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《重庆医科大学》 2003年
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联合转染t-PA基因与PCNA反义寡核苷酸防治血管重建术后再狭窄研究

吴忠均  
【摘要】: 目 的 克隆人组织纤溶酶原激活物(t-PA)基因并构建携带t-PA基因的真核表达重组质粒载体pcDNA3.1(+)/t-PA。 方 法 采用高效Trizol试剂快速从引产胎儿心脏组织中提取总RNA,RT-PCR获得t-PA全长cDNA,扩增、纯化、回收t-PA基因片段,并将真核表达质粒pcDNA3.1(+)和t-PA基因片段分别双酶切,前者纯化回收大片段,后者纯化回收1.9kb片段,再将回收的pcDNA3.1(+)大片段与t-PA基因片段重组。对重组pcDNA3.1(+)/t-PA质粒进行酶切和PCR鉴定,并测序。 结 果 成功地从引产胎儿心脏组织中克隆了t-PA基因,并构建了以pcDNA3.1(+)为载体的真核表达质粒载体。重组的pcDNA3.1(+)/t-PA经酶切(HindIII/BamHI)和PCR鉴定证实t-PA基因已成功地克隆到pcDNA3.1(+)中,测序结果显示克隆的全长t-PA基因片段与 WP=9 基因文库报告一致,证明为人全长t-PA cDNA。 结 论 含t-PA基因新型真核表达质粒构建成功,为基因防治血管重建术中局部血栓形成的研究奠定了基础。 关键词 基因克隆;组织纤溶酶原激活物;真核表达质粒
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R654.3

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【参考文献】
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