脑膜炎的诊断价值[J];脑与神经疾病杂志;1994年02期
【共引文献】
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1 于东红,王萍,姚敏;鼻咽癌、喉癌中细菌L型感染及P~(53)、CerbB-2基因突变的对比研究[J];癌变.畸变.突变;1998年06期
2 张涛;李培学;戴慧堂;哈登龙;单燕祥;;荧光显微技术在土壤微生物可视化研究中的应用[J];安徽农业科学;2011年02期
3 高忻;盛俐;马辉春;姚君;潘西安;杨结平;张敏;;合肥地区88例小儿手足口病临床分析[J];安徽卫生职业技术学院学报;2009年04期
4 张洁莹;王莉丽;陈伟;王茜;郁华;;2008年合肥市中央财政结核病项目执行情况分析[J];安徽预防医学杂志;2010年01期
5 张洁莹;王莉丽;孙业桓;;青壮年肺结核流行特征和控制策略[J];安徽预防医学杂志;2011年04期
6 朱红,陈敏,吴纳新,曹受玲;结核菌快速培养546例报告分析[J];安徽预防医学杂志;1998年04期
7 杨晓春;综合医院近年肺结核的发病规律[J];安徽医学;2005年05期
8 王庆祝;;25例不典型结核性脑膜炎的临床分析[J];安徽医学;2007年05期
9 祁立芳;祝言金;;煤工尘肺耐多药结核病的防治[J];安徽医学;2008年03期
10 程君;王谦;陈燕;李家斌;;手足口病(EV71)诊治与预防(附典型病例介绍)[J];安徽医学;2008年04期
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1 肖和平;;我国耐药结核病的流行现状与化学治疗对策[A];中华医学会结核病学分会2011年学术会议论文汇编[C];2011年
2 马琴琴;柴利泉;李志玲;李丽;;结核病合并慢性肝病患者异烟肼血药浓度监测研究[A];中华医学会结核病学分会2011年学术会议论文汇编[C];2011年
3 梁建琴;高华方;李洪敏;赵智贤;张广宇;王巍;王金河;杨海英;冯士生;;PCR-荧光探针法快速检测结核分枝杆菌和非结核分枝杆菌[A];中华医学会结核病学分会2011年学术会议论文汇编[C];2011年
4 邹俊辉;陶小华;肖祖克;;酶联免疫斑点技术诊断潜伏结核的系统分析[A];江西省中西医结合学会呼吸病专业委员会首次学术会议论文集[C];2009年
5 王力和;肖爱娥;刘高嶕;邓文胜;胡筱艳;魏碧海;;吉安市2001~2009年结核病防治策略实施效果评价[A];第五次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会论文汇编[C];2011年
6 吴巍;黄世敬;薛柳华;潘菊华;;艾滋病淋巴结肿大中医临床研究近况[A];中华中医药学会防治艾滋病分会第八次年会论文集[C];2011年
7 李雅;;流动人口肺结核的流行病学特征和影响因素研究[A];医学科研成果与应用[C];2011年
8 唐国建;蒲德利;范彩云;;抗结核板式药致急性溶血1例及文献复习[A];第二十二届航天医学年会暨第五届航天护理年会论文汇编(上册)[C];2006年
9 葛建忠;王自立;李传友;张健源;;脊柱结核脓液中结核分枝杆菌耐利福平基因的实验研究[A];全国脊柱与四肢骨关节结核病诊治研讨会论文汇编[C];2004年
10 葛建忠;王自立;秦世炳;李传友;;脊柱结核脓液中结核分枝杆菌的培养及菌种鉴定[A];全国脊柱与四肢骨关节结核病诊治研讨会论文汇编[C];2004年
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1 李克生;禽流感H5亚型、结核分支杆菌及弓形虫感染金标快速检测技术研究[D];甘肃农业大学;2009年
2 崔玉琳;亚心型扁藻细胞核与叶绿体稳定转化系统的构建[D];中国科学院研究生院(海洋研究所);2011年
3 邢茗;结构植物学研究中新技术的应用[D];吉林大学;2011年
4 陈军;武汉地区结核分枝杆菌药物敏感性及氟喹诺酮耐药分子机制的研究[D];华中科技大学;2011年
5 王会学;局部植入治疗骨与关节结核药物缓释体的制备与特性研究[D];第二军医大学;2011年
6 江俊;hBMP-7基因修饰的骨髓基质细胞修复骨质疏松大鼠牙周组织缺损的实验研究[D];福建医科大学;2011年
7 周成超;山东省流动人口肺结核病人求医行为及治疗管理现状与对策研究[D];山东大学;2011年
8 董海燕;中国13省市结核分枝杆菌基因多态性分析[D];中国疾病预防控制中心;2011年
9 牛雯颖;气虚血瘀型冠心病心绞痛患者红细胞膜成分与血液粘度相关性研究[D];黑龙江中医药大学;2011年
10 赵慧明;泥沙颗粒生长生物膜后基本物理性质的实验研究[D];清华大学;2010年
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1 姜珍;小麦根渍水形成通气组织过程中细胞壁降解与Ca~(2+)相关研究[D];华中农业大学;2010年
2 甄凯旋;家蚕假想基因Bm-P312的克隆表达及其定位研究[D];浙江理工大学;2010年
3 张学芳;家蚕Bmphb基因的表达及其功能初步研究[D];浙江理工大学;2010年
4 赵燕;家蚕HMGA蛋白的原核表达与功能研究[D];浙江理工大学;2010年
5 李会娟;家蚕转胶蛋白基因的原核表达及功能的初步研究[D];浙江理工大学;2010年
6 李佩;家蚕BmSTMN基因的表达分析及其亚细胞定位[D];浙江理工大学;2010年
7 朱立明;家蚕TRAPα基因的表达与功能分析[D];浙江理工大学;2010年
8 刘靓珏;家蚕RPA43相关基因(BmRPA43 N)的克隆表达及定位分析[D];浙江理工大学;2010年
9 杨光;家蚕BYB基因的表达及其功能分析[D];浙江理工大学;2010年
10 秦丹丹;卡介苗疫苗株缺失区基因编码蛋白的研究[D];河南工业大学;2010年
【二级参考文献】
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1 张俏忻,罗文鸿,李慧,林哲绚;彗星电泳法检测H_2O_2对人淋巴细胞DNA损伤及其激光扫描共聚焦显微境下的观察和三维重建[J];癌变.畸变.突变;2003年04期
2 李柏青,宋秀宇,王安潮,徐凤珍,刘丛森,徐晓玲,周彩存;不同T细胞亚群在抗结核杆菌感染中的作用[J];蚌埠医学院学报;1999年06期
3 孙琳;焦伟伟;赵顺英;李兆娜;胡英慧;冯雪莉;李惠民;迟巍;江沁波;江载芳;申阿东;;ELISPOT检测技术在儿童结核病诊断中的应用[J];标记免疫分析与临床;2008年06期
4 王仲元,陈红兵,何秀云,张小刚,阎世明,董亚俊,姜晓宇,何珂,张吉平;斑点酶免疫渗滤法抗体检测对结核性脑膜炎诊断价值的评估[J];北京医学;2005年02期
5 岳剑宁,孔繁元,吴若芬,刘菊年,潘月英;应用共聚焦激光扫描显微镜对脑脊液淋巴白血病细胞线粒体的研究[J];北京医学;2005年04期
6 陈志;林明贵;梁建琴;王金河;;活动性肺结核患者血清炎性因子变化特点及与免疫状态的关系[J];第三军医大学学报;2006年11期
7 罗娜;白云;周静然;宋敏;王艳艳;杨晓亚;许雪青;段文元;熊加祥;;小胶质细胞人补体攻膜复合物亚溶破模型制作及功能鉴定[J];第四军医大学学报;2006年10期
8 程钢,何蕴韶,周新宇,邓文国,李虎;结核分支杆菌荧光PCR试剂盒的研制及临床试验[J];第一军医大学学报;2002年06期
9 谢锦玉,刘铭福,李岩,胡庆和,王玉萍,张莅峡,沈联慈,李乐红;激光扫描共聚焦技术分析中药8892对U_(14)癌细胞的作用[J];中国组织化学与细胞化学杂志;1994年04期
10 刘凤仁;叶临湘;;HIV人群中结核菌隐性感染的诊断与进展[J];公共卫生与预防医学;2006年05期
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1 王景禹;;结核性脑膜炎的护理[J];现代医学;1980年03期
2 高伟士;结核性脑膜炎的治疗与预后[J];国际流行病学传染病学杂志;1981年06期
3 肖镇祥;;出血型结核性脑膜炎[J];中国医刊;1982年03期
4 周惠浩;用乳胶颗粒凝集试验快速诊断结核性脑膜炎[J];国际检验医学杂志;1986年03期
5 赵国范;和姬苓;;结核性脑膜炎20例误诊原因分析(摘要)[J];内蒙古医学杂志;1992年01期
6 杨金升,韩筱玉,代惠寒,罗晓红,石莉,陈虎义;结核性脑膜炎的CT影像学特征(57例分析)[J];实用放射学杂志;1995年05期
7 李红!276000,李德香;结核性脑膜炎56例误诊分析[J];中国社区医师;1998年10期
8 王湘平,田梅兰,侯靖边,杨亚琼,刘迎芬;30例结核性脑膜炎临床分析讨论[J];现代诊断与治疗;1998年S1期
9 李晓春,黄鹏;小儿结核性脑膜炎102例的诊治与转归[J];安徽医学;2000年01期
10 宋志丽,王群,陆兵勋,刘继元,范建中;经颅多普勒在结核性脑膜炎的应用研究[J];临床军医杂志;2000年04期
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1 杨雪;;结核性脑膜炎30例临床分析[A];中华医学会结核病学分会2010年学术年会论文汇编[C];2010年
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4 毛晓辉;王勃;吴璇;;结核性脑膜炎患者预后影响因素分析[A];中华医学会结核病学分会2011年学术会议论文汇编[C];2011年
5 梁莉;刘丽蓉;乐军;唐神结;肖和平;;结核性脑膜炎患者脑脊液的蛋白质组学研究[A];2010年中国防痨协会临床/基础专业学术大会汇编[C];2010年
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7 王海燕;;一例结核性脑膜炎伴左下肢深静脉血栓的护理[A];2011年中国防痨协会全国学术会议论文集[C];2011年
8 李东方;;综合治疗结核性脑膜炎的体会[A];2011年中国防痨协会全国学术会议论文集[C];2011年
9 盛吉芳;俞海英;干梦九;;结核性脑膜炎临床诊治——附42例病例评析[A];第四届中国医师协会感染科医师大会暨传染病诊治高峰论坛、浙江省医学会肝病、感染病学学术年会论文汇编[C];2011年
10 喻成波;何剑琴;干梦九;李兰娟;;结核性脑膜炎的临床诊断及治疗[A];第四届中国医师协会感染科医师大会暨传染病诊治高峰论坛、浙江省医学会肝病、感染病学学术年会论文汇编[C];2011年
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1 吉林省结核病医院主管护师 于英杰;结核性脑膜炎:密切观察病情变化[N];医药经济报;2010年
2 广西梧州市民主路44-2号诊所 周杰;“大方”治疗结核性脑膜炎一得[N];民族医药报;2003年
3 本报记者 朱晓京 胡晓震;留心疑似症状 谨防结核性脑膜炎[N];沈阳日报;2010年
4 记者 杨燕 林蔚学 实习生 罗姝;饶田田——对未来充满希望和信心[N];闽西日报;2009年
5 晓风;腰穿放夜及鞘注新法结核性脑膜炎疗程缩短一半[N];大众卫生报;2000年
6 江西省胸科医院 肖小灏 (主任医师);儿童结核病有哪些特点[N];家庭医生报;2009年
7 颜秋雨;莫被肺外结核蒙住眼[N];大众卫生报;2002年
8 中国疾控中心结核病预防控制中心;儿童结核病的防治[N];保健时报;2009年
9 程心超;呕吐可能暗藏大病[N];广州日报;2004年
10 程心超;形形色色的呕吐[N];农村医药报(汉);2004年
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1 陈沛冬;脑脊液置换加鞘注异烟肼及地塞米松在结核性脑膜炎治疗中的价值—荟萃分析[D];复旦大学;2012年
2 杨笑;结核性脑膜炎患者脑脊液单核细胞内结核抗原检测的应用研究[D];重庆医科大学;2012年
3 张丽帆;结核分枝杆菌RD1基因编码抗原特异性细胞反应对活动性结核病与潜伏性结核感染诊断价值及相关基础研究[D];北京协和医学院;2010年
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1 徐成龙;70例结核性脑膜炎的回顾性分析[D];延边大学;2012年
2 吴怡;358例儿童结核性脑膜炎临床分析[D];重庆医科大学;2012年
3 朱飞;结核性脑膜炎脑脊液检测诊断价值研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2012年
4 韦兴;脑脊液单核细胞内早期分泌性抗原靶-6诊断结核性脑膜炎的系统评价[D];广西医科大学;2013年
5 郭芬;200例结核性脑膜炎临床分析[D];重庆医科大学;2013年
6 毕美华;儿童结核性脑膜炎170例临床研究[D];重庆医科大学;2013年
7 黄守先;中枢性神经系统感染性疾病数据库建立及应用[D];兰州大学;2012年
8 何玲;脑脊液ESAT-6、γ-干扰素检测对结核性脑膜炎的诊断价值[D];吉林大学;2011年
9 李京红;脑脊液细胞学及噬菌体生物扩增法对结核性脑膜炎早期诊断的应用研究[D];郑州大学;2009年
10 陈丽成;脑脊液置换联合鞘内注药对结核性脑膜炎患者疗效的观察[D];山东大学;2010年
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