收藏本站
《重庆医科大学》 2008年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

rhEPO对创伤性脑损伤保护作用的实验研究

廖正步  
【摘要】: 创伤性脑损伤(Traumatic Brain Injury TBI)致死、致残率高,严重威胁人类的生命与生存质量。颅脑损伤后药物治疗的匮乏始终是大家关注的焦点。到目前为止,已经完成和即将完成的数百种药物治疗颅脑损伤的临床多中心随机双盲研究的结果表明,还没有一种药物具有确切的临床疗效。而最近的大量动物实验研究表明促红细胞生成素(erythrooietin,EPO)对颅脑损伤有一定的疗效。研究表明rhEPO对脑、脊髓在缺血后再灌注及低氧环境中神经的保护及损伤后修复等研究逐渐引起了人们的兴趣。而rhEPO是否对重型颅脑损伤有神经保护作用,无深入研究及报道。 本研究拟采用Feeney氏法制备重型颅脑损伤模型来评价rhEPO的神经保护作用。首先观察大鼠重型颅脑损伤后EPO及EPOR的变化规律,寻找外源性rhEPO治疗颅脑创伤的理论依据。然后给予外源性rhEPO治疗,观察rhEPO对大鼠重型颅脑损伤后神经功能及脑水肿的改善和凋亡相关蛋白表达的影响,从行为学,形态学和分子生物学等多方面探讨EPO脑保护作用的机制,为进一步研究EPO在颅脑创伤中的神经保护作用寻找理论依据。 一、促红细胞生成素及其受体在脑外伤后的表达及意义 目的观察促红细胞生成素及受体在急性重型脑外伤后大脑皮质内的动态表达规律,并探讨其意义。 方法采用改良的Feeney氏法建立脑外伤模型,采用RT-PCR、western blot及免疫荧光法检测促红细胞生成素(erythropoietin ,EPO)及受体(erythropoietin receptor,EPOR)的mRNA及蛋白的动态表达。 结果EPO在伤后12 h表达升高,至3 d达高峰,5 d降至正常水平。而EPOR在伤后12 h表达升高,至24 h达高峰,3 d、5 d和7 d仍维持在高表达水平,未见减弱。 结论大鼠急性重型颅脑损伤后大脑皮质内EPO短暂升高,而EPOR持续高表达且呈时间依赖性,提示颅脑损伤后外源性EPO能与持续高表达的EPOR结合产生神经保护作用。 二、rhEPO促进颅脑创伤大鼠神经功能障碍改善的实验研究 目的探讨促红细胞生成素对大鼠重型颅脑损伤后神经功能及脑含水量的影响,旨在研究其对重型颅脑损伤是否有神经保护作用。 方法将78只Wistar大鼠随机分为3组:rhEPO治疗组,脑损伤组,假手术组。72只采用改良的Feeney氏法制作重型脑损伤模型。rhEPO组大鼠致伤后即刻及每天腹腔内注rhEPO(5000IU/kg),外伤组给予等量生理盐水。假手术组只行开颅手术操作,余步骤同前;假手术组经腹腔注射等量的生理盐水。在伤后5 h、12 h、24 h、3 d、5 d、7 d六个时间点断头取脑。采用NSS神经功能评分法,评定大鼠神经功能恢复情况;采用干湿重法测量脑含水量,根据公式脑含水量=(湿重一干重)/湿重x 100%,算出脑含水量。HE及NISS染色观察损伤周边区病理改变及神经细胞坏死情况。 结果损伤组NSS评分为1 d: 15.17±2.15; 3 d: 16.01±1.54; 7 d: 12.69±1.60;rhEPO组为1 d: 14.28±1.56; 3 d: 12.42±1.37; 7 d: 6.29±1.25。rhEP治疗组与损伤组有显著性差异(P0.05)。假手术组未见神经功能受损。重型颅脑损伤后3 d损伤组脑含水量为85.58±0.36,rhEPO组为79.57±0.67。rhEPO组与损伤组相比脑水肿有显著性差异(P0.05)。H E染色:脑损伤组伤后5 h损伤灶中心区大量神经元消失,出现较多的红细胞,伴轻度细胞水肿;伤后24 h出现明显的坏死,病灶中心区神经细胞脱失更明显,范围较5 h增大,神经细胞水肿,炎性细胞浸润;伤后7 d见胶质细胞增生。rhEPO组与损伤组比较,坏死区缩小,神经元受损及脑水肿减轻。胶质细胞增生减轻。 结论rhEPO能明显改善大鼠重型颅脑损伤后神经功能症状,减轻损伤周边区脑水肿;初步证实了rhEPO对重型颅脑损伤后脑损伤有明显的神经保护作用。 三、促红细胞生成素对大鼠重型颅脑损伤后神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响 目的通过观察rhEPO对大鼠重型颅脑损伤后神经细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax表达的影响,探讨rhEPO是否能有效地抑制继发性颅脑损伤,抑制神经元的凋亡。 方法实验动物分组、模型制备及用药同第二部分。RT-PCR,Western blot免疫荧光法检测Bcl-2、Bax基因及蛋白表达情况。细胞凋亡原位末端标记(TUNEL)法观察神经元凋亡情况。 结果①脑损伤组Bc1-2mRNA在外伤后5 h弱表达,12 h表达增强,24 h达高峰,3 d降至基础水平;rhEPO组Bc1-2 mRNA在12 h达高峰,24 h、3 d持续高表达;5 d、7 d表达下调但仍高于对照组(P0.05)。②Bcl-2蛋白主要分布在胞浆/胞膜内,在外伤组24 h表达增加,3 d恢复到基础水平;rhEPO组Bc1-2蛋白在24 h达高峰,3 d, 5 d,7 d持续高表达(P0.05)。③Bax表达:脑损伤组在伤后12 h可见Bax蛋白表达,伤后24小时增加缓慢;伤后72 h其数量显著增加,持续高表达一周,而rhEPO治疗组在伤后12 h,24 h和72 h的Bax蛋白表达量与外伤组相比均显著降低(P0.05)。假手术组未见明显bax表达。④Tunel染色:Tunel染色阳性细胞于外伤后5 h即已出现,3 d达高峰,7 d仍有表达;损伤组3 d和7d凋亡细胞数分别为68±7.51和64±5.75;rhEPO组凋亡细胞数分别为32±5.48士106和29±6.51与脑损伤组相比均有显著性差异(P0.05)。假手术组未见细胞坏死和细胞凋亡。 结论rhEPO能明显减少重型颅脑损伤后不同时间点的神经细胞凋亡,上调抗凋亡蛋白Bcl-2和下调促凋亡蛋白bax表达,对大鼠重型颅脑损伤有明显神经保护作用。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R651.15

免费申请
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 鲁红霞;姜荣建;;β-七叶皂甙钠对高血压并发脑出血患者血清水通道蛋白水平的影响[J];重庆医学;2010年02期
2 韩涛;李莹;;急性肝衰竭并发脑水肿研究现状[J];传染病信息;2010年02期
3 芦菲;董力杰;李梅;于鑫岩;宋晓燕;王丹;;促红细胞生成素治疗新生儿缺氧缺血性脑病的临床观察[J];当代医学;2012年11期
4 孙宝迪;刘红梅;聂时南;;限制性液体复苏在创伤失血性休克中的进展[J];东南国防医药;2012年02期
5 李小丽;甘华;常晓东;杜晓刚;;尿毒症患者血清对内皮细胞凋亡的影响及rhEPO的干预作用[J];第三军医大学学报;2009年22期
6 王英爽;高殿文;沙倩;聂庆珠;归东梅;;水通道蛋白4在慢性高眼压模型大鼠视网膜的表达[J];国际眼科杂志;2008年10期
7 徐科君;吴瑞瑾;;水通道蛋白与子宫内膜异位症[J];国际生殖健康/计划生育杂志;2009年06期
8 邓金木;汪峰;程远;;caveolin-1在血脑屏障开放中作用的研究[J];国际神经病学神经外科学杂志;2010年01期
9 侯景明;黎海涛;;血脑屏障破坏与脑水肿发生研究进展[J];国际神经病学神经外科学杂志;2010年03期
10 刘泰;李品纯;;脑出血后脑水肿的形成机制与中医药实验研究近况[J];广西中医药;2011年01期
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 黄一鸣;水通道蛋白3在表皮生长因子诱导人胃腺癌细胞增殖、迁移中的作用[D];南京医科大学;2010年
2 刘伟;厄贝沙坦预处理对缺血再灌注大鼠血脑屏障的影响及机制研究[D];南京医科大学;2010年
3 吴薇;D-半乳糖致小鼠脑衰老早期阶段星形胶质细胞的活化及其作用机制[D];南京医科大学;2010年
4 宋国强;牦牛AQP4基因的克隆及其对高原脑水肿抗性的表达机理[D];兰州大学;2011年
5 杨雷方;不同剂量地塞米松对液压冲击伤脑水肿AQP4表达的影响[D];河北医科大学;2011年
6 李晓茜;牛磺酸对重度颅脑创伤大鼠脑组织AQP4/牛磺酸转运体基因表达的影响[D];天津医科大学;2011年
7 赵明;慢性砷中毒大鼠背根神经节NK-1的表达[D];石河子大学;2011年
8 范蕾;撞钉长度对脑创伤模型的影响及创伤性脑水肿与AQP4相关性研究[D];大连医科大学;2011年
9 王昌超;红细胞生成素(EPO)与甲泼尼龙(MPSS)联合应用对损伤星形胶质细胞影响的研究[D];苏州大学;2011年
10 李军根;血浆活化蛋白C、血栓调节蛋白动态变化对严重多发伤患者预后的影响[D];苏州大学;2011年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 杨成;赵强;夏利民;王宜青;陈安清;王哲;;凋亡机制在风湿性心脏病二尖瓣狭窄肺动脉高压形成中的作用[J];中国临床医学;2005年05期
2 李晓东;李英;丁新国;;甲状旁腺素对人肾小管上皮细胞凋亡的影响[J];免疫学杂志;2009年06期
3 江明友;万明发;洪钟亮;;葛根素注射液对大鼠单侧睾丸扭转后侧睾丸Bcl-2和Bax基因表达的影响[J];福建中医药;2010年04期
4 刘超,吴基良,张嫦娥,蔡飞;补阳还五汤对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡的影响[J];中国老年学杂志;2005年07期
5 祝伟;吕青;陈华文;万磊;周代星;杨光田;;己酮可可碱对脓毒症大鼠肠损伤保护作用的机制[J];中国医院药学杂志;2010年15期
6 原相丽;刘珂;毛兴爱;;促红细胞生成素对大鼠脑缺血再灌注神经元凋亡、bcl-2和bax表达的影响[J];新乡医学院学报;2007年01期
7 陈达;刘艳;朱杰;王斯闻;;依达拉奉对脑出血大鼠神经保护作用的实验研究[J];中国现代医学杂志;2009年04期
8 张林明;马静萍;刘艳明;杨晓;陈妍;李晓勇;;辛伐他汀预处理对脑缺血再灌注损伤Bcl-2和Bax表达的影响[J];神经解剖学杂志;2010年01期
9 杨卫民;周农;施雪英;;雌激素对谷氨酸诱导大鼠脑皮质细胞凋亡的影响[J];安徽卫生职业技术学院学报;2010年05期
10 王超;马静萍;;粒细胞集落刺激因子对大鼠脑缺血再灌注后Bcl-2及Bax表达的影响[J];中国医疗前沿;2011年04期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 孟根花;李浩军;乌仁图雅;;珍珠丸对兔视网膜缺血再灌注的神经保护作用及Bcl-2基因的表达[A];内蒙古医学院中蒙医学院50周年校庆论文专辑(蒙医蒙药)[C];2006年
2 阿依木古丽;蔡勇;范光丽;陈士恩;;菟丝子提取物对小脑中Bcl-2和Bax蛋白表达的影响[A];中国畜牧兽医学会动物解剖学及组织胚胎学分会第十四次学术研讨会论文集[C];2006年
3 彭解英;张睿;张凯;马立为;;口腔黏膜下纤维化中细胞凋亡及Bcl-2和Bax的表达[A];第七届全国口腔黏膜病暨第五届口腔中西医结合大会论文汇编[C];2008年
4 牟朝晖;周和平;张仙土;吴剑;杨明;;标准大骨瓣减压开颅术后神经元细胞凋亡的实验研究[A];2009年浙江省神经外科学术年会论文汇编[C];2009年
5 廖红;;肝素对大鼠心肺复苏效果及神经细胞Bcl-2、Bax表达的影响[A];2009年西部麻醉学术论坛论文汇编[C];2009年
6 于庆生;余宏亮;潘晋方;王汉明;帅剑锋;张琦;;芪黄煎剂对缺血-再灌注大鼠肠黏膜上皮细胞Bcl-2、Bax和Caspase-3,9mRNA表达的影响[A];2011年中医外科学术年会论文集[C];2011年
7 吴宝;尚菊菊;刘红旭;;参元丹后处理对体外心肌细胞缺血/再灌注模型细胞凋亡及相关基因Bcl-2、Bax表达的影响[A];中华中医药学会心病分会全国第十二次学术年会暨中华中医药学会心病分会换届选举工作会议论文精选[C];2010年
8 吴宝;尚菊菊;刘红旭;;参元丹后处理对体外心肌细胞缺血/再灌注模型细胞凋亡及相关基因Bcl-2、Bax表达的影响[A];第十次中国中西医结合学会心血管病学术大会暨第五次江西省中西医结合学会心血管病学术大会论文汇编[C];2010年
9 孙贻安;;温阳散结法对乳腺增生病Bcl-2、Bax表达的影响研究[A];2011年中医外科学术年会论文集[C];2011年
10 李卫林;李峰;木海琦;杨森;王怡君;南存金;陈映鹤;;芹菜素对人前列腺癌裸鼠移植瘤Bax和Bcl-2表达的影响[A];华东六省一市泌尿外科学术年会暨2011年浙江省泌尿外科、男科学学术年会论文汇编[C];2011年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 陆志城;让“一部分人”先好起来[N];医药经济报;2002年
2 王军;陈喜军;解放军第三医院颅脑损伤研究获奖[N];中国医药报;2004年
3 陆文;凋亡细胞 被挤出上皮组织[N];医药经济报;2002年
4 中南大学湘雅二医院康复科高压氧室 王金华;高压氧治颅脑损伤效果佳[N];大众卫生报;2001年
5 姚保泰;吴敏;王博;黄连小檗碱抗胃癌机制新阐述[N];中国医药报;2005年
6 洪敏;细胞凋亡研究引人关注[N];中国医药报;2008年
7 特约记者 唐向东;我高原颅脑损伤研究有突破[N];解放军报;2000年
8 第四军医大学第一附属医院神经外科主任医师 贺晓声;颅脑损伤可致颅内积气[N];保健时报;2009年
9 成都军区总医院 顾建文 杨涛;伤员成功救治的启示[N];健康报;2009年
10 喻斌;沈祥春;中药的抗脑缺血作用研究[N];中国医药报;2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 廖正步;rhEPO对创伤性脑损伤保护作用的实验研究[D];重庆医科大学;2008年
2 龙新兵;平衡针疗法对颅脑损伤急性期影响的研究[D];广州中医药大学;2007年
3 刘元元;rhEPO-Fc融合蛋白抗贫血作用及其机制研究[D];复旦大学;2008年
4 张海兰;肛门直肠畸形泄殖腔凋亡及肠管Cajal间质细胞的研究[D];中国医科大学;2007年
5 廖国栋;RGD肽抗纤维连接蛋白介导人膀胱癌细胞化疗抵抗作用及其机制的研究[D];浙江大学;2007年
6 程葆华;高酮饮食及D-β-羟基丁酸对帕金森病模型的作用及其机制[D];山东大学;2008年
7 刘健;萘酰亚胺类化合物诱导肿瘤细胞凋亡的机制[D];延边大学;2008年
8 代吉文;脑缺血预处理对沙土鼠脑缺血再灌注后HSP22表达的影响及其神经保护作用[D];中南大学;2009年
9 乌日罕;蒙古绵羊皮肤毛囊细胞凋亡的研究[D];内蒙古农业大学;2008年
10 胡彬雅;细胞凋亡及相关因子Bax,Bcl-2,Caspase-3在自发性糖尿病小鼠耳蜗损伤中的作用与依达拉奉的干预研究[D];中南大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 陈静;高压氧对脑外伤大鼠海马神经元凋亡的影响[D];华中科技大学;2007年
2 袁荣华;蒙古绵羊卵巢发生中bcl-2和bax表达的研究[D];内蒙古农业大学;2007年
3 陈达;促红细胞生成素对大鼠脑出血灶周组织Bcl-2、Bax的表达与神经元凋亡的实验研究[D];中国医科大学;2008年
4 张睿;口腔粘膜下纤维化及其癌变组织中细胞凋亡及Bcl-2、Bax的表达研究[D];中南大学;2008年
5 刘阳;肝细胞生长因子对受损面神经神经元凋亡bcl-2,Bax表达影响的试验研究[D];重庆医科大学;2005年
6 李琳;经皮电刺激小脑和超短波对局灶性脑缺血再灌注损伤治疗比较[D];中国医科大学;2005年
7 房清丽;促红细胞生成素对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤保护作用的研究[D];山西医科大学;2009年
8 董松庚;Bcl-2、Bax及细胞凋亡在肢体缺血再灌注损伤时软骨中的表达及意义[D];中南大学;2009年
9 杨颖;5-氟尿嘧啶与甲酰四氢叶酸钙联合用药对乳腺癌细胞凋亡的影响[D];辽宁师范大学;2009年
10 代吉文;大鼠脑缺血预适应对血浆皮质醇含量及Bcl-2、Bax表达的影响[D];郑州大学;2006年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026