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《重庆医科大学》 2017年
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Conophylline对ADAM10的调控机制及相关研究

王静文  
【摘要】:研究背景:ADAM10作为a分泌酶,可使APP代谢为sAPPα,一方面减少毒性Aβ的生成,另一方面其产物sAPPα在脑内具有重要生理功能。本实验前期研究通过中药单体高通量药物扫描发现,促胰岛细胞分化药物Conophylline(CNP)可明显增强ADAM10基因启动子区(-508—-30)的荧光素酶活性。目的:旨在从细胞水平探究Conophylline对ADAM10及AD的作用及调节机制。方法:qPCR、荧光素酶活性实验检测细胞水平CNP对ADAM10转录的影响;Western Blot检测ADAM10、APP代谢蛋白、Tau磷酸化水平;Si-RNA研究CNP对ADAM10的调节元件。结果:(1)Conophylline能有效促进SH-SY5Y、HT22和HEK293细胞株ADAM10 mRNA和蛋白水平的表达。(2)Conophylline可抑制稳定过表达APP细胞株HEK-APP中β分泌酶--BACE1,APP代谢产物β-CTF的表达。(3)Conophylline使LC3(LC3-II)表达增高,提示Conophylline可能通过自噬调节CTFs。(4)Conophylline可抑制内源Total-Tau、p Ser396 Tau、p Ser262 Tau和相关激酶CDK5的表达。(5)Conophylline可激活ADAM10基因核心启动子区不同片段(-508—-300,-467—-300,-444—-300)的荧光活性。其中,对-508—-467区域作用明显。(6)Si-RNA分别抑制ADAM10启动子-508—-300区核心转录因子Sp1、USF1及CAAT-BOX结合元件NF-YB后,发现Conophylline主要通过CAAT-BOX调节元件发挥对ADAM10的调控作用。(7)PI3K抑制剂/自噬抑制剂Wortmannin,能抑制Conophylline对ADAM10的影响。自噬作用可能参与了Conophylline对ADAM10的作用。结论:本研究揭示了一种新的小分子中药单体Conophylline对阿尔茨海默病的保护作用,并对其可能参与的机制进行了探究,为下一步动物水平研究奠定实验基础。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R749.16

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