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《重庆医科大学》 2017年
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Lat1在妊娠小鼠子宫内膜蜕膜化进程的功能研究

王晓杰  
【摘要】:背景:L-型氨基酸转运载体1(lat1)主要负责转运大的、中性氨基酸,并选择性的表达在人胎儿的肝脏、胎盘、大脑等组织中。胚胎植入和蜕膜化对成功的妊娠至关重要。小鼠子宫内膜蜕膜化发生在妊娠D4晚上22:00-24:00的囊胚着床后,围绕植入胚胎周围的基质细胞发生的广泛的增殖和分化,这一过程被称为蜕膜化。母体蜕膜细胞在母-胎对话中扮演着多功能作用,如:母-胎免疫耐受和胎盘发育等。而研究表明氨基酸在胚胎植入前/后的胚胎和胎盘发育中扮演着重要的作用,并且成功的胚胎植入和胎盘形成需要激活的氨基酸转运系统,除此之外,在胎盘形成进程中lat1在滋养层巨细胞的侵袭表型中扮演着一定的作用,然而,lat1在胚胎植入时蜕膜化进程的母-胎对话中与卵巢激素之间的相互作用还有待证明。目的:以妊娠D4-8小鼠为研究对象,从离体、体内两方面研究lat1在小鼠子宫内膜蜕膜化过程中所扮演的作用。方法:1.RT-PCR、免疫组织化学、Western Blot方法检测lat1在妊娠D4-8小鼠子宫中的表达。2.体外水平建立小鼠子宫内膜基质细胞诱导蜕膜化模型,转染lat1过表达质粒或干扰质粒,Western Blot方法检测诱导72h时蜕膜化基质细胞中prl蛋白的表达变化;亮氨酸转运竞争性抑制剂BCH(浓度分别为0μM、0.05μM、0.1μM、0.5μM、2μM和4μm)干预后观察诱导72h的蜕膜化基质细胞形态变化,同时westernblot方法检测细胞prl蛋白的表达。3.妊娠d4子宫角注射bch(浓度分别为50μg/ml、5μg/ml),对照分为溶剂1mol/l氨水处理组及空白对照组,于妊娠d8时,采用he染色法检测其对子宫蜕膜化的形态学影响。4.妊娠d4子宫角注射bch(浓度分别为50μg/ml、5μg/ml),对照分为溶剂1mol/l氨水处理组及空白对照组,采用免疫组化检测其对妊娠d8子宫植入位点prl表达区域及相对含量的变化;收集d8子宫植入位点组织,westernblot方法检测其对prl蛋白表达的变化。结果:1.d4时,lat1主要分布在子宫腔上皮、腺上皮和内膜基质细胞的胞质中,d5开始,lat1在蜕膜基质细胞胞质中的表达水平增加,d6时,lat1主要表达在初级蜕膜带的蜕膜细胞和胚胎中,d7和d8时,lat1主要定位在次级蜕膜带的蜕膜细胞的胞质和胚胎中。lat1mrna和蛋白表达于妊娠小鼠d4-d8子宫,且在小鼠子宫非植入位点(iis)的表达水平低于植入位点;与d4相比,妊娠d5-d8植入位点处lat1mrna和蛋白表达水平呈上升趋势,在d8达到峰值(p0.05),而非植入位点表达无差异。2.westernblot结果显示:体外诱导蜕膜化进程中转染lat1过表达质粒后,能促进lat1蛋白在蜕膜化基质细胞中表达,同时能显著上调prl蛋白在诱导72h时蜕膜化基质细胞中的表达水平;转染筛选后的lat1-sirna1有效干扰质粒后,能显著抑制prl蛋白在诱导72h时蜕膜化基质细胞中的表达水平(p0.05)。3.bch处理后,诱导72h时基质细胞蜕膜化多核化比例降低;westernblot结果显示:bch能显著降低lat1蛋白在诱导72h时蜕膜化基质细胞中的表达含量,同时prl的表达水平也出现下调趋势,并与BCH浓度呈剂量依赖关系,4μM BCH能显著抑制prl在蜕膜化基质细胞中的表达(P0.05)。4.HE染色后显示,与空白组比较50μg/ml和5μg/ml BCH处理组的妊娠D8子宫植入位点的蜕膜区域减小(P0.05),而氨水处理组无明显变化,但各组之间不同功能蜕膜区所占比例和胚胎植入数量无显著差异。5.与空白对照组相比,BCH能降低妊娠D8子宫植入位点prl阳性表达细胞的积分光密度(P0.05),同时Western Blot结果显示,BCH能有效降低妊娠D8子宫植入位点lat1的表达,prl蛋白在妊娠D8子宫植入位点的表达水平受到抑制(P0.05),而氨水处理组无明显差异。结论:Lat1在离体与在体水平均可通过调控prl表达水平促进小鼠子宫内膜蜕膜化进程。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2017
【分类号】:R714.2

【参考文献】
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