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反相高效液相色谱法同时测定血清和尿中的新喋呤和生物喋呤

张名均  
【摘要】: 目的: 建立RP-HPLC-FD同时测定血清和尿中NP、BP的方法。 用建立的RP-HPLC-FD方法测定临床标本,协助疾病的诊断。 方法: 1、用300g/L三氯乙酸作为蛋白沉淀剂沉淀血清和尿中的蛋白后,在 4oC 条件下,经12000 rpm低温高速离心,取上清液加入NaOH-磷酸盐缓冲液中和后进样。 2、用RP-HPLC-FD分离测定血清和尿中NP、BP。色谱条件:色谱柱:Hypersil BDS C18(i.d 4.6×200mm 5μm,大连依利特公司)、Lichrospher C18 (i.d 4.6×250mm 5μm,汉邦公司);柱温20℃;流动相:甲醇/水为10/90(v/v);流速0.5ml/min;荧光检测:激发波长360nm,发射波长440nm。采用外标法定量。 3、用RP-HPLC-FD法测定病人血清和尿中的新喋呤、生物喋呤的浓度,用AU600奥林巴斯全自动生化分析仪测定血清和尿中的肌酐(Cr)浓度。 WP=8 结果: 1、标准品检测灵敏度:BP:0.1μg/L;NP:0.01μg/L;尿中NP、BP的线性回归方程分别为:Y(NP) = 1.1952x + 9.1557(r2 = 0.9997 ), Y(BP)= 1.2276x+3.244(r2 = 0.9997);日内精密度:RSD(NP) =1.09% , RSD(BP)=3.39% ;尿中高、中、低浓度的平均回收率:NP:101.3% ,BP:98.6% 。血清中新喋呤和生物喋呤的线性回归方程:Y(NP)=1.0255x-0.0077(r2=0.9998),Y(BP)=0.7027x+0.0394(r2=0.9995) ; 日内精密度:生物喋呤为3.96%,新喋呤为2.87% ,血清中高、中、低浓度的平均回收率:新喋呤为97.9% ,生物喋呤为94.3% 。 2、正常人血清中的新喋呤和生物喋呤的浓度分别为:5.76±2.44μg/L和1.81±0.57μg/L,正常组中,随着年龄的增加,老年组(50岁)血清中NP、BP和尿中的NP/Cr和BP/Cr均显著高于中青年组(50岁)(p0.05),而NP/BP比值无显著性变化。性别之间NP、BP、NP/Cr 、BP/Cr及NP/BP均无显著性差异。急性心肌梗塞(AMI)病人的血清中新喋呤和生物喋呤的浓度分别为:12.96±6.95μg/L和3.36±1.73μg/L,血清中的NP和BP较正常组均有显著的差异(P0.01)。用该法同时测定了正常组(n=30)与尿毒症病人(n=12)血清中的NP、BP、NP/BP和尿中的NP/Cr、BP/Cr、NP/BP的比值,发现尿毒症病人血清中的NP、BP、NP/BP和尿中的NP/Cr和NP/BP的比值较正常组显著性升高(p0.05),而尿中BP/Cr无显著性变化,透析前后血清中的NP、BP有显著性差异,尿中的NP/Cr及BP/Cr亦有显著 WP=9 性差异,提示NP、BP及NP/Cr、BP/Cr、NP/BP可作为评价肾小球滤过率和透析效果的辅助指标。 结论: 1、建立了同时测定血清和尿中NP、BP的 RP-HPLC-FD分析方法,该方法简便、稳定、可行、成本低、耗时短,可适用于临床尿标本和血清标本中NP、BP的检测。 2 、通过测定AMI和尿毒症病人血清和尿中的NP、BP浓度,NP、BP不但可以作为急性心肌梗塞的提前预告因子,而且可作为尿毒症病人体内细胞免疫的状态和透析效果的评价。


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