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《重庆医科大学》 2009年
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川芎嗪玻璃化液保存同种异体周围神经的实验研究

陈增刚  
【摘要】: 第一部分川芎嗪玻璃化液对大鼠坐骨神经雪旺细胞凋亡及其相关基因的影响 目的:探讨不同浓度的川芎嗪玻璃化保存液对大鼠坐骨神经中雪旺细胞凋亡及相关基因的影响。 方法:选择成年清洁级SD雄性大鼠24只,在骨盆口以远5mm处切断双侧坐骨神经,向远端游离约15mm切断,共获得48条神经,按玻璃化保存液中川芎嗪的浓度随机分为1个对照组(不含川芎嗪—A组)及3个实验组(100mg/L—B组,200mg/L—C组,400mg/L—D组),-196℃液氮保存,3周后分别进行HE染色光镜检测、Bcl-2、Bax免疫组化检测、细胞凋亡TUNEL检测。 结果:C、D组坐骨神经中雪旺细胞凋亡数量明显少于A、B组,C、D组坐骨神经的Bcl-2阳性表达率均明显高于A、B组,Bax阳性表达率均明显低于A、B组,差异均有统计学意义(P0.05);C、D组间无统计学差异。 第二部分川芎嗪玻璃化液对大鼠异体坐骨神经免疫反应的影响 目的:探讨不同浓度的川芎嗪玻璃化保存液对异体神经免疫反应的影响。 方法:选择成年清洁级SD雄性大鼠24只,切取双侧坐骨神经,共获得48条神经,按玻璃化保存液中川芎嗪的浓度随机分为A、B、C、D 4个实验组,-196℃液氮保存3周后,选择成年清洁级Wistar雄性大鼠48只随机分为相应的4组作为受体,在其背部皮下植入经过含川芎嗪的玻璃化液保存的SD大鼠的坐骨神经;另外选择成年清洁级Wistar雄性大鼠12只作为对照组,植入新鲜自体神经。术后2周进行大体观察、组织学和免疫学检测。 结果C、D组CD4+和CD8+淋巴细胞的侵润程度明显轻于A、B组,神经组织较好保持原形态,周围仅见极少量淋巴细胞侵润,与E组无明显差别。 第三部分川芎嗪浓度对大鼠异体坐骨神经玻璃化保存后再生的影响 目的:探讨不同浓度的川芎嗪对玻璃化保存的大鼠异体坐骨神经再生的影响。 方法:选择成年清洁级SD雄性大鼠48只作为供体,切取双侧坐骨神经,制成15mm神经段,按玻璃化保存液中川芎嗪的浓度随机分为A、B、C、D 4个组,-196℃液氮保存3周。3周后选择成年清洁级Wistar雄性大鼠96只作为受体,做成坐骨神经缺损10mm的模型,并随机分为4组。神经段复温后移植给相应组的受体。术后分别于4周、8周和16周进行大体观察以及移植神经的光镜、电镜、电生理、轴突图像分析等检查。 结果:4组中以C、D组再生效果最好,B组其次,A组最差。经统计学处理,神经电生理结果、轴突图像分析以及运动终板计数差异显著(P 0.01)。 第四部分-20℃川芎嗪玻璃化液保存大鼠异体神经对再生的影响 目的:探讨不同时间段-20℃川芎嗪玻璃化液保存大鼠异体坐骨神经对再生的影响。 方法:-20℃川芎嗪玻璃化液(川芎嗪浓度为200mg/L)(A组)保存成年SD雄性大鼠坐骨神经,时间分别为1周、2周,然后选择成年Wistar雄性大鼠坐骨神经缺损模型作为受体,神经段复温后移植给受体,术后分别于4周、8周、16周进行大体观察以及移植神经的大体、光镜、电镜、电生理、荧光逆行示踪、运动终板等检查;并分别与-20℃玻璃化液(不含川芎嗪)(B组)和-196℃川芎嗪玻璃化液(川芎嗪浓度为200mg/L)(C组)保存的坐骨神经进行比较。 结果:保存1周时-20℃川芎嗪玻璃化液组与-196℃川芎嗪玻璃化液组再生效果无统计学意义(P0.05),与20℃玻璃化液组的差异有显著性(P0.01);保存2周以后3组中以-196℃川芎嗪玻璃化液组再生效果最好,-20℃川芎嗪玻璃化液组其次,-20℃玻璃化液组最差。 结论: 1.含川芎嗪的玻璃化保存液能够通过调节Bcl-2和Bax的表达而有效抑制雪旺细胞的凋亡。 2.同种异体神经在川芎嗪玻璃化液中深低温保存后,抗原性可以明显降低。 3.玻璃化保存液中加入一定浓度的川芎嗪可改善大鼠同种异体神经再生效果。 4.玻璃化保存液中加入川芎嗪可提高大鼠同种异体神经的保存温度值,-20℃时可保存大鼠周围神经1周。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R285.5

【参考文献】
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