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《重庆医科大学》 2003年
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HBVPreS2S-rhGM-CSF融合基因表达质粒的构建及其体外表达研究

郭晓兰  
【摘要】: 粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(granulocyte macrophage colony stimulating factor,GM-CSF)可促进抗原提呈细胞(antigen presenting cells,APC)的成熟和激活增强抗原的提呈,具有免疫佐剂作用。HBV前S2蛋白在介导乙肝病毒进入,肝细胞中起着重要的作用,而且前S2抗原的T细胞表位有助于提高机体对S抗原的抗体应答水平。为研究GM-CSF和PreS2对乙肝DNA疫苗的免疫增强作用,本研究通过PCR方法、T-A克隆技术以及基因定向克隆手段,将重组人GM-CSF基因与乙肝病毒前S2抗原和表面抗原基因(HBVPreS2S,S2S)融合,构建了融合基因真核表达载体PcDNA3.1-S2S-rhGM-CSF,并在HepG2细胞中表达,初步得出以下结果: 1. 重组质粒PcDNA3.1-S2S-GM-CSF, PcDNA3.1-S2Sc,PcDNA3.1-S -GM-CSF和PcDNA3.1-Sc经酶切、PCR和DNA测序鉴定构建正确。 2. 重组质粒PcDNA3.1-S2S-GM-CSF, PcDNA3.1-S2Sc, PcDNA3.1-S -GM-CSF和PcDNA3.1-Sc可在HepG2细胞中表达, 而且表达出的蛋白 WP=10 能与相应的单克隆抗体发生特异性结合,说明融合基因表达质粒体外成 功表达; 本研究结果为新型乙肝DNA疫苗的研制奠定了一定基础。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2003
【分类号】:R346

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【参考文献】
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