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《重庆医科大学》 2017年
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miRNA-146a对乙型肝炎病毒生活周期的影响及机制研究

赵敏  
【摘要】:目的:研究微小RNA-146a(microRNA-146a,miR-146a)对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)生活周期的影响及其可能机制。方法:通过miRNA芯片比较HepG2.2.15细胞与HepG2细胞miRNA表达谱差异,选择miR-146a为研究对象,RT-PCR验证芯片结果。在HepG2.2.15细胞中分别转染miR-146a mimic和inhibitor,RT-PCR检测HBV复制水平,ELISA和Western blot检测蛋白水平。双荧光素酶报告系统进一步验证miR-146a与潜在靶点HS3ST3B1相互作用。HepG2.2.15细胞中转染miR-146a mimic,RT-PCR和western blot分别检测HS3ST3B1 mRNA和蛋白水平。结果:(1)miRNA芯片发现74条miRNAs在HepG2.2.15中表达发生变化,其中29条上调,45条下调,RT-PCR证实,miR-146a在HepG2.2.15水平明显高于HepG2细胞(P0.05)。(2)HepG2.2.15细胞转染miR-146a mimic后,HBV复制和蛋白水平较对照组明显升高(P0.05);转染miR-146a inhibitor后,HBV复制和蛋白表达水平较对照组明显降低(P0.05)。(3)生物信息学预测发现HBV抑制因子HS3ST3B1是miR-146a的潜在靶点,双荧光素酶报告系统显示,HS3ST3B1野生型载体的报告荧光较对照组明显下调(P0.05),突变预测靶位点后,HS3ST3B1突变型载体的报告荧光与对照组无明显差异(P0.05)。HepG2.2.15细胞中转染miR-146a mimic后,HS3ST3B1 m RNA水平较对照组无明显变化(P0.05),HS3ST3B1蛋白水平较对照组明显下调。结论:本研究证实miR-146a能影响HBV生活周期,研究发现miR-146a可能通过作用于HBV抑制因子HS3ST3B1 3′UTR抑制其翻译从而影响HBV生活周期。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R373.21

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