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《重庆医科大学》 2002年
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高强度超声治疗对宫颈癌小鼠免疫功能的影响

孔凡斌  
【摘要】: 本课题探讨了HIU治疗小鼠U14宫颈癌的有效性及其对再次接种同种肿瘤的抑制作用,并应用细胞培养,光、电镜观察,MTT法,双色流式细胞技术,酶联免疫吸附技术,逆转录多聚酶链反应技术等观察了荷宫颈癌U14小鼠脾淋巴细胞体外增殖,细胞毒性,细胞因子分泌功能等。同时也研究了荷宫颈癌U14小鼠腹腔巨噬细胞的功能。主要结果和结论如下: 1. U14宫颈癌细胞生物学性状稳定,具高转移性,能制成可靠的荷瘤模型,肿瘤接种成功率100%。相应处理后10天,HIU治疗组、手术治疗组、荷瘤对照组再次接种2×106 个U14肿瘤细胞,无瘤存活率分别为100%、75%、0%,HIU组、手术组与荷瘤组比较差异显著(P0.05);二次接种2×107 个U14肿瘤细胞时,无瘤存活率分别为87.5%、25%、0%,HIU组与手术组、荷瘤组比较差异显著(P0.05).组织学检查示:HIU治疗即刻,靶区肿瘤细胞胞体固缩,核多浓缩变形;电镜检查示:肿瘤细胞核碎裂,呈絮状溶解,细胞器消失,膜性结构断裂、消失,表现为不可逆性坏死。对此结果,我们认为HIU治疗小鼠宫颈癌是有效的,HIU较手术治愈的小鼠对同种肿瘤有更强的抵抗作用,这可能是由于HIU杀死的肿瘤细胞起到了“HIU原位固化瘤疫苗”作用。 WP=7 2. MTT法检测HIU治疗组 (A)、手术治疗组(B)、荷瘤对照组(C)及正常对照组(D)小鼠脾淋巴细胞增殖结果显示:A、B、C、D组A570值分别为0.412±0.031、0.247±0.055、0.136±0.011、0.263±0.027.HIU 组较其他各组脾淋巴细胞增殖明显增高(P0.05)。双色流式细胞技术显示:效/靶比为5:1时,A、B、C、D组靶细胞死亡百分率分别为55.38±8.16%、43.91±5.69%、31.20±7.12%、32.28±5.84%,HIU组较其它各组靶细胞死亡百分率明显增高(P0.05);效/靶比为10:1时,A、B、C、D组靶细胞死亡百分率分别为56.72±6.40%、45.28±6.47%、37.33±7.68%、39.85±8.59%,HIU组较其它各组靶细胞死亡百分率明显增高(P0.05)。据此结果,我们认为:原位埋植的HIU固化肿瘤细胞具有同源肿瘤的抗原性,能够激活小鼠脾淋巴细胞,促进其活化、增殖,发挥抗肿瘤免疫功能,起到“HIU原位固化瘤疫苗”作用。 3. 本课题研究了HIU治疗组 (A)、手术治疗组(B)、荷瘤对照组(C)及正常对照组(D)小鼠脾淋巴细胞细胞因子的分泌及其mRNA的表达水平。结果显示:受Con A刺激时,A组IL-2浓度(1110.13±338.10 pg/ml)较B(641.50±93.29 pg/ml)、C(215.75±62.54 pg/ml)明显增高(P0.05);A组IFN-γ浓度(64984.86±9778.80 pg/ml)较C(42613.75±4050.75 pg/ml)明显增高(P0.05);A组IL-4浓度(224.94±55.89 pg/ml)较B(330.56±94.63 pg/ml)、C(418.13±104.78 pg/ml) WP=8 明显减少(P0.05)。未受Con A刺激时,A组IL-2浓度(1099.25±233.51 pg/ml)较B(241.00±35.44 pg/ml)、C(136.75±37.52 pg/ml)、D(277.50±57.59 pg/ml)明显增高(P0.05);A组IFN-γ浓度( 45390.00±9961.26 pg/ml)较C(33662.50±14111.99 pg/ml)明显增高(P0.05)。A、B、C、D各组小鼠脾淋巴细胞IL-2mRNA相对含量分别为:0.774、0.416、0.187、0.398;A、B、C、D各组小鼠脾淋巴细胞IFN-γmRNA相对含量分别为:0.512、0.216、0.086、0.205;A、B、C、D各组小鼠脾淋巴细胞IL-4mRNA相对含量分别为:0.198、0.226、0.756、0.311;A、B、C、D各组小鼠脾淋巴细胞IL-10mRNA相对含量分别为:0.096、0.212、0.628、0.296。 该结果表明:HIU治疗宫颈癌后原位留置的“HIU原位固化瘤疫苗”可作为一种抗原物质激活抗肿瘤免疫功能,促使Th2向Th1逆转达到抑制肿瘤生长、提高小鼠抗肿瘤免疫功能。 4. HIU治疗组 (A)、手术治疗组(B)、荷瘤对照组(C)及正常对照组(D)小鼠腹腔巨噬细胞细胞因子TNF-α的分泌量为:LPS刺激时,A、B、C、D四组巨噬细胞培养上清TNF-α浓度分别为:1322±616.91 pg/ml、1044±671.33 pg/ml、606.50±230.73 pg/ml、938.00±625.50 pg/ml,A与C比较P0.05;未经LPS刺激时,A、B、C、D四组巨噬细胞培养上清TNF-α浓度分别为:792.35±388.00 pg/ml、543.25±348.49 pg/ml、268.13±68.55 pg/ml、848.88±501.10 pg/ml,A、D与C比较P0.05。据此,我们认为HIU对肿瘤的切除作用及“HIU WP=9 原位固化瘤疫苗”是荷瘤小鼠巨噬细胞功能增强的原因所在。 HIU能有效治疗小鼠宫颈癌,能够促进Th2向Th1逆转,增加小鼠脾细胞对同源肿瘤细胞的杀伤作用,改善荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的功能从而增强荷瘤小鼠抗肿瘤免疫功能。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2002
【分类号】:R737.33

【引证文献】
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