诱骗寡核苷酸靶向阻断STAT5逆转白血病K562细胞恶性表型

王小中

【摘要】：慢性粒细胞白血病(chronic myelogenous leukemia,CML)是一种获得性造血干细胞克隆增殖性血液系统恶性肿瘤 , 其病因与t(9;22)(q34;q11)易位形成特异性 bcr/abl 融合基因,产生具有强烈酪氨酸激酶活性的 BCR/ABL 融合蛋白 , 异常激活 PI3K (phosphatidylinositol-3 kinase) 、 RAS(renin-angiotensin system) 和STAT(signal transducer and activator of transcription)等信号转导通路,导致细胞的恶性转化有关。尽管其具体分子机制仍然有待阐明,但越来越多的研究提示 STAT5 在 CML 发生发展过程中起重要作用。有鉴于此,我们选择 STAT5 作为切入点,探索运用转录因子诱骗(transcription factor decoy)这一新策略抑制 STAT5 靶基因表达;从分子水平阐明组成型激活的 STAT5 在 BCR/ABL 致细胞恶性转化过程中的作用机制;并通过体内外实验初步评价运用诱骗核苷酸抑制 STAT5 通路作为慢粒治疗靶点的可行性。实验从三个方面进行研究,主要方法、结果及结论如下: 1. 诱骗寡核苷酸抑制 STAT5 靶基因表达的可行性研究诱骗寡核苷酸转染靶细胞效率及稳定性实验、细胞内定位:应用阳离子脂质体 lipofectin 介导的转染方法,将绿色荧光染料 FAM 标记的 STAT5 诱骗寡核苷酸(Decoy ODN)导入 K562 细胞中,于随后的不同时间点分别取部分细胞离心制片,荧光显微镜下计数荧光细胞的百分率;以蓝色荧光染料DAPI染色,在激光共聚焦显微镜下观察Decoy ODN 在细胞内的分布。结果发现 Decoy ODN 能高效转染 K562 细胞,转染阳性率达 95.2%,并且在细胞内至少稳定 3 天(阳性率 76.0%)。

【关键词】：转录因子诱骗 信号转导子和转录激活子 5 K562 信号转导 慢性粒细胞白血病
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2005
【分类号】：R733.7
【目录】：

符号说明5-7
中文摘要7-11
英文摘要11-15
论文正文诱骗寡核苷酸靶向阻断STAT5 逆转白血病K562 细胞恶性表型15-89
前言15-18
第一章转录因子诱骗策略抑制STAT5 靶基因表达的可行性研究18-46
第一节诱骗寡核苷酸转染靶细胞效率、稳定性及定位分析18-21
材料与方法18-21
结果21
第二节诱骗寡核苷酸的特异性研究21-29
材料与方法22-26
结果26-29
第三节细胞内诱骗寡核苷酸对相应启动子的竞争抑制效应29-35
材料与方法29-32
结果32-35
第四节诱骗寡核苷酸对STAT5 非组成型激活细胞生长的影响35-39
材料与方法35-37
结果37-39
讨论39-43
参考文献43-46
第二章诱骗寡核苷酸用于逆转K562 细胞恶性表型的体外实验46-74
材料与方法46-58
结果58-66
讨论66-71
参考文献71-74
第三章诱骗寡核苷酸处理对K562 细胞裸鼠致瘤能力及瘤细胞生长的影响-74-88
材料与方法74-78
结果78-84
讨论84-86
参考文献86-88
全文总结88-89
附图89-95
文献综述95-102
致谢102-103
攻读博士学位期间发表的学术论文103

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