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《重庆医科大学》 2009年
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人参总皂苷对造血干/祖细胞促红细胞生成素受体的作用

胡晓舒  
【摘要】: 第一部分:TSPG对脐血CD34+造血干/祖细胞促红细胞生成素受体的作用 目的: 80年代以来,脐血作为造血干/祖细胞来源治疗血液病患者的有效方法受到人们关注,由于临床血液疾病治疗的迫切需要,脐血造血干/祖细胞的临床应用主要应用于血液系统恶性肿瘤及某些实体肿瘤的治疗。脐血中含有较丰富的原始、能重建长期造血的干/祖细胞,具有较强的自我增殖、多向分化的能力,是造血干/祖细胞又一丰富来源。红细胞生成素(Epo)是一种维系红系祖细胞生存,增殖及分化成熟的重要造血调控因子。它通过与红系祖细胞表面红细胞生成素受体(EpoR)结合,可调节红系细胞增殖和分化。 人参是祖国传统医学的“补气”要药,人参总皂苷(TSPG)是其主要药物有效成分。我室既往研究表明,TSPG能协同造血生长因子(Epo)促进CD34+造血干/祖细胞(HSC/HPC)向红系细胞增殖分化;特别有意义的是,若不添加外源性生长因子TSPG则无此作用,提示TSPG以细胞因子依赖的方式促进红系细胞发生。因此,我们设想TSPG可能通过调控EpoR发挥促进红系细胞发生的作用。本研究以分离纯化的人脐血CD34+ HSC/HPC为靶细胞,初步探讨TSPG对CD34+细胞EpoR表达的影响。 方法: 1、免疫磁珠法分选出脐血CD34+ HSC/HPC,于体外培养,50 mg/L TSPG和100ng/ml干细胞因子(SCF)加入到CD34+ HSC/HPC的培养体系中作为TSPG组;对照组中只加入100ng/ml SCF。两组均培养24小时后检测以下指标。 2、采用流式细胞术分别检测TSPG组与对照组EpoR阳性细胞的百分率。 3、采用半定量RT-PCR技术分别测定TSPG组与对照组细胞EpoR mRNA的表达。 4、采用激光共聚焦显微镜成像术观察TSPG组与对照组细胞膜EpoR的分布。 5、采用紫外-可见分光光度仪检测TSPG组与对照组细胞血红蛋白的含量的变化。 结果: 1、流式细胞术检测显示:TSPG组细胞膜EpoR表达阳性的细胞百分率增加,与对照组相比差异有显著性,P=0.035。 2、半定量RT-PCR检测结果显示:TSPG组细胞EpoR mRNA表达增加,与对照组相比差异有显著性,P=0.016。 3、激光共聚焦显微镜成像术显示:TSPG组细胞膜荧光强度明显高于对照组。 4、血红蛋白测定检测结果显示:50mg/L TSPG作用CD34+ HSC/HPC 24h后,其血红蛋白的合成增加,与对照组相比差异有显著性,P=0.037。 结论: 1、50 mg/L TSPG能够使CD34+造血干/祖细胞膜EpoR的阳性表达率增多。 2、50 mg/L TSPG能够使CD34+造血干/祖细胞EpoR mRNA的表达增多。 3、50 mg/L TSPG可促进CD34+造血干/祖细胞向红系分化。 第二部分:TSPG对K562细胞促红细胞生成素受体的作用 目的: 白血病是人类好发的恶性肿瘤,是由于造血干细胞增殖分化异常而导致的恶性增殖性疾病。迄今白血病的治疗仍主要采用传统的大剂量联合化疗,但此疗法副作用大,复发率高,而且对正常机体免疫与造血系统有极大的损害。人参总皂苷(TSPG)是人参“补气生血”或促进造血的有效成分。我们既往研究表明:TSPG对造血系统恶性肿瘤细胞的增殖有抑制作用,并可诱导其向终末细胞分化。但TSPG对白血病细胞增殖抑制及诱导分化的机理尚不清楚。已知K562细胞膜表面EpoR起着转导抗凋亡信号作用,我们设想TSPG可能通过抑制EpoR蛋白的表达来诱导K562细胞凋亡,从而抑制其增殖。本研究采用体外细胞培养技术观察TSPG对K562细胞的EpoR表达的影响,旨在阐述人参抗白血病作用机理,这对于我们为临床寻找诱导白血病凋亡的药物具有重要意义。 方法: 1、体外常规培养白血病细胞株K562。200 mg/L TSPG分别作用K562细胞0h、24h、48h、72h,进行以下检测。 2、采用流式细胞术测定200 mg/L TSPG作用K562细胞24h、48h、72h后细胞膜表面EpoR表达的阳性率。 3、采用半定量RT-PCR测定200mg/L TSPG作用K562细胞24h、48h、72h后EpoR mRNA表达的变化。 结果: 1、流式细胞术检测显示K562细胞膜表面EpoR表达的阳性率随着200mg/L TSPG作用时间的延长而减少,P0.05。 2、半定量RT-PCR检测结果显示K562细胞EpoR mRNA表达随200mg/L TSPG作用时间的延长而显著减少,P0.01。 结论: 1、200mg/L TSPG可使K562细胞膜表面EpoR的表达阳性率减少,随着药物作用时间的延长而更显著。 2、200mg/L TSPG可使K562细胞EpoR mRNA的表达减弱,且随着药物作用时间的延长而更显著。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R285.5

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