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《重庆医科大学》 2008年
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VEGF-A-siRNA和CXCR4-siRNA慢病毒载体的构建及对卵巢癌的基因治疗

康楷  
【摘要】: 目的:构建针对血管内皮生长因子(VEGF)和趋化因子受体4(CXCR4)慢病毒介导的RNA干扰载体,通过体外实验和体内实验观察卵巢癌细胞VEGF和CXCR4表达受抑制后对癌细胞增殖和侵袭转移情况的影响,部分阐明VEGF/CXCR4基因表达被抑制后对卵巢癌的发生与进展的影响,为针对VEGF/CXCR4基因的RNA干扰技术的临床应用奠定基础。 方法:(1)将VEGF基因mRNA和CXCR4基因mRNA作为RNA干扰的靶区,通过E-RNAi网上提供的在线服务,设计多个特异的RNA干扰序列,将其装入含U6和H1启动子的慢病毒载体FIV-based Lentivector Expression System上,构建成抑制VEGF和CXCR4基因表达的RNA干扰(siRNA)表达载体。(2)体外实验中,将上述载体转染人卵巢癌细胞株sw626,通过Real time PCR和Western blot观察干扰载体对VEGF和CXCR4表达的抑制效果;通过CCK8检测对肿瘤细胞增殖的影响;通过重建基底膜实验检测细胞体外侵袭能力的变化。(3)体内实验中,将上述载体转染细胞后注射裸鼠建立卵巢癌模型;通过检测成瘤率、成瘤时间、瘤体大小、绘制生长曲线,观察靶基因表达受抑制后,肿瘤增长的变化。肿瘤组织通过检测CD34表达对MVD进行比较,同时采用TUNEL检测肿瘤组织凋亡的变化。 结果:(1)成功构建了抗VEGF和CXCR4的siRNA慢病毒表达载体系统,测序证实序列正确。(2)体外实验中,通过Real time PCR和Western blot,在人卵巢癌细胞株sw626中,VEGF和CXCR4慢病毒表达载体能明显抑制靶基因的表达;CCK8显示,当VEGF受抑制后,肿瘤细胞增殖受抑;重建基底膜实验证实CXCR4表达受抑后细胞体外侵袭能力显著降低。(3)体内实验中,VEGF和CXCR4被抑制后可减缓瘤体增长,肿瘤组织MVD下降,细胞凋亡增加。 结论:(1)针对VEGF和CXCR4基因的siRNA慢病毒表达载体能够显著抑制靶基因的表达(2)当VEGF受抑制后,肿瘤细胞增殖受抑,MVD降低,肿瘤体积显著减小,细胞凋亡增加。(3)当CXCR4受抑后,肿瘤细胞侵润能力明显下降,肿瘤组织增殖受抑,MVD下降,凋亡增加。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2008
【分类号】:R737.31

【参考文献】
中国期刊全文数据库 前3条
1 李芳,朱怀仕,韩志强,陈刚,高庆蕾,贾平,张阿丽,奚玲,徐茜,廖国宁,王世宣,卢运萍,马丁;趋化因子受体及配体在卵巢癌细胞迁移中的作用[J];癌症;2005年01期
2 徐晓刚,吕春堂,袁卫,周中华,罗小龙,孙沫逸;趋化因子受体CXCR4在涎腺腺样囊性癌肺高转移细胞株中的表达[J];第二军医大学学报;2005年06期
3 郭建新;李力;白垚;程小星;邓少丽;郑秀惠;;慢病毒携带shRNA对宫颈癌细胞中HPV16型E6表达的抑制作用[J];第三军医大学学报;2006年11期
【共引文献】
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1 石明;郭荣平;张昌卿;钟崇;林小军;李锦清;;趋化因子CXC受体3在肝细胞癌中的表达及意义[J];癌症;2006年10期
2 曾东风,陈幸华,孔佩艳,彭贤贵,魏立,常城;SDF-1与VEGF在不同类型恶性血液肿瘤中的表达及其意义[J];重庆医学;2005年09期
3 孟志兵;徐晓刚;周中华;;CXCL12/CXCR4在涎腺腺样囊性癌及周围神经组织中的表达[J];第二军医大学学报;2008年06期
4 张蔚;王毅军;洛若愚;;RhoC、CXCR4基因与宫颈癌生物学行为的关系[J];武汉大学学报(医学版);2008年03期
5 尹东;高志;;趋化因子受体CXCR4在口腔鳞癌中的表达和临床意义[J];华西口腔医学杂志;2007年04期
6 厉红元;任国胜;谭金详;;shRNA-CXCR4对人乳腺癌细胞侵袭力的影响[J];四川大学学报(医学版);2009年03期
7 吕春堂;周中华;;涎腺腺样囊性癌生物学特性与生物治疗[J];口腔颌面外科杂志;2009年03期
8 徐铭竹;农晓琳;;趋化因子CXCL12及其受体CXCR4在口腔癌研究中的进展[J];口腔颌面外科杂志;2009年06期
9 刘静;郭华雄;;趋化因子CXCL12/CXCR4生物轴在肿瘤中的研究进展[J];临床与实验病理学杂志;2010年04期
10 黄宁;;炎症因子与肿瘤[J];中国民族民间医药;2010年09期
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 陈道荣;Dnmt1基因shRNA干扰重组体介导的胃癌基因治疗[D];重庆医科大学;2005年
2 王栋;胃癌相关基因甲基化检测和药物联用去甲基化的研究[D];天津医科大学;2006年
3 成海恩;RNAi沉默人宫颈癌CaSki细胞HPV-16 E6基因表达的研究[D];重庆医科大学;2006年
4 陈力学;PTEN对神经元NMDA受体的调节作用及其分子机制的研究[D];重庆医科大学;2006年
5 王辉;溶血磷脂酸上调CXCL12-CXCR4生物轴与卵巢上皮性癌腹腔转移关系的研究[D];河北医科大学;2007年
6 胡海龙;应用RNA干扰技术沉默E2F3基因对膀胱癌的生长抑制作用[D];天津医科大学;2007年
7 李相良;SiRNA技术沉默Stat3对膀胱肿瘤的生长抑制作用[D];吉林大学;2008年
8 龙海涛;趋化因子受体CXCR4对骨肉瘤细胞株肺转移的影响[D];中南大学;2008年
9 孙梯业;CXCR4在胃癌侵袭转移中的作用及其机制研究[D];第三军医大学;2008年
10 于仁涛;宿主细胞磷脂酶D调控李斯特菌侵入上皮细胞过程的机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2010年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 郑湘予;CXCR4与MMP-9在食管鳞癌组织中的表达及意义[D];郑州大学;2010年
2 理国富;CXCR4和VEGF在人脑星形细胞瘤中的表达及其与血管生成的关系[D];郑州大学;2010年
3 王堃;OPN和CXCR4在卵巢上皮癌组织中的表达及意义[D];吉林大学;2011年
4 杨同宁;IL-8对肺腺癌A549细胞迁移的影响及其机制探讨[D];重庆医科大学;2011年
5 曾东风;SDF-1/CXCR4与VEGF在急性白血病和恶性淋巴瘤中的表达及其临床意义[D];第三军医大学;2004年
6 杨文博;RNAi阻抑急性白血病骨髓基质细胞表达SDF-1对共培养Jurkat细胞的影响[D];第三军医大学;2005年
7 苏一乐;CXCL12、CXCR4和VEGF-C、VEGFR-3在宫颈癌原位灶和淋巴结中的表达及意义[D];内蒙古医学院;2006年
8 金北平;CXCR4在急性白血病表达及临床意义[D];南昌大学;2006年
9 张凯;ERK1/2和MMPs在涎腺腺样囊性癌中的表达及意义[D];浙江大学;2006年
10 曹庆龙;乳酸菌中隐蔽质粒的研究[D];东北农业大学;2007年
【二级参考文献】
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1 郭建新,李力;HPV与宫颈癌疫苗研究进展[J];国外医学.妇幼保健分册;2004年06期
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1 郭丽丽;刘近春;;CXCR4、VEGF在食管鳞状细胞癌组织中的表达及其意义[J];中国实用医药;2009年13期
2 吕伟,郝嘉,郝迎学,张超;RNAi抑制大肠癌HCT116细胞株VEGF-mRNA表达的实验研究[J];第三军医大学学报;2005年11期
3 宋现让;迟伟玲;柳永蕾;魏玲;王兴武;宋宝;;人HIF-1α基因沉默肺癌细胞株的筛选及鉴定[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2006年05期
4 王涛;惠旭辉;周良学;鞠延;戎宏涛;张乔;;CXCR4、VEGF在血管母细胞瘤血管生成中的表达及意义[J];四川大学学报(医学版);2010年03期
5 康楷;胡丽娜;董晓静;朱元方;;CXCR4-siRNA逆转录病毒载体对宫颈癌Caski细胞CXCR4基因表达的抑制作用[J];中国肿瘤临床;2008年21期
6 王海燕;李延年;董永;孙波;张树超;葛银林;;靶向VEGF基因的siRNA联合树突状细胞介导的CTL对MCF-7细胞作用的研究[J];中国输血杂志;2010年02期
7 王雪贞;唐荣华;马丽丽;余姗姗;张旻;卜碧涛;;慢病毒介导的TNF-α-SiRNA在C型Niemann-Pick病小鼠脑部的表达及功能[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2009年02期
8 王莉;胡轶阳;王耀春;韩骅;;小鼠CXCR4基因的克隆和慢病毒介导的表达[J];细胞与分子免疫学杂志;2009年07期
9 郁海燕;张进安;张利华;冯斌;王兴;任引刚;;下调CXCR4基因对甲状腺癌细胞SW579增殖和侵袭能力的影响[J];山西医科大学学报;2010年11期
10 徐可树;钟少平;邹丽;;Leptin对人早孕期滋养细胞CXCR4、MMP_9及VEGF表达的影响[J];中国妇幼保健;2006年08期
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1 杨勤;张亚声;;复方苦参注射液联合5-氟尿嘧啶节律化疗对人胃癌裸鼠移植瘤VEGF、CXCR4和SDF-1的影响[A];中华中医药学会脾胃病分会第二十三次全国脾胃病学术交流会论文汇编[C];2011年
2 袁磊;吴国豪;张波;;小鼠Atrogin-1基因RNAi对肌肉细胞营养不良的逆转作用[A];中华医学会第十一届全国营养支持学术会议论文汇编[C];2008年
3 赵忠芳;吕仁荣;霍然;傅洪滨;徐广琪;;普萘洛尔治疗增生期血管瘤患儿血清中VEGF、MMP-9的变化[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年
4 徐勇;黄仁魏;王东宁;林桂真;林东军;何易;李旭东;林曲;;急性白血病血管内皮生长因子(VEGF)和受体的表达及其临床意义研究[A];中华医学会第八次全国血液学学术会议论文汇编[C];2004年
5 李飞;李树清;;VEGF表达在局灶性脑缺血后亚低温脑保护中的作用研究[A];中国病理生理学会第九届全国代表大会及学术会议论文摘要[C];2010年
6 赵忠芳;吕仁荣;霍然;傅洪滨;徐广琪;;普萘洛尔治疗增生期血管瘤患儿血清中VEGF、MMP-9的变化[A];中华医学会整形外科学分会第十一次全国会议、中国人民解放军整形外科学专业委员会学术交流会、中国中西医结合学会医学美容专业委员会全国会议论文集[C];2011年
7 杜娟;王景美;钱晓萍;刘宝瑞;;COX-2和VEGF在胃癌中的表达和意义[A];中华医学会肿瘤学分会第七届全国中青年肿瘤学术会议——中华医学会肿瘤学分会“中华肿瘤 明日之星”大型评选活动暨中青年委员全国遴选论文汇编[C];2011年
8 罗毅;王小聪;赵娟;邹萍;;pir-b慢病毒对DC功能影响的初步研究[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
9 田翀;彭晓琳;张嫦慧;唐玉涵;任玮叶;孙秀发;郝丽萍;应晨江;;VEGF在白藜芦醇缓解内皮细胞高通透性的作用[A];营养与慢性病——中国营养学会第七届理事会青年工作委员会第一次学术交流会议论文集[C];2010年
10 陈西华;;小鼠月经模型中Hif-1α对VEGF调节作用的研究[A];中国生理学会第23届全国会员代表大会暨生理学学术大会论文摘要文集[C];2010年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 徐铮奎;RNA干扰剂即将浮出市面[N];医药经济报;2004年
2 余海若;慢病毒的发现[N];大众科技报;2000年
3 由香港麦迪信医学出版有限公司供稿;VEGF“陷阱”有效抑制肿瘤[N];医药经济报;2002年
4 张中桥;VEGF对乳腺癌的生长起重要作用[N];中国医药报;2002年
5 新华社;VEGF有望成为预防动脉梗塞新药[N];中国医药报;2005年
6 王婷婷;肿瘤能否“饿死”[N];科技日报;2004年
7 文执 编译;抗癌新靶标 肿瘤内的血管[N];科技日报;2002年
8 王天堂;国产防腐新材料亮相[N];中国化工报;2002年
9 刘霞;CXCR4分子结构与作用原理揭开[N];科技日报;2010年
10 徐峰;肿瘤与血管生成息息相关[N];医药经济报;2001年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 李铁军;RNA干扰抑制血管内皮生长因子介导结肠癌基因治疗[D];重庆医科大学;2007年
2 康楷;VEGF-A-siRNA和CXCR4-siRNA慢病毒载体的构建及对卵巢癌的基因治疗[D];重庆医科大学;2008年
3 王祖峰;慢病毒介导的iNOS siRNA对大鼠肾脏缺血再灌注损伤的保护作用[D];苏州大学;2008年
4 张国鹏;两种核素报告基因系统用于监测治疗基因VEGF165表达的基础研究[D];华中科技大学;2010年
5 费嘉;VEGF mRNA反义核酸对白血病细胞药物敏感性的影响[D];暨南大学;2003年
6 赵薇;细胞因子GM-CSF、VEGF对大鼠内皮祖细胞功能活性的影响及其信号转导途径的体外研究[D];中国医科大学;2008年
7 董宏伟;大肠癌形成过程中肿瘤血管生成与细胞凋亡的变化及VEGF和p53表达的意义[D];中国医科大学;2002年
8 彭湃;VEGF在慢性创面愈合中的作用及机理研究[D];第一军医大学;2004年
9 范海涛;Survivin与VEGF的检测及二者反义寡核苷酸对膀胱癌的治疗研究[D];吉林大学;2010年
10 杨秀鹏;Tryptase诱导AML骨髓基质细胞高表达VEGF及机制的研究[D];中国医科大学;2010年
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1 王建荣;垂体腺瘤中CXCR4、VEGF的表达及其与侵袭性之间的关系[D];中南大学;2007年
2 李玲;VEGF靶向性siRNA表达载体的构建及其沉寂作用[D];郑州大学;2005年
3 简蔚泓;骨肉瘤中CXCR4、VEGF表达与肺转移[D];南昌大学;2007年
4 赵林涛;下调胶质瘤干细胞CXCR4表达对胶质瘤侵袭和血管生成能力的影响[D];第三军医大学;2009年
5 马戈甲;利用RNA干扰技术下调血管瘤中VEGF基因的表达对血管瘤影响的实验研究[D];第四军医大学;2010年
6 理国富;CXCR4和VEGF在人脑星形细胞瘤中的表达及其与血管生成的关系[D];郑州大学;2010年
7 曾东风;SDF-1/CXCR4与VEGF在急性白血病和恶性淋巴瘤中的表达及其临床意义[D];第三军医大学;2004年
8 曾伟;CXCR4、VEGF-C在肺转移性骨肉瘤中的表达及相关性的研究[D];中南大学;2009年
9 孙洁;VEGF表达及微血管密度与三阴性乳腺癌及非三阴性乳腺癌临床病理特征的关系[D];广西医科大学;2010年
10 齐振平;非小细胞肺癌中VEGF及其受体Flt-1的表达及临床意义[D];大连医科大学;2010年
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