收藏本站
《重庆医科大学》 2004年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

在体与离体心肌诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化及其机制研究

苏立  
【摘要】: 目的 各种病因造成心肌组织不可逆损伤均可导致心肌细胞数量减少、心肌丢失。成年心肌再生能力极差,丢失的心肌被瘢痕组织替代,心脏重构,心功能下降最终导致慢性心力衰竭的发生。如何使丢失的心肌在数量及功能上得到补偿是心血管病学家面临的一个难题。近年来,人们试图向受损局部移植有功能的细胞以使丢失的心肌得到补偿。用于研究的替代细胞主要有:胎儿心肌细胞、成年心肌细胞、骨骼肌卫星细胞及胚胎干细胞等,但这些替代细胞因来源不足或存在伦理学问题而受到一定限制。骨髓间充质干细胞 (mesenchymal stem cells, MSCs) 是骨髓中除造血干细胞以外的另一类干细胞,近年研究表明MSCs具有多向分化潜能,可在体内外适合的条件下分化为多种组织细胞;加之MSCs来源丰富,易于获取,有望成为较上述细胞更为理想的组织替代细胞。 由于MSCs的种属来源、研究方法等方面存在的差异,各家对有关MSCs生长、形态学及超微结构等报道不一。对其横向分化特性亦尚存 WP=9 争议。对MSCs的分化调控以及参与诱导其向特定组织细胞分化的因子或信号分子几乎还一无所知, 目前,已有的几项动物实验研究和1例临床实验报道,MSCs移植到损伤的心肌组织后,宿主受损的心脏功能得以改善,死亡率下降,移植细胞可以在心肌局部表达心肌特异的转录因子或蛋白质。但另有学者报道,MSCs在心肌组织中分化为心肌细胞须依赖于移植前用5-氮胞苷进行预诱导处理。因此,MSCs是否能在无辅助因子预处理的情况下在心肌组织中向心肌细胞分化尚待进一步证实。有学者认为组织局部损伤后所产生的炎症因子或细胞因子可能促使MSCs在局部的迁移和分化。有关胚胎发育及胚胎干细胞分化的研究表明,干细胞因子(stem cell factor, SCF)及其受体c-kit在胚胎干细胞(embryonic stem cells, ESCs)向特定组织迁移和分化过程中可能起着重要作用。SCF在成年心脏中是否表达以及对MSCs是否具有与ESCs类似的作用尚不清楚。SDF-1是新近发现的一种来源于骨髓基质的细胞因子(stromal cell-derived factor-1, SDF-1),属于CXCR4 (cys-X-cys receptor 4) 趋化因子家族成员。体外实验证实SDF-1对骨髓干细胞具有较强的趋化作用,在造血细胞的归巢(homing)及发育分化过程中起着重要作用。但SDF-1是否在心肌组织中表达、与MSCs在局部组织的定位和分化有无关系,目前亦不明了。 如果MSCs确能依赖于环境而向所处环境中的特定细胞分化,那么在体外模拟的心肌组织环境中,MSCs是否可以向心肌细胞分化?在非 WP=10 心肌细胞占多数的心脏组织中,是心肌细胞还是非心肌细胞对MSCs的定向心肌分化起主导作用是一个有趣而又值得研究的问题。 MSCs在体外具有良好的增殖潜能,使其有可能成为细胞治疗和基因治疗的良好工程种子细胞。将目的基因导入MSCs再将其移植到靶部位可对某些疾病进行基因治疗。但外源基因在MSCs是否可获得表达以及对细胞本身的生长、增殖、分化等方面的影响均有待深入研究。 本课题拟以在体及离体心肌诱导MSCs向心肌分化为重点,进行以下几方面研究:(1)体外分离培养大鼠MSCs,观察其生长、增殖、形态及超微结构,并检测其部分膜抗原的表达;(2) 大鼠心脏内MSCs移植,观察不同时间点MSCs在心肌组织中的存活及分布,并对其心肌标志物的表达进行检测,探讨MSCs移植治疗心血管疾病的可行性;同时检测心肌组织内SCF及SDF-1的表达情况,评价其与MSCs在心肌组织内的存活、迁移及分化可能存在的联系;(3)体外分离培养心肌细胞,建立心肌细胞与MSCs共培养体系,检测经心肌细胞诱导后MSCs是否存在心肌标志物的表达,以证实MSCs是否具有“环境依赖性分化”特性;(4)构建pEGFP/hVEG121真核表达质粒载体,阳离子脂质体介导转染MSCs,检测其在MSCs中的表达情况,为利用MSCs作为种子细胞,进行缺血性心血管疾病的细胞及基因联合治疗提供初步的实验基础。 方法 1 采用贴壁分离法分离成年大鼠骨髓MSCs,并在体外进行培养 WP=11 扩增及传代纯化,对细胞的部分生物学特性进行研究,包括:倒置显微镜下动态观察细胞贴壁、形态及生长状况;酶消化法绘制细胞贴壁曲线;MTT法绘制细胞生长曲线;流式细胞仪检测细胞周期;电子显微镜观察细胞超微结构;免疫细胞化学染色法检测细胞膜抗原CD34及CD44的表达。 2 用DAPI对MSCs进行荧光染色标记后,将其分别移植到正常及心肌梗死大鼠的心肌组织内,于移植后不同时间点即移植后24h、1w、2w、4w及8w处死实验动物,取心肌组织行冰冻切片,荧光显微镜下观察移植细胞在心肌组织内的分布,间接评价移植细胞的存活和迁移情况;并取移植后4w的心肌组织行石蜡切片,心肌肌钙蛋白T (cTnT)抗体行免疫组化染色,了解移植细胞向心肌细胞的分化情况。 3 取正常及心肌梗死后24h、1w的心肌组织,Tripure提取组织RNA,以RT-PCR技术检测心肌组织内SCF mRNA和SDF-1 mRNA的表达情况。 4 分离培养新生Wistar大鼠心肌细胞,建立心肌细胞(DAPI标记)与MSCs体外共培养体系,同时以心肌细胞培养上清液及成纤维细胞培养上清液分别与MSCs共同孵育,体外模拟心肌组织环境诱导MSCs分化,于诱导后1w左右,以免疫
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R329.2

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 刘艳秋,周爱儒,朱小君,牛大地,陈光慧,汤健;大鼠心肌缺血的血管内皮生长因子基因治疗[J];北京医科大学学报;1999年06期
2 艾国平,粟永萍,闫国和,冉新泽,刘晓宏,罗成基,程天民;骨髓间充质干细胞的分离与培养[J];第三军医大学学报;2001年05期
3 路艳蒙,傅文玉,朴英杰;人骨髓间充质干细胞的培养及性质鉴定[J];第一军医大学学报;2001年08期
4 李秀森,郭子宽,杨靖清,刘晓丹,侯春梅,唐佩弦,毛宁;骨髓间充质干细胞的生物学特性[J];解放军医学杂志;2000年05期
5 姜晓丹 ,徐如祥 ,张世忠 ,邹雨汐 ,徐强 ,柳晓秋;成人骨髓源性神经干细胞诱导分化实验研究[J];解放军医学杂志;2002年11期
6 耿涛;齐念民;;骨髓间充质干细胞三维培养——构建工程组织[J];科技导报;2006年01期
7 荆鑫,缪志和,赵剑,吴海山,史宝明,周维江;骨髓间充质干细胞的分离培养及生物学特性研究[J];南通医学院学报;2002年01期
8 舒胜文,李盛琳,马绪臣,傅嘉,章魁华;大白鼠骨髓间质干细胞体外培养体系的建立及分化研究[J];现代口腔医学杂志;2002年02期
9 周进明,邹仲敏,郭朝华,何颖,朱波,王蒙,冉新泽,罗成基,程天民;培养小鼠骨髓间充质干细胞及其移植后在体内的定位分布[J];中华放射医学与防护杂志;2002年03期
10 蔡善保,马庆军,余希杰,党耕町,马大龙;VEGF逆转录病毒载体构建及在小鼠骨髓中的表达(英文)[J];Chinese Medical Journal;2002年06期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 项平,黄锦桃,撒亚莲,刘爱军,李海标;大鼠骨髓间充质干细胞的培养及鉴定[J];蚌埠医学院学报;2005年01期
2 杨岩,王娟,陈晓,康丽花;成人骨髓间充质干细胞的体外培养及生物学性质[J];吉林大学学报(医学版);2005年02期
3 王俊杰;徐瑞剑;;骨髓间质干细胞体外诱导分化为心肌细胞的研究进展[J];包头医学院学报;2011年02期
4 沈骅睿;吕文科;杨松涛;;中药仙茅对骨髓干细胞向神经元细胞定向诱导的实验研究[J];成都中医药大学学报;2005年04期
5 姜晓丹,徐如祥,廖可立,邹雨汐,杜谋选,蔡颖谦;胚鼠室管膜神经干细胞体外诱导分化实验研究[J];中华神经医学杂志;2002年01期
6 杨立业,刘相名,郑佳坤,惠国桢,郭礼和;神经干细胞诱导骨髓基质细胞向神经元样细胞分化[J];中华神经医学杂志;2003年06期
7 金澎,徐如祥,姜晓丹,杜谋选,蔡颖谦,邹雨汐;骨髓源性神经干细胞体外培养体系的安全性评价[J];中华神经医学杂志;2005年01期
8 金澎,徐如祥,姜晓丹,邹雨汐,蔡颖谦,杜谋选;成人骨髓源性神经干细胞的致瘤性研究[J];中华神经医学杂志;2005年01期
9 金澎,徐如祥,姜晓丹,蔡颖谦,邹雨汐,杜谋选;体外培养骨髓源性神经干细胞的细胞遗传学分析[J];中华神经医学杂志;2005年01期
10 周虎田,徐如祥,姜晓丹;脂肪干细胞向神经细胞分化的研究现状[J];中华神经医学杂志;2005年03期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 李克非;王永武;;冠心病VEGF基因治疗的现状与展望(文献综述)[A];第二届、第三届国际心脏大血管手术及介入治疗研讨会论文汇编[C];2004年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 戴宜武;骨髓基质细胞定向分化为神经干细胞及自体移植治疗中脑损伤研究[D];第一军医大学;2002年
2 张勇;骨髓间充质干细胞成肌分化及其对肌损伤修复的实验研究[D];第三军医大学;2002年
3 卢新政;骨髓基质细胞定向心肌细胞分化用于心肌重建的实验研究[D];南京医科大学;2003年
4 肖华;猫持续性植物状态模型制作及其相关基础与治疗研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
5 王庆贤;髋臼骨折的生物力学及相关研究[D];河北医科大学;2003年
6 卜聪亚;ACEI、AT_1RA对心梗大鼠LVRM的部分干预机制——CT-1、GP130、AN、Hsp56的调控[D];重庆医科大学;2003年
7 李楠;补骨合剂对大鼠骨髓基质细胞增殖、分化及凋亡的分子调控机理研究[D];福建中医学院;2003年
8 王劲;骨髓间充质干细胞成肌诱导分化策略及其分化机制的研究[D];第三军医大学;2003年
9 陈勇;大鼠骨髓间充质干细胞来源心室肌样活细胞的体外诱导及其特异标记的研究[D];第三军医大学;2003年
10 王建伟;供体源性骨髓间充质干细胞调节非协调性异种肝脏移植免疫排斥反应的实验研究[D];浙江大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙晶晶;青蒿鳖甲汤干预BMSCs对AML-CR患者BMNC来源DCs诱导的影响[D];贵阳中医学院;2010年
2 裴方;Nucleostemin在大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞诱导分化中的研究[D];华中科技大学;2010年
3 岑航辉;骨髓间充质干细胞的培养与鉴定[D];浙江大学;2002年
4 段小军;组织工程化人骨的体外初步构建[D];第三军医大学;2002年
5 刘福元;冠心病存活心肌的判断及介入治疗术后心功能恢复的研究[D];广西医科大学;2003年
6 樊友启;人骨髓间充质干细胞增殖和移植治疗心肌梗死与心力衰竭的研究[D];浙江大学;2003年
7 杨嘉宁;小鼠骨髓间充质干细胞的分离、培养及体外定向诱导分化为神经元样细胞[D];中国医科大学;2003年
8 李钢;成年食蟹猴骨髓基质细胞的诱导分化及移植修复脑皮层损伤[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
9 王彦惠;大鼠神经干细胞提纯及鉴定的实验研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
10 乔东访;成肌诱导的自体骨髓MSCs和 HHK材料对骨骼肌缺损的修复[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前8条
1 刘艳秋,周爱儒,朱小君,牛大地,陈光慧,汤健;大鼠心肌缺血的血管内皮生长因子基因治疗[J];北京医科大学学报;1999年06期
2 赵学,富维骏,袁文俊,杨宗才;清醒大鼠冠状动脉阻断再通技术及其应用[J];第二军医大学学报;1996年05期
3 刘仕勇,张可成,杨辉,何家全,石军;神经干细胞的分离培养及其鉴定[J];第三军医大学学报;2000年01期
4 姜晓丹,徐如祥,张世忠,杨俊,邹雨汐,蔡颖谦,杜谋选;胚鼠室管膜及成鼠骨髓神经干细胞分离培养及分化鉴定实验研究[J];中国临床神经科学;2002年02期
5 刘艳秋,周爱儒,牛大地,朱小君,陈光慧,汤健;血管内皮生长因子基因治疗大鼠脑缺血的实验研究[J];中国生物化学与分子生物学报;1999年05期
6 吴清法,吴祖泽,董波,王立生;微载体悬浮培养成人骨髓间充质干细胞[J];中国实验血液学杂志;2003年01期
7 苏瑞军,黄绍良,周敦华,李树浓,梁晓燕;人胚胎骨髓基质细胞的体外培养观察[J];中国小儿血液;1999年01期
8 盛琴慧,朱国英,周爱儒,高炜,霍勇,冷冰,朱小君,牛大地,马大龙,陈光慧,汤健;血管内皮生长因子基因治疗肢体动脉梗塞病的实验研究[J];中华医学杂志;1999年02期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 欧阳李静;;能修复心脏的细胞[J];心血管病防治知识;2010年02期
2 王彦;刘强;杜利清;王宏;曹嘉;陈凤华;邓昭玲;赵鹏;樊飞跃;;肠辐射损伤模型鼠的间充质干细胞移植研究[J];陕西医学杂志;2011年08期
3 周谊芬;车彦军;吴圆圆;刘灿均;董玉林;张志军;倪衡建;;骨髓基质细胞脑室内移植对脑外伤后神经功能障碍的治疗作用[J];神经解剖学杂志;2011年03期
4 万子杰;;脑干细胞有望治愈听力丧失[J];心血管病防治知识;2009年07期
5 张玲;杨慧;王蓉;易海;富艳红;苏毅;;干细胞治疗血栓闭塞性脉管炎1例[J];西南军医;2011年04期
6 ;关于召开“首届全国干细胞应用研究与管理研讨会”的通知[J];中国医药科学;2011年13期
7 樊钰钰;;勇攀干细胞研究高峰 为人类健康财富奋斗——记清华大学医学院纪家葵教授[J];中国科技财富;2011年13期
8 ;科学家用干细胞“重组”造出人造心脏[J];微创医学;2011年04期
9 洪德恩;;史上第一例干细胞气管移植成功[J];心血管病防治知识;2009年04期
10 ;英国最新科研成果:人的乳牙能救命[J];科技与企业;2010年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 郭军;林国生;贾光宏;杨波;汪蕾;;干细胞因子对骨髓间充质干细胞的促增殖、分化作用[A];中华医学会心血管病分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2004年
2 李冬梅;金连弘;张宇;李呼伦;刘慧雯;张宝东;;骨髓间充质干细胞定向诱导成类软骨细胞的实验研究[A];中国解剖学会第八届组织学与胚胎学专业青年研讨会论文集[C];2004年
3 张福林;周兴举;张畔;曹书华;葛薇;李长虹;章鸣放;;犬自体骨髓间充质干细胞移植修复肾损伤研究[A];“中华医学会肾脏病学分会2004年年会”暨“第二届全国中青年肾脏病学术会议”论文汇编[C];2004年
4 方利君;付小兵;王玉新;孙同柱;李建福;程飚;;骨髓间充质干细胞参与皮脂腺导管构成的初步研究[A];中国康复医学会修复重建外科专业委员会第十四次全国学术交流会论文集[C];2004年
5 丁晓飞;赵劲民;陈维平;杨志;苏伟;;大鼠骨髓间充质干细胞分离、体外培养和向软骨细胞表型定向分化的实验研究[A];2005'中国修复重建外科论坛论文汇编[C];2005年
6 戚超;杨志明;黄富国;秦廷武;罗静聪;李秀群;;骨髓基质干细胞与生物衍生骨构建组织工程骨修复山羊胫骨缺损的研究[A];2005'中国修复重建外科论坛论文汇编[C];2005年
7 李志勇;田卫东;陈希哲;刘磊;郑哓辉;汤炜;李声伟;;牙本质涎磷蛋白真核表达载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达[A];2005'中国修复重建外科论坛论文汇编[C];2005年
8 牛丽丽;祝善俊;张树林;崔振双;刘建国;徐则昌;贺峰;孙琪;郑敏;裴雪涛;;同种异体骨髓间充质干细胞在大鼠心脏的迁移及分化特点[A];中华医学会心血管病分会第八次全国心血管病学术会议汇编[C];2004年
9 陆晓茜;刘霆;孟文彤;朱焕玲;席亚明;刘咏梅;;人骨髓间充质干细胞对T淋巴细胞的免疫调节作用[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年
10 毛峰;;脂肪干细胞向神经元的诱导分化[A];湖北省暨武汉市病理生理学会第十四届学术年会论文汇编[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 张中桥;异体MSCs移植有利于梗死心肌功能修复[N];中国医药报;2004年
2 本报记者 王新佳;我国“原始间充质干细胞”注射液进入临床研究[N];中国高新技术产业导报;2005年
3 张荔子;干细胞点燃组织再生新希望[N];健康报;2005年
4 ;我国干细胞科研喜讯频传[N];人民政协报;2004年
5 本报记者 顾克非;干细胞能抗衰老吗?[N];消费日报;2003年
6 卢家兴;我国成功解决干细胞体外制备关键技术[N];大众科技报;2005年
7 刘恕;我首例干细胞治疗药物进入临床研究[N];科技日报;2005年
8 本报记者 张泓;干细胞,泰达冲刺产业化[N];北方经济时报;2006年
9 星华;用干细胞造牙[N];福建日报;2002年
10 马;为什么要研究干细胞[N];光明日报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 苏立;在体与离体心肌诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化及其机制研究[D];重庆医科大学;2004年
2 方利君;骨髓间充质干细胞转化为皮肤组织的实验研究[D];中国医科大学;2004年
3 江小霞;人骨髓间充质干细胞对树突状细胞免疫功能的影响[D];中国人民解放军军事医学科学院;2004年
4 孟玲;大鼠骨髓间充质干细胞移植修复梗死心肌过程中的迁移现象及机制研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2004年
5 张翼鷟;人间充质干细胞Stro-1~+和Stro-1~-亚群不同的免疫抑制作用[D];中国人民解放军军医进修学院;2004年
6 王宁;大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性、体外神经元方向分化及静脉移植治疗大鼠脑损伤的实验研究[D];天津医科大学;2003年
7 张德强;骨髓间充质干细胞组织工程学生物特性及其单克隆抗体制备的实验研究[D];苏州大学;2003年
8 路艳蒙;BMP12诱导骨髓间充质干细胞分化为腱细胞[D];第一军医大学;2002年
9 张勇;骨髓间充质干细胞成肌分化及其对肌损伤修复的实验研究[D];第三军医大学;2002年
10 刘维新;治疗心肌梗死候选细胞心肌分化潜能与候选基因逆转录病毒载体的构建与鉴定[D];武汉大学;2004年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李长岭;同种异体骨髓间充质干细胞移植修复新西兰白兔心肌梗死区域的研究[D];浙江大学;2003年
2 岑航辉;骨髓间充质干细胞的培养与鉴定[D];浙江大学;2002年
3 徐洪璋;骨髓间充质干细胞的相关研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
4 刘朝阳;骨髓间充质干细胞体外诱导分化为神经细胞[D];中国医科大学;2003年
5 吕铁伟;骨髓间充质干细胞体内诱导分化为心肌细胞的实验研究[D];重庆医科大学;2003年
6 夏鲲;诱导大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛样细胞分化[D];中国医科大学;2004年
7 陈伟;人骨髓间充质干细胞集落培养及其生物学特性的研究[D];第一军医大学;2004年
8 代振动;自体骨髓间充质干细胞移植修复兔膝关节软骨缺损的实验研究[D];郑州大学;2004年
9 官晓清;骨髓间充质干细胞透过新生大鼠血脑屏障的实验研究[D];重庆医科大学;2004年
10 李勇;大鼠骨髓间充质干细胞生物学特性及BMP2在诱导其向神经元样细胞分化中的作用[D];第三军医大学;2004年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026