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《重庆医科大学》 2007年
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神经球蛋白对脑缺血中神经细胞保护作用的实验研究

朱继  
【摘要】: 缺血性脑血管疾病是中老年人的常见病、多发病,亦是导致老年人死亡和致残的主要疾病。由于其发病机制复杂,病因学尚未完全清楚,至今仍没理想的根治或逆转的药物。氧是机体新陈代谢和维持生存的必要因素。到目前为止,脊椎动物中发现有4种球蛋白:它们分别是参与氧储存与转运的血红蛋白(hemoglobin,HGB),协助氧进入线粒体的肌红蛋白(myoglobin,MGB),充当氧缓冲剂、便于氧扩散和参与清除细胞毒性分子-NO的细胞球蛋白(cytoglobin)以及新近发现的神经球蛋白(neuroglobin,NGB)。NGB是一种脊椎动物单体球蛋白,已被证明具有储存、转运氧气和保护神经细胞的功能,并能增强氧气扩散进入线粒体的能力,对神经细胞具有保护功能。在本研究中,通过克隆得到了NGB的基因表达序列,构建其真核表达载体,并成功建立了大鼠局灶性脑缺血模型。在此基础上,进一步探讨重组质粒pCDNA3.1(+)/Ngb对大鼠脑缺血的神经保护作用。 一、大鼠神经球蛋白基因的克隆及载体构建 (一)大鼠神经球蛋白基因的克隆与序列分析 从雄性Wistar大鼠脑组织中提取总RNA,经逆转录PCR得到cDNA,测序并利用BLAST工具对比证明该基因序列正确。结果:克隆了Wistar大鼠的神经球蛋白基因,有4个碱基发生了突变。结论:Wistar大鼠脑组织中有神经球蛋白表达,获得了神经球蛋白基因的表达序列,为以后的研究提供了重要的实验材料。 (二)大鼠神经球蛋白基因的真核表达载体构建将得到的神经球蛋白基因序列亚克隆入pCDNA3.1(+)载体中,并通过双酶切和测序确定序列和阅读框正确。结果:酶切片段和测序表明插入片段序列正确。结论:成功构建了神经球蛋白真核表达载体。 (三)大鼠神经球蛋白的原核表达及多克隆抗体制备将神经球蛋白基因序列亚克隆入pET-28a(+)载体中,通过双酶切和测序确定序列和阅读框正确。转化大肠杆菌BL21菌株,获得可溶性表达产物,经鉴定、纯化后免疫新西兰兔,分离血清,ELISA法测定抗体效价。结果:神经球蛋白多克隆抗体效价达1∶100000。结论:成功制备了兔抗神经球蛋白的多抗,为以后的研究提供了重要的实验材料。 二、大鼠局灶性脑缺血模型的建立 40只雄性Wistar大鼠随机分为常规线栓组和改良线栓组,每组20只。线栓法制备右侧大脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion MCAO)致局灶性脑缺血模型。观察改良线栓对总体手术时间、术中颈总动脉血流阻断时间、线栓误入翼腭动脉(pterygopalatine artery,PPA )几率(PPA误栓率)和模型成功率的影响,并通过神经行为学评分、氯化四氮唑(TTC)染色和磁共振检测等方法评价该模型的稳定性和可靠性。结果:改良线栓组比常规线栓组明显缩短了总体手术时间和术中颈总动脉血流阻断时间,降低了线栓误入PPA的几率,模型成功率高,稳定可靠。结论:改良线栓可增加模型成功率,提高局灶脑缺血模型的稳定性和可靠性。 三、重组质粒pCDNA3.1(+)/Ngb对大鼠脑缺血神经细胞保护作用的研究 54只雄性大鼠随机分为生理盐水组、空质粒组和重组质粒pCDNA3.1(+)/Ngb组,每组18只,分别在皮质区两部位注射生理盐水、空质粒pCDNA3.1(+)和重组质粒pCDNA3.1(+)/Ngb,并在注射后24h采用改良线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血24h模型。采用TTC染色、原位细胞凋亡检测、间接免疫荧光法和Western blot检测各组大鼠脑梗死面积,神经细胞凋亡状况和bcl-2蛋白表达变化。结果:经重组质粒pCDNA3.1(+)/ Ngb处理的大鼠,其脑梗死面积和注射处缺血半暗带凋亡细胞数较其他两组显著减少(P0.01),注射处缺血半暗带bcl-2阳性细胞面积百分比显著提高(P0.01),bcl-2蛋白的表达上升约40%~50%。结论:质粒pCDNA3.1(+)介导大鼠神经球蛋白基因转入脑内可通过上调bcl-2基因表达抑制局灶性脑缺血神经细胞凋亡,对局灶性脑缺血发挥保护作用。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2007
【分类号】:R743.3

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 曲伸,高桂枝;神经营养因子与中枢神经系统疾病[J];第二军医大学学报;2000年05期
2 许家军,陈尔瑜,路长林,何成;重组睫状神经营养因子对受损周围神经施万细胞相关基因表达的作用[J];解剖学报;2004年05期
3 孙晋浩,杨琳,高英茂;bFGF和EGF对胚胎神经干细胞分化为神经元及神经胶质细胞的影响[J];解剖学杂志;2002年03期
4 刘昊;;脑红蛋白的研究进展[J];华北煤炭医学院学报;2006年06期
5 葛少华,杨丕山;碱性成纤维细胞生长因子对牙周细胞生物学活性的影响[J];上海口腔医学;2001年01期
6 孙健伟,韩洪彦,徐文琳,王春丽,王航雁,徐淑玲,杨建萍,张家洁,于凤琴,张成岗;大鼠脑红蛋白(NGB)可溶性原核表达和单克隆抗体制备及鉴定[J];中国生物化学与分子生物学报;2003年06期
7 陈静;李树清;;影响局灶性脑缺血实验的有关因素[J];微循环学杂志;2006年02期
8 李培建,李兵仓;神经营养因子的生物学作用及其应用[J];现代康复;2001年01期
9 孙晋浩,杨琳,高英茂,李振华,杨振刚;中枢神经系统再生的可能性:碱性成纤维生长因子和表皮生长因子对胚胎神经干细胞生长分化的影响[J];现代康复;2001年22期
10 何志义,陈晏,孟祥亚,赵晶,欧阳嶷,鲁润铭;质粒pLXSN介导人bcl-2 cDNA抑制局灶性脑缺血大鼠神经细胞凋亡[J];中华神经科杂志;2003年05期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 谢永芳,舒坤贤,梁亦龙,袁帅,张继承;小鼠胚胎发育中期肠细胞增殖与凋亡的研究[J];癌变.畸变.突变;2005年01期
2 王子良,许丽艳,李恩民;质粒制备和反应温度对嵌套缺失技术的影响[J];癌变.畸变.突变;2005年02期
3 康振桥;季艳霞;杨志勇;苏光;崔彦芝;;血管内皮生长因子亚型在人乳腺癌细胞中的表达差异[J];癌变.畸变.突变;2006年03期
4 安刚;黄天华;谢庆东;王德刚;;pCXN2-mIZUMO对C57BL/6小鼠生育能力的影响[J];癌变.畸变.突变;2007年04期
5 朱斌;杨罗艳;赵晓昆;;膀胱癌多药耐药基因MDR-1与金属硫蛋白-3表达的关系[J];癌变.畸变.突变;2007年05期
6 毕玉平,廖俊杰,单雷,王兴军,徐平丽;番茄双抗TMV和CMV基因工程的研究[J];山东农业科学;1997年06期
7 单雷,毕玉平,王兴军,徐平丽,李广存;双抗TMV和CMV转基因番茄后代的遗传分析[J];山东农业科学;1998年04期
8 葛宏华,孙莉宁,张其瑞;家蚕血淋巴蛋白的发育变化和BmLSP的纯化[J];安徽大学学报(自然科学版);2001年03期
9 王北艳;曹宁;汤晖;;苜蓿中华根瘤菌电转条件的优化[J];安徽农学通报;2008年11期
10 刘可杰,吕淑霞,沈世华;FaDREB1基因RNAi的植物表达载体的构建[J];安徽农业科学;2005年07期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 王春花;成军;郎振为;吴煜;杨艳杰;张黎颖;刘妍;;基因表达谱芯片技术筛选XTP3蛋白反式调节基因[A];第一届全国人工肝及血液净化学术年会暨全国人工肝及血液净化攻关协作组成立大会论文集[C];2004年
2 唐南洪;王晓茜;李秀金;陈燕凌;;构建特异高表达人谷氨酰胺合成酶基因(hGS)的肝细胞[A];第三届全国重型肝病及人工肝血液净化学术年会论文集(上册)[C];2007年
3 樊继德;孔庆国;张梅;于喜艳;;子房注射法获得转基因甜瓜植株[A];中国园艺学会第七届青年学术讨论会论文集[C];2006年
4 薛伟;林彤;张智葆;;急性脑梗塞溶栓成功1例[A];第二十一届航天医学年会暨第四届航天护理年会论文汇编(下册)[C];2005年
5 商庆龙;谷鸿喜;;HPV16 L1蛋白在大肠杆菌中的表达、纯化及免疫原性研究[A];庆祝黑龙江省免疫学会成立十周年(1993—2003)论文集[C];2003年
6 陈振文;赵太云;孙贺娟;路静;王迎;孟霞;曹争和;王钜;;微卫星DNA与生化标记分析对长爪沙鼠群体遗传分析的比较[A];中国实验动物学会第七届学术年会论文集[C];2006年
7 吴晓冬;杨绍娟;朱辉;;Cspase抑制剂减轻大鼠局灶性脑缺血损伤[A];第九届中国实验动物科学年会(2010新疆)论文集[C];2010年
8 王革;王妍;何凌冰;乔刚;朱一松;王君艳;;酵母分泌表达重组人神经生长因子[A];山东省药学会2006年生化与生物技术药物学术研讨会论文集[C];2006年
9 任华;顾建华;孙竹筠;沈万赟;吴鹰;周忠良;;RT-PCR法检测斑马鱼(Danio rerio)卵黄蛋白原mRNA表达[A];2005年上海市动物学会学术会议论文集[C];2005年
10 马珺;陈云霜;王爱善;李仲逵;;珍稀鸟类东方鹳的性别鉴定[A];2005年上海市动物学会学术会议论文集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 贺民;曲古抑素A(TSA)预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的脑保护作用及机制研究[D];中南大学;2011年
2 朱汉祎;椒苯酮胺对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制研究[D];南方医科大学;2011年
3 魏朝明;中国螽(虫斯)总科昆虫的RAPD分析研究[D];陕西师范大学;2000年
4 贾永清;表达禽流感病毒HA基因重组禽痘病毒的构建及其免疫效力的研究[D];东北农业大学;2000年
5 姜永厚;新城疫病毒F基因与鸡IL-2重组DNA疫苗的研究[D];东北农业大学;2000年
6 崔俊;c-fms癌基因异常激活机制及携带AFP增强子反义c-fms与肝癌的研究[D];第一军医大学;2000年
7 陈烨;幽门螺杆菌粘附素HpaA的克隆、表达及其免疫原性和保护性研究[D];第一军医大学;2000年
8 刘明;H5和H7亚型禽流感分子防制技术的研究[D];中国农业科学院;2000年
9 姚乌兰;多粘类芽孢杆菌WY110抗菌蛋白的制备及其基因克隆和表达[D];中国农业科学院;2000年
10 叶纨芝;白菜细胞核雄性不育相关基因mf-CYP450的分子鉴定、克隆和序列分析[D];浙江大学;2001年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 李薇婕;西洋参茎叶皂苷对局灶性脑缺血大鼠BDNF和GDNF表达的影响[D];黑龙江中医药大学;2010年
2 穆静丽;偏瘫一号方治疗气虚血瘀型急性期脑梗死临床观察[D];山东中医药大学;2010年
3 燕明宗;大蒜素治疗伴有高同型半胱氨酸血症的脑梗死风痰瘀阻证的临床疗效评价研究[D];山东中医药大学;2008年
4 王尧;脑血通鼻腔喷雾乳剂抗脑缺血的作用研究[D];成都中医药大学;2010年
5 岑琳;灯盏细辛预处理对大鼠局灶性脑缺血再灌注后细胞凋亡及SOCS-3表达影响的实验研究[D];泸州医学院;2011年
6 王丹;碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞多配体蛋白聚糖-4含量的影响[D];吉林大学;2011年
7 任晋婷;北京市区县基层中医药防治缺血性中风方案的临床研究[D];北京中医药大学;2011年
8 李静;缺血后适应对大鼠缺血再灌注损伤的血脑屏障保护作用[D];昆明医学院;2011年
9 赖宝林;芎冰微乳鼻腔给药的脑靶向性及脑局部PK-PD结合模型研究[D];广州中医药大学;2011年
10 郭丽蓉;芎冰鼻腔喷雾剂的制备及质量标准研究[D];广州中医药大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李东亮,程晓虹,沈虹,华仲蔚,李玉书;大鼠大脑中动脉可逆性阻塞的实验研究[J];动物学报;1993年02期
2 曹秋云,潘旭东;线栓法大鼠大脑中动脉闭塞模型的研究进展[J];滨州医学院学报;2000年01期
3 赵云富,姜晓钟,胡世辉,刘渊,宋朝佑;三叉神经痛患者血液P物质及其临床意义[J];第二军医大学学报;2000年01期
4 赵云富,姜晓钟,韩玉升;三叉神经痛患支的电镜观察[J];第二军医大学学报;1998年04期
5 邓美玉,张成岗,王航雁,李林,王春丽,周婉琼;免疫组织化学方法检测脑红蛋白在大鼠中枢神经系统的分布[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2002年03期
6 王特为,王廷华,刘芬,吴林艳;睫状神经营养因子的研究进展[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2002年04期
7 张利能,李树清;树鼩脑血栓梗塞区局部脑血流的变化[J];基础医学与临床;2000年04期
8 邓美玉,张成岗,王航雁,李林,王春丽,周婉琼;脑红蛋白mRNA在大鼠脑内的定位[J];解剖学报;2003年01期
9 许家军,何成;睫状神经营养因子促进大鼠坐骨神经运动轴突再生[J];解剖学杂志;1995年05期
10 马常升,马文领,戴维国,葛莉,杨天祝;插线法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的研究[J];解剖学杂志;1999年03期
【相似文献】
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1 董恺;张愚;;一种新的将神经球分散为单细胞悬液的方法[J];首都医科大学学报;2006年05期
2 宫晓洁;孙莉;黎靖宇;袁路;刘琦;陈维平;;昆明种小鼠胚胎神经干细胞的分离及培养[J];中国组织工程研究与临床康复;2008年08期
3 李进;洪光祥;康皓;陈振兵;陈燕花;李涛;;成年大鼠骨骼肌肌源性干细胞向神经细胞的分化[J];华中科技大学学报(医学版);2008年04期
4 郑佳坤,杨立业,惠国桢;人类神经干细胞的长期培养和传代[J];中山医科大学学报;2002年06期
5 吴家华;罗焕敏;肖美玲;章佩芬;高勤;翁文;肖飞;刘薇;余锐;;骨骼肌提取液促进体外培养神经干细胞增殖作用研究[J];中国药理学通报;2006年07期
6 吴迪;岳峰;关云谦;张愚;;食蟹猴脑室下区成体神经前体细胞培养及鉴定[J];中华神经医学杂志;2006年06期
7 刘芳;许家军;郭金萍;袁建明;蔺海燕;;大鼠受损视神经中神经前体细胞的变化及预变性腓总神经的调节[J];神经解剖学杂志;2008年03期
8 刘天庆;戴明舒;葛丹;李香琴;马学虎;崔占峰;;神经球内神经干/祖细胞活性与代谢研究[J];大连理工大学学报;2008年06期
9 刘薇;肖美玲;吴家华;罗焕敏;;脑组织提取液促进体外培养神经干细胞增殖[J];中国病理生理杂志;2006年03期
10 赖平红;唐仕波;林少芬;朱晓波;高艺;孟晶;;全神经球贴壁培养法体外长期扩增视网膜前体细胞[J];眼科学报;2006年02期
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1 郑可;葛丹;刘天庆;;不同培养方式扩增神经干细胞的比较[A];第一届全国化学工程与生物化工年会论文摘要集(下)[C];2004年
2 赛克;陈忠平;WK Alfred Yung;Fred Lang;Waldemar Priebe;Howard Colman;;新型STAT3信号转导通路抑制剂WP1193在体外对脑肿瘤干细胞生物学特性影响的研究[A];中国医师协会神经外科医师分会第四届全国代表大会论文汇编[C];2009年
3 李雅莉;杨潘;李林;;淫羊藿苷对体外培养人胚胎神经干细胞增殖的影响[A];2009全国抗衰老与老年痴呆学术会议论文汇编[C];2009年
4 许勇峰;张成;;大鼠脂肪干细胞分化为功能性雪旺细胞样细胞[A];2009年浙江省神经病学学术年会论文汇编[C];2009年
5 ;其他[A];中国解剖学会2008年年会论文文摘汇编[C];2008年
6 李力;万琪;;小鼠神经干细胞培养及缺血神经元对其增殖、分化的影响[A];中华医学会第七次全国神经病学学术会议论文汇编[C];2004年
7 肖岚;Devon Ric;Xinmin Li;;喹的平促进少突胶质细胞分化及髓鞘形成的细胞培养研究[A];2007年中国解剖学会第十届全国组织学与胚胎学青年学术研讨会论文摘要汇编[C];2007年
8 李仲荣;朱利斌;刘征吉;夏立广;李东;陈肖鸣;;肠神经干细胞增殖和分化特性研究[A];中华医学会第八次全国小儿外科学术会论文集[C];2010年
9 ;神经发育、损伤和再生[A];中国解剖学会2006年年会论文文摘汇编[C];2006年
10 蒋国平;高建平;马岳峰;江观玉;;骨髓间充质干细胞来源的神经干样细胞对急性重症一氧化碳中毒大鼠脑白质结构的重塑[A];2009年浙江省急诊医学学术年会论文汇编[C];2009年
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1 衣晓峰通讯员 陈英云;小神经球传代可扩充干细胞来源[N];健康报;2007年
2 衣晓峰陈英云;以小神经球传代法扩充干细胞来源[N];中国医药报;2007年
3 李贤仁 曙光;组织工程学制造人体器官的工厂[N];科技日报;2000年
4 吕斌;湖南湘雅医院发现肿瘤干细胞[N];医药导报(中药报);2004年
5 北京康复中心神经外科 黄红云;神经干细胞之谜[N];健康报;2008年
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1 田永胜;小鼠听囊细胞的培养、自然分化、移植与小鼠听觉剥夺后蜗神经核可塑性的研究[D];中国协和医科大学;2008年
2 李听松;持续惊厥后大鼠海马神经干细胞激活反应及相关调控因素研究[D];重庆医科大学;2008年
3 齐玲;胶质母细胞瘤及其干细胞抵抗TRAIL诱导凋亡分子机制的研究[D];吉林大学;2009年
4 张月杰;刺参岩藻多糖对神经干/前体细胞的增殖作用及其机制研究[D];山东大学;2010年
5 申丽红;人参皂甙Rg1对海马神经前体细胞增殖能力的影响及其机制研究[D];中国协和医科大学;2003年
6 王存祖;胶质瘤中脑肿瘤干细胞蛋白质组学和基因组学研究[D];南京医科大学;2007年
7 崔晓萍;Beta-catenin信号在低氧条件下新生小鼠海马神经干细胞增殖中的作用及机制[D];第三军医大学;2007年
8 李勇;端粒酶基因与大鼠胎儿神经干细胞永生化的研究[D];西北农林科技大学;2007年
9 金进明;GFP~+-大鼠胚胎脊髓源性神经干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的实验研究[D];复旦大学;2008年
10 赵楠;嗅鞘细胞及其表达的NGF和BDNF对神经干细胞增殖分化的影响[D];昆明医学院;2007年
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1 梁步猛;H-IL-6对新生大鼠海马神经干细胞增殖和分化作用的影响及其机制的探讨[D];浙江大学;2004年
2 侯颖;神经干细胞低温保存的研究[D];大连理工大学;2006年
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4 石颖;神经干细胞的玻璃化冷冻保存研究[D];大连理工大学;2009年
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6 万俊明;新型多肽神经组织工程支架材料及神经干细胞在其表面生长分化的实验研究[D];南昌大学;2009年
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8 唐艳平;大鼠脂肪基质细胞的分离培养及二步法诱导分化为神经细胞的实验研究[D];南方医科大学;2009年
9 杨瑶斐;IL-6受体的存在方式对神经元IL-6信号转导的影响[D];浙江大学;2008年
10 张勇刚;人骨髓间充质干细胞对神经干细胞增殖与分化培养的影响[D];四川大学;2007年
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