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《重庆医科大学》 2018年
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羊膜间充质干细胞联合雌激素治疗宫腔粘连的体外实验研究

毛艳华  
【摘要】:目的:研究不同浓度雌二醇(estradiol,E_2)对体外培养人羊膜间充质干细胞(Human amniotic mesenchymal stem cells,hAMSCs)增殖、凋亡的影响,探索hAMSCs分化为子宫内膜样细胞的潜能及条件。方法:(1)采用组织贴壁法和改良酶消化法提取hAMSCs;通过流式细胞学和免疫荧光对第3代hAMSCs进行鉴定。酶消化法提取人子宫内膜间质细胞(hEStCs),通过免疫荧光对h EStCs进行鉴定。(2)采用不同浓度E_2作用于h AMSCs;CCK8(cell counting kit-8,CCK8)试剂盒测定各组hAMSCs的增殖情况;实时荧光定量PCR(quantitative real-time polymerase chainreaction,qRT-PCR)检测细胞分化、凋亡相关基因的表达情况;蛋白印迹法(Western blotting,WB)检测凋亡相关蛋白的表达情况。(3)采用条件诱导培养基和transwell共培养方法分别分组培养第3代h AMSCs,培养7天后,qRT-PCR检测上皮特异性基因(CK7、EMA),间质特异性基因(Vimentin),蜕膜化标志基因(IGFBP-1)的表达情况,进一步采用WB检测上皮特异性蛋白(CK18),间质特异蛋白(Vimentin),蜕膜化标志性蛋白(PRL)的表达情况。结果:(1)通过改良酶消化法提取、传代,获得大量纯化可稳定增殖的hAMSCs用于后续研究。(2)各浓度E_2组在1-4天的增殖率与对照组无明显差异,在4天后,各浓度E_2组的增殖率明显高于对照组(p0.05),各浓度组间无明显差异;1×10~(-6)mol/l E_2组hAMSCs的干细胞相关基因(Oct-4)、抗凋亡基因(Bcl-2)表达水平较对照组和其他E_2浓度组上调(p0.05),1×10~(-5)mol/l E_2组hAMSCs的促凋亡基因(Bax)较对照组和其他E_2浓度组上调(p0.05);1×10~(-6)mol/l E_2组hAMSCs的促凋亡蛋白(Bax)较其他浓度E_2组显著下调(P0.001)。(3)细胞因子组和细胞因子+E_2组hAMSCs的细胞形态由原本的粗短梭形变为细长梭形;细胞因子组hAMSCs的上皮特异性基因(CK7、EMA)较对照组表达上调(P0.05),细胞因子组和细胞因子+E_2组hAMSCs的上皮特异性蛋白(CK18)、蜕膜化标志性蛋白(PRL)较对照组显著上调(P0.01),而间质特异性蛋白(Vimentin)较对照组显著下调(P0.01);共培养组hAMSCs的上皮特异性基因(CK7)、蜕膜化标志性基因(IGFBP1)较对照组表达上调(P0.05),而间质特异性基因(Vimentin)较对照组表达下调(P0.05)。结论:(1)改良酶消化法可获取大量hAMSCs;(2)E_2促进hAMSCs的增殖呈时间依赖性,高浓度E_2(10~(-5)mol/l)促进hAMSCs凋亡,较高浓度E_2(10~(-6)mol/l)能够维持hAMSCs活性并保护其分化潜能;(3)hAMSCs在细胞因子(TGF-β1+EGF+PDGF-BB)或transwell共培养h EStCs所提供的微环境中能够向子宫内膜上皮细胞分化,而E_2对这种分化效应的作用并不显著。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:R711.74

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 贺斯黎;肖松舒;邓新粮;于科楠;薛敏;;重度宫腔粘连危险因素分析[J];中华妇产科杂志;2015年01期
2 陈芳;隋龙;;干细胞在宫腔粘连治疗中的研究进展[J];国际妇产科学杂志;2014年06期
3 刘德宝;张复文;任振华;;雌激素受体α介导小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化[J];中国骨质疏松杂志;2014年03期
4 崔冬冰;何志旭;李永念;舒莉萍;王黎龙;;人羊膜间充质干细胞的分离与鉴定[J];贵阳医学院学报;2014年01期
5 张惠娟;丛姗;梁美萍;刘俊平;黄利刚;宋瑾;曹贵方;;人羊膜间充质干细胞分离培养:胰蛋白酶及胶原酶消化时间及浓度的选择[J];中国组织工程研究;2014年06期
6 祝鑫瑜;王莉;;羊膜移植在妇科临床中的应用[J];齐齐哈尔医学院学报;2013年24期
7 王秋蛟;陈宁;;人羊膜间充质干细胞的研究进展[J];口腔生物医学;2013年02期
8 杨晓清;徐云钊;虞琪;张玉泉;陈志玉;杨兵;;人脐带间充质干细胞对大鼠受损子宫内膜的影响[J];江苏医药;2013年10期
9 张冉;段华;;羊膜移植在预防宫腔粘连中的应用[J];中华妇产科杂志;2012年06期
10 付蒙;张艳梅;王佃亮;曾虹燕;孙晋伟;;人羊膜间充质干细胞的生物学特性及临床前研究[J];中国生物工程杂志;2011年12期
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 郑圣霞;月经血源性子宫内膜干细胞移植治疗重度宫腔粘连的临床前期研究[D];安徽医科大学;2015年
2 刘芳;骨髓间充质干细胞移植联合雌激素治疗宫腔粘连的实验研究[D];南方医科大学;2013年
3 王永刚;大鼠骨髓间充质干细胞向子宫内膜细胞分化的体外实验[D];中南大学;2012年
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 戴婷;左归丸联合人脐带间充质干细胞移植防治大鼠宫腔粘连的实验研究[D];湖北中医药大学;2017年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李娜;陈贵芹;史素娥;李辉;董黎;王素芳;金靖;王朕华;王悦;;不同方式预防宫腔镜下宫腔粘连分离术后宫腔再粘连的效果分析[J];中国实用医刊;2018年07期
2 裘凌峰;楼俊盛;杨青文;习珊珊;毛以华;唐茂林;王一川;丁茂超;;人羊膜对大鼠背部跨区皮瓣成活的影响[J];中华显微外科杂志;2017年04期
3 陈丽刚;时灿灿;王乾兴;;导致宫腔粘连的危险因素分析[J];医学临床研究;2017年07期
4 周锐;许建中;周华东;;雌激素、维生素D和骨形态发生蛋白质与骨质疏松症及心脑动脉钙化的发生机制[J];中华解剖与临床杂志;2017年01期
5 汤一群;段华;汪沙;甘露;徐倩;;间充质干细胞促进子宫内膜再生修复的研究进展[J];中华妇产科杂志;2016年11期
6 蒋翠辉;;术前宫颈注射缩宫素与缩短单次膨宫时间对胎盘残留宫腔镜清宫术患者的影响[J];中国医师杂志;2016年02期
7 王欣;段华;;羊膜制品在重度宫腔粘连治疗中的应用及疗效分析[J];中华妇产科杂志;2016年01期
8 段华;夏恩兰;;宫腔粘连临床诊疗中国专家共识[J];中华妇产科杂志;2015年12期
9 王春梅;李洁;孙文萍;吴德慧;;人脐带间充质干细胞对异位子宫内膜细胞增殖及凋亡的影响[J];中国组织工程研究;2015年41期
10 余延晓;王宝金;任琛琛;杨立;任瑞芳;鲁静荷;史中娜;;可吸收医用膜在重度宫腔粘连中的应用分析[J];中国当代医药;2015年26期
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 赵姬南;宫腔粘连子宫内膜组织中VEGFA的表达及左归丸防治大鼠宫腔粘连的实验研究[D];湖北中医药大学;2018年
2 唐锦;左归丸防治宫腔粘连的实验研究及MMP-9、DDR2在宫腔粘连纤维化形成过程中的表达及功能研究[D];湖北中医药大学;2018年
3 毛艳华;羊膜间充质干细胞联合雌激素治疗宫腔粘连的体外实验研究[D];重庆医科大学;2018年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王秋蛟;陈宁;;人羊膜间充质干细胞的研究进展[J];口腔生物医学;2013年02期
2 张晓兴;;优思明在预防稽留流产清宫术后宫腔粘连中的作用[J];海峡药学;2012年12期
3 于泓;姚观平;任飞;范振海;方宁;王钰莹;杨进;蒲涛;余丽梅;;羊膜间充质干细胞移植治疗急性肾损害[J];中国组织工程研究;2012年49期
4 刘芳;何援利;;模拟子宫内膜微环境体外诱导兔骨髓间充质干细胞向子宫内膜上皮细胞分化的实验研究[J];现代妇产科进展;2012年11期
5 王燕华;曲军英;吕一帆;江一平;;胚胎干细胞移植于内膜损伤小鼠的初步研究[J];国际生殖健康/计划生育杂志;2012年06期
6 王佃亮;张艳梅;杜娟;;间充质干细胞过滤分离器制备人羊膜间充质干细胞的研究[J];中国生物工程杂志;2012年10期
7 付蒙;张艳梅;王佃亮;曾虹燕;孙晋伟;;人羊膜间充质干细胞的生物学特性及临床前研究[J];中国生物工程杂志;2011年12期
8 宫黎明;方宁;陈代雄;万卫红;章涛;刘祖林;余丽梅;赵春华;;人羊膜间充质干细胞在大鼠受损肝组织中分化为肝细胞[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年36期
9 施晶晶;朱栋晓;金伟东;王晓彦;庄瑞娟;李拜红;苗宗宁;;体外诱导羊膜来源间充质干细胞分化为血管内皮细胞[J];中国组织工程研究与临床康复;2011年36期
10 林娜成;李新安;胡娅莉;;子宫内膜损伤后修复的研究进展[J];东南大学学报(医学版);2011年04期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 赵潇丹;小鼠骨髓间充质干细胞对子宫内膜损伤修复的初步研究[D];郑州大学;2012年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 ;卫生健康事业发展70年巡礼专栏·宫腔粘连防治研究进展[J];中国计划生育和妇产科;2019年08期
2 程慧敏;魏晋才;;不同程度宫腔粘连术后妊娠率的比较[J];中国妇幼保健;2018年23期
3 林韶华;;宫腔镜下冷刀切开手术后宫腔粘连复发的情况对比[J];世界最新医学信息文摘;2018年96期
4 王瑾;何莎;陈琼;车亚玲;;宫腔镜下不同手术方式治疗宫腔粘连的应用效果[J];中国性科学;2019年04期
5 莫翔;;宫腔粘连诊治的研究进展[J];实用妇科内分泌电子杂志;2019年11期
6 冯琴;艾瑛;;宫腔粘连的治疗进展[J];实用妇科内分泌电子杂志;2019年11期
7 叶飞雪;张月芳;黄臣;;宫腔镜下手术治疗宫腔粘连的临床疗效及相关危险因素分析[J];华夏医学;2019年02期
8 阮忠敏;;宫腔粘连患者危险因素及治疗效果分析[J];临床医药文献电子杂志;2017年63期
9 刘洁玲;吕昭华;吴海莉;;宫腔粘连综合治疗临床疗效探析[J];中外医疗;2017年31期
10 张琴;;宫腔粘连诊断的研究进展[J];实用医学影像杂志;2017年06期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 许啸虎;陈琢;黄光英;;宫腔粘连中西医研究近况[A];第十四届中国中西医结合基础理论学术年会会议资料[C];2018年
2 许啸虎;张明敏;黄光英;;宫腔粘连中西医研究近况[A];第9届中国中西医结合学会妇产科专业委员会第二次学术会议论文集[C];2017年
3 占欣璐;谭布珍;;宫腔粘连的干细胞修复治疗研究进展[A];第9届中国中西医结合学会妇产科专业委员会第二次学术会议论文集[C];2017年
4 崔李宁;;宫腔粘连的诊治[A];2014浙江省计划生育与生殖医学学术年会暨“第七届生殖安全转化医学研讨会”论文汇编[C];2014年
5 张海霞;朱学平;陈芙庭;马鑫;;经阴道超声三维成像在宫腔粘连诊断中的应用价值[A];2012年浙江省超声医学学术年会论文集[C];2012年
6 徐开红;;宫腔粘连的诊治现状[A];2012年浙江省妇产科学及围产医学学术年会暨《妇产科常见疾病规范化治疗新进展》及《围产医学热点追踪》学习班论文集[C];2012年
7 花向东;顾小燕;许锋;张红洋;王素敏;;200例宫腔粘连诊治分析[A];中华医学会第十次全国妇产科学术会议妇科内镜会场(妇科内镜学组)论文汇编[C];2012年
8 刘玉环;夏恩兰;赵玉婷;宋冬梅;周凤琼;;大剂量雌激素改善中重度宫腔粘连预后的研究[A];中华医学会第十次全国妇产科学术会议妇科内镜会场(妇科内镜学组)论文汇编[C];2012年
9 周凤琼;刘玉环;夏恩兰;宋冬梅;;结核性宫腔粘连的临床诊治分析[A];中华医学会第十次全国妇产科学术会议妇科内镜会场(妇科内镜学组)论文汇编[C];2012年
10 董明理;;宫腔粘连的危险因素分析[A];中华医学会第十次全国妇产科学术会议妇科内镜会场(妇科内镜学组)论文汇编[C];2012年
中国重要报纸全文数据库 前9条
1 宁波市中医院 刘扬;宫腔粘连 补肾活血治疗防术后复发[N];健康报;2017年
2 程怀孟;人流后当心宫腔粘连[N];大众卫生报;2009年
3 周蓓蓓;人流后宫腔粘连医生之责[N];保健时报;2005年
4 本报记者 蒋昕捷;“史上最牛连环抄袭门”调查[N];中国青年报;2010年
5 刘小妹;治疗不孕为何要避孕?[N];大众卫生报;2003年
6 河北医科大学第一医院妇产科 主任医师 张红真;什么是超导可视无痛人流[N];家庭医生报;2005年
7 周萍;巧借避孕治不孕[N];大众卫生报;2004年
8 冯桃莉;头胎切莫轻易作人流[N];大众卫生报;2004年
9 马明珍 刘正英 张健;不孕之因细查寻[N];医药经济报;2002年
中国博士学位论文全文数据库 前7条
1 宋晓花;宫腔粘连术后鲜胚移植时间窗探讨和预防粘连复发方法的比较研究[D];山东大学;2018年
2 周勤;ESR1经SDF-1/CXCR4介导的BMSCs修复子宫内膜与内膜纤维化在宫腔粘连发病及治疗中的研究[D];重庆医科大学;2016年
3 张云;宫腔粘连证候证素特点分析及活血化瘀方的防治作用研究[D];北京中医药大学;2018年
4 孔德胜;脂肪间充质干细胞治疗大鼠宫腔粘连的疗效评价及机制探讨[D];河北医科大学;2017年
5 林小娜;改善宫腔粘连预后的临床和动物实验研究[D];浙江大学;2015年
6 刘芳;骨髓间充质干细胞移植联合雌激素治疗宫腔粘连的实验研究[D];南方医科大学;2013年
7 杨茜;经宫腔镜宫腔粘连分离术后戊酸雌二醇应用疗效分析[D];中南大学;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 付青;雌激素预防宫腔粘连再发的疗效研究[D];延安大学;2019年
2 阳媛;羊膜间充质干细胞移植联合雌激素治疗宫腔粘连的动物实验研究[D];重庆医科大学;2018年
3 毛艳华;羊膜间充质干细胞联合雌激素治疗宫腔粘连的体外实验研究[D];重庆医科大学;2018年
4 王世慧;不同剂量雌激素用于中重度宫腔粘连术后辅助治疗的临床疗效分析[D];郑州大学;2019年
5 侯晓瑛;金凤丸辅助治疗预防宫腔粘连术后复粘疗效观察[D];郑州大学;2019年
6 向燕;三种综合治疗方案治疗中重度宫腔粘连的疗效观察[D];新疆医科大学;2019年
7 姬梦鸽;Foley球囊按摩治疗对宫腔粘连术后预防再粘连的临床疗效分析[D];郑州大学;2019年
8 欧阳金花;宫腔粘连分离术后采用激素联合阿司匹林及康妇消炎栓预防再粘连的临床疗效观察[D];湖北民族大学;2019年
9 方子昂;低表达的CXCL5在宫腔粘连人体组织和大鼠模型中的相关性研究[D];安徽医科大学;2019年
10 李晓;剪刀和电切宫腔粘连分离术的临床效果比较及后续体外受精-胚胎移植妊娠结局分析[D];山东大学;2019年
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