收藏本站
《重庆医科大学》 2008年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

三种嗜神经病毒的核酸检测方法和初步流行病学研究

曾志磊  
【摘要】: 目的: 本研究拟建立一步法实时RT-PCR检测Nipah病毒(Nipah virus,NiV)、Hendra病毒(Hendra virus,HeV)和西尼罗病毒(West nile virus,WNV)的方法,用于三种嗜神经病毒的快速、准确、敏感、特异的定量检测,为大规模流行病学监测提供一种简便易行的检测手段,并使用所建立的嗜神经病毒检测方法,对采集自中国重庆、四川、贵州和广西地区的猪外周血样本进行NiV和HeV检测,以获得我国西部地区的NiV和HeV的病毒流行病学资料,评估我国西部地区的生物安全现状。 方法: 1根据GenBank提供的基因序列,针对三种嗜神经病毒基因的保守区域(NiV N基因、HeV N基因和WNV E基因),设计并合成特异性引物和荧光标记TaqMan探针。从澳大利亚动物健康实验室(AAHL)及中国军事医学科学院(AMMS)惠赠的分别含有目的基因的质粒出发,利用PCR方法扩增获得目的基因,克隆至pBS-T载体进行体外转录,将得到的RNA纯化并使用RiboGreen方法进行定量后作为阳性标准品。分别建立三种嗜神经病毒的一步法实时RT-PCR方法并分析敏感性和特异性。 2自2007年6月起,采集自中国西部地区重庆、四川、贵州和广西省市饲养的猪外周血标本320份,使用密度梯度离心法分离外周血淋巴细胞,应用Trizol法提取细胞总RNA。用已建立的NiV和HeV一步法实时RT-PCR检测方法,对RNA样本进行NiV和HeV检测。对阳性样本进行PCR产物序列鉴定、序列分析等研究,在可能的情况下进行病毒分离培养,并提交流行病学调查报告。 结果: 1对所设计的NiV和HeV引物和探针序列,登录美国国立卫生研究院网站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)进行Blast检索,所设计的引物和探针可以与所有已公布的NiV病毒株(DQ508095,AF376747,AF212302,AY029768,AY029767,AJ627196,AJ564623,AJ564622,AJ564621,AY858110和AY988601)序列完全匹配。不与Hendra病毒株(AF017149)产生阳性结果。本研究建立NiV和HeV一步法实时RT-PCR方法的最低检出限即敏感性分别为1.7×10~2copies/μl和2.6×10~1copies/μl,标准曲线的定量范围分别为1.7×10~2~1.7×10~6copies/μl、2.6×10~1~2.6×10~7copies/μl,相关系数R~2分别为0.9998和0.9896,不与其他病毒发生非特异反应。 2对所设计的WNV引物和探针序列,登录美国国立卫生研究院网站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/)进行Blast检索,所设计的引物和探针可以与已公布的WNV病毒株((EU394703、AY262283、DQ377178、DQ374650、AF404753、AF481864、EF571854、EF530047、EU155484、EF657887、DQ983578、EF431693、DQ666448等)列完全匹配,不与其他病毒匹配。本研究建立WNV一步法实时RT-PCR检测方法的最低检出限即敏感性为3.6×10~2copies/μl,标准曲线的定量范围为3.6x10~7~3.6×10~2copies/μl,相关系数R~2为0.97534,不与其他病毒发生非特异反应。 3对采集自中国西部地区(重庆、四川、贵州和广西)饲养的猪的样本进行NiV和HeV核酸检测,成功进行了一步法实时RT-PCR反应,所有样本荧光扩增曲线均无Takeoff点,曲线平坦,判为阴性结果。 结论: 1本研究构建了NiV N基因、HeV N基因和WNV E基因核酸定量检测用的RNA标准品,并建立了NiV、HeV和WNV三种嗜神经病毒的一步法实时RT-PCR检测方法。该方法检测快速,具有较好的灵敏性和特异性,不易出现污染引起假阳性结果,适于流行病学研究和病毒性疾病的诊断。 2初步流行病学研究提示我国西部地区(重庆、四川、贵州、广西)饲养的猪中可能不存在NiV和HeV感染,上述地区出现NiV和HeV爆发的可能性较小。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R181.3

手机知网App
【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 张体银;白泉阳;王武军;张志灯;郑腾;林素洁;;尼帕病毒检测技术的研究进展[J];黑龙江畜牧兽医;2014年13期
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 陈晓;中国西部地区WNV感染初步流行病学研究以及WNV和NiV主要蛋白的免疫信息学分析[D];重庆医科大学;2009年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 邓永强,姜涛,于曼,陈水平,秦成峰,秦鄂德;Hendra病毒的实时PCR检测方法的建立[J];军事医学科学院院刊;2005年02期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 高玉然;西尼罗病毒与流行性乙型脑炎病毒感染的流行病学调查及其免疫交叉保护作用研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2006年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 解莉婧;刘宛;李淑芹;李培军;陈静;;DNA分子标记技术在环境污染物检测中的应用[J];东北农业大学学报;2007年06期
2 赵民;陈创夫;盛今良;郭志儒;;新疆地区蚊类携带西尼罗病毒情况调查研究[J];动物医学进展;2008年03期
3 汪玉萍;钱炜林;陈伟强;;尼帕病毒检测技术研究进展[J];广东农业科学;2011年14期
4 徐云庆;刘春晓;顾大勇;曹鑫;史蕾;赵纯中;;西尼罗热传入风险评估模型的建立[J];中国国境卫生检疫杂志;2008年06期
5 谢金文;吕素芳;沈旭;沈志强;;尼帕病毒流行病学研究进展[J];中国畜牧兽医;2009年02期
6 孙后超;徐鸣明;邓永强;何丰;冯裕星;胡子成;秦鄂德;谢鹏;秦成峰;;西尼罗病毒一步实时RT-PCR检测准确度评价[J];解放军医学杂志;2010年06期
7 金明兰;鲁会军;;尼帕病毒研究进展[J];吉林畜牧兽医;2010年08期
8 姜涛;邓永强;于曼;陈水平;秦成峰;秦鄂德;;3种重要脑炎病毒的多重RT-PCR检测方法的建立[J];军事医学科学院院刊;2007年03期
9 孙志明;周伟光;陈玉惠;高晶;希尼尼根;关平原;;牛传染性鼻气管炎病毒gE基因SYBR Green Ⅰ荧光定量PCR检测方法的建立[J];内蒙古农业大学学报(自然科学版);2012年03期
10 吴岳;;我国口岸尼帕病毒病风险预警及防控措施探讨[J];口岸卫生控制;2015年03期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 方美玉;任瑞文;刘建伟;;西尼罗病毒病研究进展[A];新发传染病防治学习研讨会论文集[C];2008年
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 肖昌;亨得拉和尼帕病毒结构蛋白的表达及抗原表位研究[D];吉林大学;2006年
2 史利军;西尼罗病毒核酸及抗体检测体系的建立与评价[D];华中农业大学;2008年
3 陈晓;中国西部地区WNV感染初步流行病学研究以及WNV和NiV主要蛋白的免疫信息学分析[D];重庆医科大学;2009年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 蔡绪禹;10种致脑炎病毒的基因芯片检测方法建立[D];中国农业科学院;2011年
2 刘勇军;尼帕病毒F1基因、G基因的表达及特异性高免血清制备[D];吉林大学;2007年
3 郭丽霞;尼帕病毒荧光RT-PCR检测方法的建立[D];扬州大学;2007年
4 周晓俊;黄病毒通用引物RT-PCR以及Real-Time PCR方法的建立并应用于蚊虫检测[D];第二军医大学;2007年
5 赵民;新疆地区蚊类携带西尼罗病毒、甲病毒调查及莱姆病血清学初步调查[D];石河子大学;2008年
6 刘妍汐;新疆伊犁地区动物尼帕病毒感染情况研究[D];重庆医科大学;2008年
7 翟红;新疆伊犁地区动物西尼罗病毒感染情况的调查研究[D];重庆医科大学;2008年
8 孙庆歌;六种动物源性人兽共患病病毒基因芯片检测方法的研究[D];中国农业科学院;2009年
9 郑文亚;乙型脑炎病毒四川株的分离鉴定及其生物学特性研究[D];四川农业大学;2010年
10 何丰;新疆伊犁地区动物脑内博尔纳病病毒和西尼罗病毒感染的分子流行病学研究[D];重庆医科大学;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 吴晓丰,许金俊,沈毅诚,孙蓓玲;一种新的人兽共患副黏病毒病——尼帕病毒病[J];动物医学进展;2005年02期
2 周康凤;姜立民;庄昉成;;西尼罗河病毒[J];国际病毒学杂志;2006年04期
3 崔君兆;刘明团;古漓;谢鸿勤;;广西沙田、大路居民首次登革流行后2~4年登革血清流行病学监测及西尼罗阳性抗体的发现[J];广西医学;1987年05期
4 俞永新;西尼罗热流行现状及实验诊断[J];疾病控制杂志;2003年03期
5 邓永强;秦鄂德;;虫媒黄病毒包膜E蛋白的研究进展[J];军事医学科学院院刊;2006年06期
6 姜涛;邓永强;于曼;陈水平;秦成峰;秦鄂德;;3种重要脑炎病毒的多重RT-PCR检测方法的建立[J];军事医学科学院院刊;2007年03期
7 吴玉章,朱锡华;一种病毒蛋白B细胞表位预测方法的建立[J];科学通报;1994年24期
8 郭俊成;;从禽流感看动物疫病与人类的关系[J];现代畜牧兽医;2005年12期
9 毛华伟;赵晓东;;人类偏肺病毒F蛋白的B细胞表位预测[J];免疫学杂志;2006年03期
10 姜焱;张常印;王凯民;张敬友;唐泰山;陈国强;张鹤晓;;检测马西尼罗热病毒抗体的重组E蛋白-ELISA的建立[J];农业生物技术学报;2007年02期
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 杜坚;孙虹;马洪波;;西尼罗病毒实验室诊断[J];中国国境卫生检疫杂志;2005年06期
2 张蓓;实时荧光定量PCR的研究进展及其应用[J];国外医学.临床生物化学与检验学分册;2003年06期
3 俞永新;西尼罗热流行现状及实验诊断[J];疾病控制杂志;2003年03期
4 姜涛,邓永强,范宝昌,于曼,陈水平,秦成峰,祝庆余,秦鄂德;西尼罗病毒Chin-01株基因组编码区序列测定及论著分析[J];军事医学科学院院刊;2003年06期
5 陈继明,孙映雪,王志亮,沈朝建,谢仲伦,王希明;西尼罗病毒严重危害中国的风险评估[J];科学通报;2004年07期
6 熊莉娟,罗端德;两种新发现的脑炎病毒[J];临床内科杂志;2001年04期
7 李玉华,李声友,王洪彬,卢德芬,张静,张学军,姚亚夫,王寿贵;乙型脑炎活疫苗与灭活疫苗诱导小鼠体液和细胞免疫应答的比较[J];中国生物制品学杂志;1999年04期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张孔来,刘民;定性研究方法在流行病学研究中的应用[J];中华流行病学杂志;2000年01期
2 焦富勇,乔荆,周霞,李月华,康华;86例被虐待儿童临床及流行病学研究[J];中华流行病学杂志;2000年05期
3 罗隆明;相关性χ~2检验在流行病学研究中的应用[J];实用预防医学;2001年01期
4 韩晓燕,马瑛,王民宪,侯斌,王大宽,窦连成,李新华;安阳市社区人群肥胖的流行病学研究[J];中国慢性病预防与控制;2001年01期
5 徐斌;成人呼吸窘迫综合征的流行病学研究进展[J];国外医学(流行病学传染病学分册);2001年05期
6 徐德忠,张治英;遥感技术在流行病学研究中的应用[J];华南预防医学;2002年01期
7 黄礼平,唐少令;4133例动物咬抓伤者流行病学研究[J];广西预防医学;2002年06期
8 李继华,张云生;一起爆发疫情的流行病学研究[J];上海预防医学杂志;2002年05期
9 杨晓英;性传播疾病与艾滋病病毒传播关系的流行病学研究进展[J];中国艾滋病性病;2002年05期
10 陈金军,侯金林;严重急性呼吸道综合征的病原学和流行病学研究现状[J];中华传染病杂志;2003年02期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 姜庆五;;流行病学研究进展[A];预防医学学科发展蓝皮书·2008卷[C];2008年
2 王艳红;吕筠;李立明;;流行病学研究[A];2009-2010公共卫生与预防医学学科发展报告[C];2010年
3 丁雷;刘博;;头晕流行病学研究进展[A];世界中联耳鼻喉口腔专业委员会换届大会及第三次学术年会暨中华中医药学会耳鼻喉科分会第十七次学术交流会暨广东省中医及中西医结合学会耳鼻喉科学术交流会论文汇编[C];2011年
4 盛大膺;吴建华;刘淮玉;高捷;;卢湾区办公楼宇职业办公人群不良建筑综合征流行病学研究[A];中华医学会第一届全国公共卫生学术会议暨第四届中国现场流行病学培训项目汇编[C];2009年
5 李宁华;;中国老年人普通疾病的流行病学研究与预防对策(英文)[A];北京论坛(2007)文明的和谐与共同繁荣——人类文明的多元发展模式:“人口发展的多元模式与健康保障”人口分论坛论文或摘要集[C];2007年
6 张路霞;王海燕;;我国慢性肾脏病流行病学研究现状与质控[A];中华医学会肾脏病学分会2006年学术年会专题讲座[C];2006年
7 于国慧;宋文琪;徐樨巍;;北京地区2008-2009年儿童轮状病毒感染性腹泻流行病学研究[A];中华医学会第九次全国检验医学学术会议暨中国医院协会临床检验管理专业委员会第六届全国临床检验实验室管理学术会议论文汇编[C];2011年
8 杨颖;熊习昆;;染发剂致癌致突变效应的实验室和流行病学研究进展[A];中国环境诱变剂学会抗诱变剂和抗癌剂专业委员会第三次全国学术会议、中国毒理学会生化与分子毒理专业委员会第五届学术交流会、贵州省环境诱变剂学会成立大会暨首届学术交流会论文集[C];2004年
9 陈刚;黄延玲;;福建省畲族人群慢性病流行病学研究结果总结[A];中华医学会第十二次全国内分泌学学术会议论文汇编[C];2013年
10 闵莉;李灿东;蔡东华;;不同年龄青少年痤疮发病的流行病学研究[A];中华中医药学会中医诊断学分会2007’年会论文集[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 包晶;我市启动国家前瞻性城乡流行病学研究项目[N];巴彦淖尔日报(汉);2007年
2 方承;省流行病学研究中心建设通过验收[N];福建日报;2008年
3 北京大学第一医院肾内科 张路霞;我学会了坚持[N];健康报;2013年
4 记者 高仲宏;云治厚检查前瞻性城乡流行病学研究工作[N];巴彦淖尔日报(汉);2007年
5 吴志军郝成涛;我国SARS流行病学研究又取得重要进展[N];科技日报;2007年
6 吴志军郝成涛;我国SARS流行病学研究获系列重要进展[N];中国医药报;2007年
7 记者 李天舒;公卫与预防医学学科发展报告出炉[N];健康报;2010年
8 记者 刘旸 张逸之;网传“午休折寿”,专家表示不可信[N];新华每日电讯;2014年
9 ;流行病学研究和临床研究重大课题启动实施[N];中国高新技术产业导报;2003年
10 记者 叶龙杰;超四成不“性”福患者患慢性病[N];健康报;2014年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 曾志磊;三种嗜神经病毒的核酸检测方法和初步流行病学研究[D];重庆医科大学;2008年
2 朱保平;北京市学生吸烟的行为流行病学研究[D];中国协和医科大学;1990年
3 黄平;广东严重急性呼吸综合征突发事件流行病学研究[D];第一军医大学;2006年
4 戴俊明;职业紧张评估及其健康效应的流行病学研究[D];复旦大学;2006年
5 崔颖;广东省东莞市糖尿病视网膜病变流行病学研究[D];南方医科大学;2013年
6 林玲;汕头市澄海区涂城乡常见风湿病流行病学研究[D];汕头大学;2007年
7 钟少波;GIS和遥感应用于传染病流行病学研究[D];中国科学院研究生院(遥感应用研究所);2006年
8 严谨;河南省某村HIV/AIDS社会流行病学研究[D];中南大学;2007年
9 陈祖辉;广州市医院工作场所暴力流行病学研究[D];南方医科大学;2011年
10 张璐璐;老年患者术后认知功能障碍的流行病学研究[D];中国协和医科大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 王丽;我国流行病学研究伦理问题、原则及对策探讨[D];北京协和医学院;2011年
2 姚应水;皖南地区中学生伤害的分布特征及危险因素的流行病学研究[D];安徽医科大学;2002年
3 杨巧红;我国火灾伤害的流行病学研究[D];暨南大学;2005年
4 盛大膺;办公楼宇职业办公人群不良建筑综合征流行病学研究[D];复旦大学;2010年
5 王苓;山西省孕产妇死亡影响因素流行病学研究[D];山西医科大学;2005年
6 安礼;特质怒人群体质与个性特征流行病学研究[D];山东中医药大学;2008年
7 高晓健;大连地区军队老年男性人群慢性肾脏病流行病学研究[D];大连医科大学;2009年
8 王辉;人群慢性非传染性疾病的某些相关因素的流行病学研究[D];安徽医科大学;2003年
9 陈燕珍;中学生行为问题与伤害关系的流行病学研究[D];南方医科大学;2009年
10 宋海晶;国内33家三甲医院ICU呼吸机相关性肺炎的流行病学研究[D];第三军医大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026