收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

血浆/血清中肝癌相关蛋白的比较蛋白质组学研究

母昭德  
【摘要】: 我国肝癌患者死亡率位居恶性肿瘤患者死亡率第二位,死于肝癌者占全球肝癌死亡人数的53%。几十年来,肝癌的临床诊治及基础研究均取得了丰硕成果,但其总体预后并未得到显著改善,难以早期诊断而失去手术时机是重要原因之一。血液组分变化可充分反映机体生理、病理过程,容易获取并易于监测,故一直是筛选疾病诊断标记物的最佳研究对象。目前常用的肝癌血清标记物主要为甲胎蛋白、异常凝血酶原及一些酶类,但其仍未能完全满足临床需求,因此,从血浆/血清中筛选新的肝癌标记物受到医学研究人员和临床医生的高度关注。 当前蛋白质组学(Proteomics)己成为后基因组时代生命科学研究新的热点,其定义为:研究一个细胞、组织或完整机体在某一特定时、空条件下全部蛋白质的表达、功能及其相互作用方式。其特点是以系统生物学的研究思路,采用高分辨率的蛋白分离手段和高通量的蛋白鉴定技术,全景式地研究各种特定情况下的蛋白表达谱。不断发展、完善的蛋白质组学研究策略与技术正逐渐成为现代生物医学研究新的强有力工具。 从血液中寻找特异性生物标记物用于肝癌等诊断是目前临床急需解决的难题,由于血浆/血清中蛋白质的种类很多,其含量的动力学范围很广,采用单一的分离技术很难达到研究目的。本课题采用蛋白质组学中的双向电泳-质谱技术(2-DE MALDI-TOF MS)与高效液相色谱-质谱技术( HPLC MALDI-TOF MS)相结合的策略,分别筛选肝癌患者血浆/血清中的差异蛋白,获得了比较满意的结果。 第一部分肝癌血浆/血清样品的处理 参照人类蛋白质组研究组织( Human Proteome Organization,HUPO)的血浆蛋白质组计划(Plasma Proteome Project,PPP)所推荐的方法采集血液标本,利用PPP推荐使用的多种蛋白质亲和清除系统(Multiple Affinity Removal System, MARS)同时去除血液中六种高丰度蛋白质,结果表明,血液样品中的低丰度蛋白质得到了很好分离、富集和浓缩。 第二部分双向电泳策略识别血浆/血清中的肝癌相关蛋白质 建立了血浆/血清蛋白质组双向电泳分离技术。对2-DE的各种条件进行调整、优化,建立了稳定的血液蛋白质2-DE技术。结果:血液中高丰度蛋白质的去除提高了2-DE图谱的斑点数和斑点的分辨率;pH范围为4-7的IPG胶条分辨率高于pH范围为3-10的IPG胶条;尿素9M,硫脲2M,CHAPS:2%,两性电解质1:1(pH=4~6,pH=5~7)作为上样缓冲液更有利于血液蛋白质的分离;300μg蛋白质为实验的最佳加样量;10%的胶浓度和SDS-PAGE电泳的设置条件(5μA 30min,30μA 2h,20μA至结束6h)均能很好地分离血液蛋白质,银染能较好地检测目标蛋白质中的低丰度蛋白。 利用已经建立的2-DE条件,分别分离和识别了正常人同肝癌患者血浆、正常人和肝癌患者血清低丰度蛋白质组,用PDQuest(7.4.0)软件进行比较分析、寻找差异表达蛋白,差异表达蛋白的酶解产物再经MALDI-TOF-MS分析,所得到的PMF(Peptide mass fingerprinting)数据以MS-Fit搜索引擎在SwissProt数据库中鉴定蛋白质。结果:在肝癌患者血浆组中共鉴定出20种差异蛋白质,其中18种蛋白质表达上调,2种蛋白质表达下调。(它们分别是:RING finger protein 34,Wilms' tumor 1-associating protein,CD147 antigen,Tumor necrosis factor-inducible protein TSG-14 , PRAD1 oncogene ,Melanoma-associated antigen 12,Cell growth regulator with RING finger domain 1,Vacuolar ATP synthase subunit d,IgM-associated peptide,Zinc finger protein 306,Fibrinogen gamma chain precursor , MRG-binding protein , B and T lymphocyte-associated protein,Mitogen-activated protein kinase 14 , C-reactive protein precursor ,1,2-dihydroxy-3-keto-5-methylthiopentene dioxygenase ,Regulating synaptic membrane exocytosis protein 4,IgG Fc receptor II-c,Follistatin precursor,FADD protein)。10例样品对20种总差异蛋白的平均识别率为52%,每种蛋白质在10例样品中的平均重复识别率为52%。在肝癌患者血清组中共鉴定出23种差异蛋白质,其中17种蛋白质表达上调,6种蛋白质表达下调。(它们分别是: Serpin B10 , Keratin ,Alpha-1-antitrypsin,Protein kinase NYD-SP9,Tumor necrosis factor receptor superfamily member 19 precursor,Histone-binding protein RBBP4 , HNF-4a coactivator , Galectin-2 , Metastsis suppressor protein 1,Heat shock 70 kDa protein 8,Zinc finger protein 202,Serum albumin precursor,Apolipoprotein A-IV,Melanoma-associated antigen C3,Myc box dependent-interacting protein 1,Zinc finger CCHC domain-containing protein 5,Histone deacetylase 1 (HD1),FADD protein,26S proteasome regulatory subunit p28,CD82 antigen,Autophagy protein 5)。8例样品对23种总差异蛋白的平均识别率为54.59%,每种蛋白质在8例样品中的平均重复识别率为53.80%。在肝癌患者血浆和血清组中共同识别到2种差异蛋白质。 第三部分HPLC/MS识别血浆肝癌差异蛋白血浆样品除去白蛋白等高丰度蛋白质后,采用RP-HPLC法分离分析,得到的差异蛋白质组分利用基质辅助激光解吸飞行时间质谱鉴定其相对分子质量。结果:肝癌患者血浆和正常人血浆的RP-HPLC图谱中存在3组差异蛋白质,分子量在15kD~50 kD范围的蛋白质在正常人中有较高表达,而分子量为50 kD ~90 kD范围的蛋白质在肝癌患者中有较高表达。实验结果表明,HPLC-MS技术可以成为筛选疾病血液相关蛋白质、特别是强疏水性蛋白质的工具,成为2-DE技术筛选疾病血液相关蛋白质的有力补充。该部分蛋白质的进一步分离、鉴定以及相关蛋白质的生物学功能,有待于更进一步的研究。 总之,本文利用先进的血液样品处理技术,结合2-DE/MS和HPLC/MS的蛋白质组学策略,识别到一定数量的肝癌血液相关蛋白,对这些蛋白的进一步研究,将有助于肝癌机制的阐释,并将为肝癌的诊断和治疗奠定一定的基础。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 ;肝癌病人及肝癌高、低发区居民血清IgG、IgA、IgM含量测定[J];广西医学;1981年05期
2 朱科伦;马佩球;李建强;谢丽娥;赖建红;;肝癌病人免疫功能检测[J];广州医药;1984年01期
3 叶超平;陈骥;;48例肝动脉阻断后综合征的临床分析[J];福建医科大学学报;1992年02期
4 王艳菊;;肝癌病人介入治疗的护理体会[J];齐齐哈尔医学院学报;2010年16期
5 蔡觅;贺福初;周钢桥;;胰岛素样生长因子系统与肝癌[J];中国生物化学与分子生物学报;2011年05期
6 ;肝癌病人免疫功能检测[J];广州医学院学报;1983年04期
7 储佛年;王绍猷;田春林;刘由庚;;氘标记胸腺嘧啶核苷释放微量细胞毒法测定肝癌病人细胞免疫功能[J];广西医科大学学报;1985年04期
8 李国材;;提高肝癌远期疗效的分析[J];实用肿瘤学杂志;1988年01期
9 董思钰;戴希真;苗会;徐帮宁;赵敏;王跃;;原发性肝癌心脏转移(附3例报告)[J];中日友好医院学报;1989年01期
10 孟昭鹏;;采用确证性试验诊断肝癌病人的丙型肝炎病毒感染[J];传染病信息;1994年03期
11 王阳,王桂芳;戊型肝炎及肝癌病人外周血T淋巴细胞亚群的分析[J];中华肝脏病杂志;1996年02期
12 吴桂荣,周益盛,吴小超,王晓春;肝癌病人血清中的补体检测及临床意义[J];中华普通外科杂志;1999年05期
13 陈泽民,李泽浩,江建平,胡宏年,潘新年;肝癌病人舌质与微循环的关系——附100例临床分析[J];中西医结合肝病杂志;1999年03期
14 钟丽;莫新少;游雪梅;陈似霞;陈德凤;刘倩;;肝移植病人生存质量及影响因素的研究[J];护士进修杂志;2007年23期
15 陶才华;;肝癌患者血脂和载脂蛋白代谢水平分析[J];河南预防医学杂志;2008年05期
16 高蕾;南清振;戴九龙;毛战斌;白岚;;肝癌患者可溶性肿瘤坏死因子受体Ⅱ检测的临床意义[J];现代消化及介入诊疗;2008年03期
17 艾尔;;深度揭露肝癌的众多“伪装”[J];肝博士;2009年04期
18 梁池姜;唐娅;;晚期肝癌病人的疼痛观察与护理[J];全科护理;2010年11期
19 ;被过度治疗害死的肝癌病人——一位肿瘤科医生给病人的贴心话[J];抗癌之窗;2010年05期
20 高文霞;;中晚期肝癌的护理[J];医学信息(上旬刊);2011年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 余林欢;;肝癌病人的心理分析及对策[A];全国外科护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2002年
2 徐克成;牛立志;;肝癌经皮微创消融治疗[A];肝脏病防治学术研讨会及新进展学习班专刊[C];2005年
3 张道平;沈宇清;张爱凤;缪凤琴;张建琼;;ARL-1在肝癌中表达模式的初步研究[A];江苏省遗传学会第八届会员代表大会暨学术研讨会论文集[C];2010年
4 吴倩;;1例91岁肝右前叶肝癌病人在CT引导下射频消融术的心理护理[A];2010中华医学会影像技术分会第十八次全国学术大会论文集[C];2010年
5 刘彦青;刘圆;;肝癌病人的饮食及心理护理[A];全国传染病护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2007年
6 郑树森;;肝癌的诊治进展[A];2009年浙江省外科学学术年会论文汇编[C];2009年
7 王红军;;肝癌病人的出院指导[A];河南省肿瘤全科护理学术交流会暨专科护士培训班资料汇编[C];2006年
8 殷志荣;;肝癌病人饮食护理的重要性[A];全国肿瘤护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2008年
9 陆益钱;;肝癌病人的健康教育体会[A];第一届全国肿瘤护理学术会议论文集[C];2001年
10 罗鸿萍;张秀芝;;216例肝癌病人行射频消融治疗的护理体会[A];全国第三届重症监护护理学术交流暨专题讲座会议论文汇编[C];2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 宋培明;氨基酸同位素标记技术在肝癌疾病蛋白质组学研究中的应用[D];上海交通大学;2009年
2 严俊;肝癌多光子光学诊断及肝移植术后索拉菲尼早期干预的实验研究[D];复旦大学;2012年
3 卢逸;活化态肝星状细胞与肝癌间质血管生成的相关性研究[D];中山大学;2013年
4 惠博;自噬溶酶体通路及泛素蛋白酶体通路在肝癌药物干预中的相关作用研究[D];复旦大学;2011年
5 徐永锋;肝癌局部免疫微环境状态以及PEBP1分子表达影响肝癌复发转移的相关研究[D];复旦大学;2010年
6 孙海香;缺氧诱导因子(HIF-2α)通过TFDP3诱导肝癌细胞凋亡分子机制及临床研究[D];复旦大学;2011年
7 韩涛;Shp2调控肝癌进展的信号网络及临床意义研究[D];第二军医大学;2013年
8 何星星;肝癌异常表达microRNAs的鉴定、功能、作用靶点以及治疗潜力研究[D];华中科技大学;2010年
9 黄华;癌旁免疫炎症相关因子及癌内骨桥蛋白表达与肝癌术后复发关系的研究[D];复旦大学;2010年
10 李元元;乙肝相关性肝癌的危险因素及其与淋巴细胞亚群关系的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2013年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李振宇;CD147、MMP9在肝癌表达及临床意义[D];浙江大学;2010年
2 徐赟;LINE-1甲基化与肝癌临床病理和预后关系[D];第二军医大学;2010年
3 胡捷;血浆循环DNA变异在预测肝癌肝移植预后中的价值研究[D];复旦大学;2010年
4 张萦斐;GRP78在原发性多结节肝癌中的表达及意义[D];广西医科大学;2010年
5 杨平华;多发性肝癌肝切除术指征的探讨[D];第二军医大学;2011年
6 郭媛媛;肝癌中RACK1对JNK通路的调控作用及机制探讨[D];河南大学;2011年
7 孙鼎强;甘氨双唑钠在肝癌介入治疗中的应用及临床对照研究[D];泸州医学院;2010年
8 李有骏;中医药治疗肝癌相关文献的证治用药之规律研究[D];南京中医药大学;2010年
9 李丁;抑制自噬与抗血管联合治疗肝癌的实验研究[D];第二军医大学;2011年
10 岳苗苗;肝癌特异性靶向药物A54-GFLG-DOX的制备及生物学活性鉴定[D];华东师范大学;2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 李荔;周钢桥:易得肝癌的基因[N];北京科技报;2010年
2 镇江市第三人民医院肝胆外科 主任医师 李宏欣;不同临床分期肝癌病人治疗方法的选择[N];镇江日报;2010年
3 副主任医师 周德瑞;肝癌病人能生育喂奶吗[N];卫生与生活报;2007年
4 本报记者 喻京英;提高抗癌意识最重要[N];人民日报海外版;2011年
5 本报记者 苗蓓 本报通讯员 李兆玉;托马斯·肯瑟勒:为了友谊而来[N];南通日报;2011年
6 庄庆平;识破肝癌的“伪装”[N];家庭医生报;2006年
7 第二军医大学附属东方肝胆外科医院副院长 教授 张柏和;肝癌,重在病因预防[N];家庭医生报;2005年
8 本报记者 许琦敏 陈青 实习生 李婷;病人“逼”我创新[N];文汇报;2006年
9 印高乐;干扰素降低肝癌病人开刀后复发几率[N];医药经济报;2002年
10 孙理 本报记者 赵宇清;别让肝癌偷袭生命[N];黑龙江日报;2005年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978