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《重庆医科大学》 2004年
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急性脑梗死痫性发作兴奋性机制的实验研究

曾可斌  
【摘要】: 一、目的: 探讨急性脑梗死早期痫性发作兴奋性损伤机制及托吡酯干预效应。 二、方法 取成年雄性Wistar大鼠并预置海马电极,一周后线栓法制备大鼠右侧大脑中动脉阻塞(MCAO),同时监测脑电活动并相应分为脑缺血组及痫性发作组,检测海马组织中氨基酸浓度,以及胶质谷氨酸转运体(GLT-1)的免疫表达; 采用钝性分离1日龄SD大鼠双侧海马,分离培养海马神经细胞,观察细胞生长过程及用抗神经丝200抗体免疫细胞化学方法鉴定。第9~15天采用膜片钳全细胞模式检测神经细胞的基本电生理特性,及对L-谷氨酸和GABA的效应;观察不同浓度谷氨酸(2.5μmol/L~1000μmol/L)对神经细胞兴奋性影响及其作用特点;短时间、低浓度谷氨酸(5μmol/L)对神经细胞膜被动电生理特性、自发放电的影响,诱导神经细胞反复痫性放电,以及用吖啶橙/溴化乙锭染色法检测神经细胞死亡率; 观察托吡酯急性给药或预处理,对原代培养海马神经细胞痫性放 WP=8 电的影响。 三、结果 大鼠MCAO后2小时内,27.4%(17/62只)出现反复、阵发性棘波、慢波,即痫性放电。痫性发作组海马中天冬氨酸、谷氨酸和甘氨酸平均浓度显著高于脑缺血组(p0.05)。各组GABA平均浓度无显著性差异(p0.05)。在海马CA1和CA3区,痫性发作组GLT-1免疫表达显著低于脑缺血组(p0.05)。在齿状回,脑缺血组和痫性发作组GLT-1免疫阳性表达无显著性差异(p0.05)。 分离的海马细胞成活率大于93%,培养第7天后,细胞表面光洁,具有典型锥体神经细胞形态特征,并经抗神经丝200抗体免疫细胞化学方法证实,锥体神经细胞占78%,并可存活28天以上。 细胞封接成功率90%以上 (n500),静息膜电位为57.7+8.2mv(n=250)。膜电容Cm为15.9+3.6pF(n=62)、串联阻抗Rs为9.9+2.2MΩ(n=62),细胞膜的时间常数τ为157.8+51.6μs(n=62)。在全细胞模式下,神经细胞(n=216/250)的I-V曲线谱显示内向钠电流和外向钾电流。恒流刺激产生多个动作电位(n=69/72)。谷氨酸诱导海马锥体神经细胞出现可逆性去极化(n=26),并产生阵发性动作电位,GABA抑制电流刺激诱发的动作电位发放。 灌流不同浓度谷氨酸(5μmol/L~1000μmol/L)均可降低海马神经细胞膜电位,诱发可逆性去极化及动作电位,但灌流2.5μmol/L谷氨酸10分钟并不能诱发动作电位;不同谷氨酸浓度组间神经细胞膜电位及 WP=9 阈强度间有显著差异,高浓度组神经细胞的膜电位显著低于低浓度组,诱发动作电位的阈强度也显著低于低浓度组; 培养的神经细胞经谷氨酸作用,24小时后对照组及谷氨酸组神经细胞死亡率分别为13.3%和26.1%,谷氨酸组显著高于对照组(p0.05)。对照组(n=10)呈散发性自发性放电,频率低于3Hz占79.4%。谷氨酸组自发动作电位频率大于3Hz的放电占79.0%,并呈阵发性放电或簇性放电。谷氨酸(5μmol/L)处理后1~6天,海马神经细胞痫性放电百分率为62.5%~78.9%。 喷射苯妥英钠(10μmol/L)、托吡酯(20μmol/L,100μmol/L)抑制恒流刺激(40pA×200mSec)诱导海马神经细胞频发动作电位,动作电位分别减少100%、64.3%和75.0%。对于谷氨酸诱导海马神经细胞痫性放电,能被喷射苯妥英钠完全抑制(n=7/7),喷射托吡酯(100μmol/L)则部分抑制(n=5/8)。托吡酯(100μmol/L)预处理完全抑制谷氨酸诱导海马神经细胞(n=7)痫性放电。 四、结论 大鼠MCAO出现痫性发作,早期痫性发作占27.4%(17/62只); 海马组织中氨基酸浓度升高是MCAO后早期痫性发作原因之一; 大鼠MCAO后早期痫性发作与GLT-1免疫表达下调有关; 分离及原代培养大鼠海马神经细胞的操作方法简捷,有利于锥体神经细胞生长,可适用于膜片钳记录研究; WP=10 谷氨酸对海马神经细胞兴奋性呈浓度和时间依赖性。灌流谷氨酸10分钟内,5μmol/L可能是诱发海马神经细胞产生动作电位的最低浓度。 谷氨酸(5μmol/L)处理培养的海马神经细胞出现可逆性兴奋性损伤、或细胞死亡,海马神经细胞出现反复自发性痫性放电,具有急性脑梗死细胞损伤与癫痫放电特征。 托吡酯可干预体外模拟急性脑梗死谷氨酸所致的痫性放电(痫性发作); 托吡酯抑制海马神经细胞动作电位发放是一个渐进过程,具有时间依赖性和浓度依赖性,托吡酯预处理比喷射给药更能有效抗癫痫作用。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:R743.3

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前2条
1 张宗明,吴才宏,阳冬梅,庄道斌,周培爱,周孝思;大白鼠海马CA_1区锥体细胞的急性分离及其电生理学特性[J];北京医科大学学报;1997年01期
2 唐性春,饶曼人,胡刚,汪海;全脑缺血诱导沙土鼠纹状体,海马和皮层氨基酸水平的改变(英文)[J];Acta Pharmacologica Sinica;2000年09期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 严灿;宋清;吴丽丽;潘毅;刘书考;;加味四逆散对皮质酮、谷氨酸致PC12细胞损伤的保护作用研究[J];安徽中医学院学报;2008年05期
2 杨庆利;陈浩;韦平;;马立克氏病病毒可感染鸡大脑小胶质细胞并促进其Toll样受体15和1LB基因的转录[J];病毒学报;2011年01期
3 瞿永安;李思本;;一种精确而简便的玻璃微电极阻值测量法[J];北京生物医学工程;1989年04期
4 张宽林;;生物医学工程适用技术——表面组装技术[J];北京生物医学工程;1989年04期
5 乔元华,许传青,曾衍钧,徐小虎,于晓军,赵虎,徐虹;流动剪切力作用下细胞通透性和原癌基因的表达[J];北京生物医学工程;2004年01期
6 徐春玲;苏冠方;张文杰;牟大鹏;;骨髓间充质干细胞离子通道的表达及意义[J];吉林大学学报(医学版);2008年05期
7 丁超;李俊峡;陈会校;何振山;李洁;王洁;赵玉英;张莉;;辛伐他汀对兔急性心肌梗死后心室肌细胞L-钙离子通道电流的影响[J];白求恩军医学院学报;2008年04期
8 蔡志平;李朝晖;石素琴;崔慧先;霍东升;石岩;贾建新;;原代SD大鼠海马神经元扫描电镜形态学特点[J];包头医学院学报;2012年01期
9 胡慧;王平;胡亚萍;石和元;孔明望;刘萍;;温胆汤改良方对Alzheimer病细胞模型JNK、c-jun磷酸化水平的影响[J];中华中医药杂志;2008年01期
10 王成典,吴本玠;单离子通道的测定方法[J];北京医科大学学报;1987年04期
中国重要会议论文全文数据库 前8条
1 王逸平;;关附甲素减慢心率作用的动力学特点[A];生命科学与生物技术:中国科协第三届青年学术年会论文集[C];1998年
2 吴丽丽;冉川莲;严灿;刘书考;潘毅;;海马神经前体细胞的体外培养鉴定及皮质酮对其增殖的影响[A];第九届中国中西医结合实验医学学术研讨会论文汇编[C];2009年
3 严灿;宋清;吴丽丽;潘毅;冉川莲;刘书考;;加味四逆散对皮质酮、谷氨酸致损伤的PC12细胞内游离Ca2+浓度的影响[A];第九届中国中西医结合实验医学学术研讨会论文汇编[C];2009年
4 祁小燕;张志雄;;银杏苦内酯B对豚鼠心室肌细胞延迟整流钾通道的影响[A];全国中医药科研与教学改革研讨会论文集[C];2000年
5 朱明军;王国娟;浦介麟;刘红军;王永霞;余海滨;;心悸宁浸膏粉对豚鼠单个心室肌细胞内向整流钾电流的影响[A];中国医师协会中西医结合医师分会成立大会暨第一届年会会议资料[C];2007年
6 梁日欣;;Imidazolines促胰岛素分泌作用机制的研究[A];1999中药研究论文集[C];2000年
7 肖家思;;膜片钳技术与心肌的离子通道[A];全国第五届心功能、第二届心脏学学术会议论文集[C];1996年
8 石素琴;蔡志平;霍东升;石岩;贾建新;;海马神经元的扫描电镜观察[A];科技创新与经济结构调整——第七届内蒙古自治区自然科学学术年会优秀论文集[C];2012年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵景霞;纳米氧化锌对海马神经元电生理特性的影响及对PC12细胞生物学效应的机制研究[D];南开大学;2010年
2 姚扬;蛙皮素对下丘脑和马神经元的作用研究[D];南开大学;2010年
3 张菁;牛磺酸对大鼠急性高眼压视网膜神经节细胞的保护作用及其对RhoA/ROCK-2信号传导通路的影响[D];华中科技大学;2011年
4 代平礼;转Bt cry1Ah基因玉米对蜜蜂的安全性研究[D];中国农业科学院;2011年
5 王蓉蓉;遗传性心律失常的分子机制研究[D];北京协和医学院;2011年
6 张砡;丙泊酚通过改变星形胶质细胞THBS-1的表达水平影响神经细胞功能状态的实验研究[D];北京协和医学院;2010年
7 刘豫;BDNF对高糖状态下视网膜神经元保护作用的实验研究[D];中南大学;2010年
8 余薇;维拉帕米对链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠心肌缺血再灌注损伤的影响及机制[D];武汉大学;2011年
9 余辉;多功能光寻址细胞传感器的设计及其应用的研究[D];浙江大学;2011年
10 秦瑶;CaMKⅡδ对心房肌细胞钙离子流影响的研究[D];第三军医大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙伟;钆对新生大鼠大脑皮层神经元钾通道的调控作用[D];泰山医学院;2010年
2 孙缦利;星形胶质细胞在桶状皮层功能及可塑性中的作用[D];浙江大学;2011年
3 金艳艳;钙通道介导的小于胎龄大鼠胰岛β细胞分泌的电生理机制研究[D];浙江大学;2011年
4 马美刚;α-细辛醚对难治性癫痫细胞模型Lamininβ1的影响[D];广西医科大学;2011年
5 苏婕;难治性癫痫细胞模型中整合素alpha2表达的相关研究[D];广西医科大学;2011年
6 汪延良;胞质Ca~(2+)参与调节拟南芥下胚轴向光弯曲机制分析[D];河南大学;2011年
7 李良;电针对脑卒中痉挛性瘫痪血清Glu、GABA含量影响的研究[D];湖南中医药大学;2011年
8 武文杰;稀土离子和二氧化硫衍生物对大鼠细胞膜离子通道影响研究[D];中北大学;2011年
9 孔令锁;瑞芬太尼预处理对短暂脑缺血后大鼠学习记忆能力的影响[D];安徽医科大学;2011年
10 孙亮;非去极化停跳液对缺血再灌注处理心肌细胞钠电流的影响[D];北京协和医学院;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 邹飞,高天明,陈培熹;适用于膜片钳研究的成年大鼠脑神经元急性分离法[J];中国应用生理学杂志;1995年01期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 王朝辉;黄德晖;;以痫性发作为首发症状的多发性硬化5例报告[J];山东医药;2006年26期
2 王玉梅;;卒中后痫性发作63例临床分析[J];中国社区医师(医学专业半月刊);2009年09期
3 邢云涛;;以痫性发作为首发症状的甲状腺机能亢进1例报告[J];锦州医学院学报;2006年01期
4 刘学伍,孙建英;儿童难治性癫痫引起智力低下的机制研究[J];国外医学.神经病学神经外科学分册;2002年04期
5 曾德俊;翁卫清;郝宝红;;甲硝唑诱发痫性发作1例[J];现代中西医结合杂志;2007年02期
6 史东葵!400016,晏勇!400016,王学峰!400016;点燃鼠痫性发作对神经元凋亡的影响[J];临床神经病学杂志;2000年02期
7 刘学伍,迟兆富,潘姝,吴伟;儿童难治性癫痫引起智力低下的机制及预后干预[J];脑与神经疾病杂志;2001年06期
8 王玉洁;运动诱发的颞叶癫痫[J];国外医学.神经病学神经外科学分册;2003年04期
9 高旭光,冯体良,王军;N-myc在大鼠急性痫性发作模型中的表达及其意义[J];卒中与神经疾病;2003年05期
10 刘海燕;;氯苯那敏口服诱发痫性发作[J];药物不良反应杂志;2010年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 唐慧群;;盐酸法舒地尔治疗急性脑梗死对患者血清C-反应蛋白和疗效的临床分析摘要[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
2 李新;邱伟庆;王纪佐;;急性脑梗死血小板膜糖蛋白和ADMA的表达及相互关系的研究[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年
3 陈卓友;恽文伟;赵进委;向红兵;张志翔;钱传忠;丁新生;;无脑动脉狭窄急性脑梗死患者的临床特点及其预后[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
4 鲍剑虹;郑荣远;夏君慧;朱蓓蕾;;尤瑞克林在急性脑梗死治疗中的应用[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年
5 管姝轶;;尤瑞克林对急性脑梗死患者血脂的影响[A];浙江省中西医结合学会神经内科专业委员会第六次学术年会暨国家级继续教育学习班资料汇编[C];2008年
6 娄秋英;严梅秀;;急性脑梗死患者rt-PA溶栓的治疗及护理[A];全国外科护理学术交流暨专题讲座会议、全国神经内、外科护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2010年
7 刘祖佑;;尤瑞克林治疗急性脑梗死临床疗效和安全性的研究[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
8 谌剑飞;梁浩荣;蔡少华;奚玉凤;;针刺对糖尿病并发急性脑梗死血浆白介素-6及肿瘤坏死因子-α水平的影响[A];第三届全国中西医结合神经系统疾病学术会议论文集[C];2000年
9 戚英;赵卫锋;;急性脑梗死伴代谢综合征与动脉硬化的关系[A];中华医学会第十三次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2010年
10 徐恩;缪学琼;;多模式磁共振影像技术在急性脑梗死早期诊断中的价值[A];第十一届全国神经病学学术会议论文汇编[C];2008年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 ;对急性脑梗死患者的影响[N];中国中医药报;2003年
2 吴一福;降纤酶治疗急性脑梗死疗效显著[N];中国医药报;2005年
3 邓沅佳;郑方算;中草药制剂在急性脑梗死中的应用[N];中国医药报;2004年
4 ;黄芪注射液治疗急性脑梗死[N];中国中医药报;2003年
5 岳金凤;颈内动脉注射溶栓治疗急性脑梗死[N];保健时报;2005年
6 冯学花;藻酸双酯钠与复方丹参治疗急性脑梗死疗效比较[N];农村医药报(汉);2007年
7 应庆;刺五加注射液治疗急性脑梗死[N];中国医药报;2005年
8 新讯;托吡酯可降低肥胖高血压患者体重及血压[N];医药经济报;2005年
9 衣晓峰;颈内动脉注射溶栓联合静脉适时降纤及抗凝治疗 急性脑梗死患者致残率可降低40%[N];中国医药报;2005年
10 陈华;治疗脑梗死的药物选择原则[N];农村医药报(汉);2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 曾可斌;急性脑梗死痫性发作兴奋性机制的实验研究[D];重庆医科大学;2004年
2 陈秀;缺氧性脑损伤致痫性发作机制的实验研究[D];重庆医科大学;2008年
3 白舒霞;近期感染急性脑梗死中医证型探讨及其与炎性反应因子的研究[D];湖北中医药大学;2013年
4 许东;急性脑梗死血小板高尔基体变化及sCD40L对脑缺血损伤作用的实验研究[D];中南大学;2010年
5 阳衡;糖酵解抑制剂2-脱氧葡萄糖抗痫作用机制研究[D];中南大学;2013年
6 王纪文;反复新生期大鼠痫性发作对神经发生的影响及其远期后果[D];山东大学;2005年
7 陈卫银;益气活血复方SXD抑制急性脑梗死炎性反应的实验研究[D];成都中医药大学;2004年
8 陈晓军;调和阴阳针刺法治疗急性脑梗死的文献及临床研究[D];广州中医药大学;2006年
9 刘凤英;难治性癫痫患者脑溶酶体、线粒体及突触功能相关基因异常表达[D];重庆医科大学;2007年
10 吕洋;癫痫的基因机制和临床防治研究[D];重庆医科大学;2008年
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1 王佳媛;急性脑梗死患者血小板CD62p与纤维蛋白原的变化[D];吉林大学;2011年
2 侯晓艳;血栓调节蛋白G127A基因多态性及其血浆水平与急性脑梗死的关系[D];昆明医学院;2011年
3 王秀菊;急性脑梗死患者血清脂联素与颈动脉内膜—中层厚度和同型半胱氨酸的相关性研究[D];天津医科大学;2010年
4 赵玉章;急性脑梗死血清对氧磷酶活性的研究[D];四川大学;2003年
5 刘致民;抗心磷脂抗体、纤维蛋白原与急性脑梗死关系的研究[D];兰州大学;2010年
6 徐玉龙;氧化应激与血尿酸水平在老年急性脑梗死发生中的关系研究[D];安徽医科大学;2010年
7 宋社更;急性脑梗死虚实证侯与其血清白蛋白、球蛋白关系研究[D];福建中医药大学;2010年
8 秦文玲;急性脑梗死患者血神经肽Y与一氧化氮合酶水平变化及其临床意义[D];大连医科大学;2010年
9 张小雨;急性脑梗死后血糖水平与轻度认知功能损害关系研究[D];山东大学;2010年
10 赵明明;急性脑梗死患者血浆8-异前列腺素F2α测定及其临床意义[D];吉林大学;2011年
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