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《重庆医科大学》 2017年
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TLR4-MyD88信号转导途径介导黄芪多糖免疫调节的机制研究

周丽菁  
【摘要】:目的:研究黄芪多糖(Astragalus polysaccharides,APS)对RAW264.7小鼠源性巨噬细胞和EAC荷瘤小鼠的免疫调节作用,以及APS对TLR4信号转导途径的调节机制。方法:体外培养RAW264.7小鼠源性巨噬细胞经APS刺激处理后,收集细胞上清液,Griess法和ELISA法分别检测上清液中NO、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-12p70的浓度;提取细胞总mRNA和总蛋白,qRT-PCR和Western Blots检测TLR4信号通路相关节点基因和蛋白的表达变化。在阻断剂组加入TAK-242或ST-2825预处理细胞后加入APS,ELISA法检测上清液中TNF-α和IL-6表达的变化。采用正常对照组(C57BL/10J和C57BL/6J)和基因缺陷型(C57BL/10ScNJ TLR4缺陷和C57BL/B6.129P2(SJL)-Myd88m1.1Defr/J MyD88缺陷)小鼠构建EAC荷瘤小鼠乳腺癌动物模型,分为生理盐水组、阿霉素(ADM)组、APS组和LPS组,处理25天后,经颈椎脱臼法处死小鼠,收集小鼠眼球血应用ELISA法检测细胞因子;取实体瘤、脾脏和胸腺,称重后统计瘤重和脏器指数,流式细胞术检测肿瘤组织细胞凋亡率。qRT-PCR和Western Blots检测脾脏组织中TLR4信号通路相关节点基因和蛋白的表达情况。结果:APS显著促进巨噬细胞NO、TNF-α、IL-1β和IL-6的分泌(P0.05),对IL-12p70无显著作用(P0.05)。巨噬细胞在阻断剂TAK-242和ST-2825的干预下,APS对NO及细胞因子分泌的促进作用显著降低(P0.05)。在正常对照组荷瘤小鼠中,APS显著促进肿瘤细胞凋亡率、脏器指数和外周血中细胞因子(TNF-α、IL-1β和IL-6)的分泌,减低瘤重(P0.05),对外周血中IL-12p70的分泌无显著作用(P0.05)。qRT-PCR和Western Blots结果显示,APS在体外巨噬细胞和正常对照组的荷瘤小鼠中均可以显著刺激TLR4、MyD88、TRAF-6、NF-κB和AP-1的表达(P0.05),对TRAM的表达无显著作用(P0.05)。在基因缺陷型荷瘤小鼠中,APS对瘤重、肿瘤凋亡率、脏器指数及细胞因子均无显著作用,TLR4信号通路下游相关节点表达无明显变化(P0.05)。结论:TLR4-MyD88依赖信号转导通路可能是APS发挥免疫调节作用的信号转导途径之一。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R285.5

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