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《重庆医科大学》 2010年
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水黄皮质量标准及其提取物安全性评价研究

赵映淑  
【摘要】: 目的:从水黄皮的生药学和含量测定研究入手,建立其质量标准;筛选水黄皮根总黄酮提取与纯化方法,并对其提取物(水黄皮根总黄酮)进行安全性评价研究。 方法:(1)采用性状鉴定、显微、理化、薄层鉴别(TLC)以及紫外吸收光谱(UV)等方法对水黄皮进行系统的生药学研究;(2)采用UV和高效液相色谱法(HPLC)分别测定水黄皮药材中总黄酮和水黄皮素的含量;(3)采用单因素试验与正交设计试验优选水黄皮根总黄酮最佳提取工艺条件,并采用大孔吸附树脂对其提取物进行纯化;(4)采用Bliss法PRF进行小鼠急性毒性试验研究:昆明小鼠一天内经口单次给予PRF,连续观察14天,观察PRF对动物产生的毒性反应、体重变化及动物死亡情况,并计算LD50及其95%可信限;(5)观察不同剂量的PRF对SD大鼠连续灌胃90d,恢复期观察14天,期间测量大鼠体重、摄食量、血液学和血液生化学指标,计算脏器系数,并进行病理学检查。 结果:(1)提出了水黄皮药材性状和显微鉴别特征;理化鉴别显示水黄皮含有黄酮类和三萜类化合物;薄层鉴别显示水黄皮药材含有水黄皮素;紫外-可见光谱扫描显示水黄皮药材水提液在200 nm~400 nm波长范围内无吸收,60%乙醇提取液在260和303nm处有最大吸收,氯仿提取液在244和322nm处有最大吸收;(2)UV法测得水黄皮根中总黄酮含量为1.05%;HPLC法测的水黄皮根中水黄皮素含量分别为0.164%;(3)水黄皮根总黄酮最佳提取工艺为:每g药材粗粉加入20倍量60 %乙醇,于80℃回流提取3次,每次1.0 h。大孔吸附树脂纯化PRF结果为:D101最适于水黄皮总黄酮的纯化,最佳工艺为:调节水黄皮根提取液总黄酮浓度约为0.6mg·mL-1,调pH=3,以2 mL·min-1的流速上样,以相同速率用适量纯化水洗脱(molish反应阴性)后,再用3BV 20 %乙醇溶液除杂洗脱,最后用70 %乙醇作为洗脱剂进行洗脱,纯化后总黄酮含量可达50%以上;(4)按Bliss法求得PRF小鼠灌胃的LD50为3.3016 g/kg,其95%的可信限为2.8895 g/kg~3.7953 g/kg。对死亡小鼠立即进行解剖,肉眼观察主要脏器均未见出血等异常现象。对各组存活小鼠逐日观察2周,其外观特征、毛色、行为活动、饮食、精神状态、粪便性状等在给药次日恢复正常,试验结束时,小鼠体重明显增长。(5)长毒研究表明,PRF对大鼠体重和摄食量无明显影响,大鼠脏器系数、血液学指标有部分变化,但在恢复期结束后基本恢复正常。肝脏、肾脏、心脏、子宫和前列腺等可见充血和炎细胞浸润等病理改变。 结论:(1)建立了水黄皮药材的显微、TLC和紫外光谱扫描等鉴别方法。(2)建立了UV法测定水黄皮根中总黄酮和HPLC法测定水黄皮根中水黄皮素含量的方法,两种方法稳定性和重复性较好,可用于水黄皮药材的质量控制。(3)优选出了水黄皮根总黄酮提取纯化工艺,经纯化后总黄酮含量大于50%,可达到纯化的目的。(4)PRF小鼠急性毒性试验LD50为3.3016g/kg,主要脏器未见明显病变,亦未见迟发型毒性反应。(5)PRF大鼠3个月长期毒性试验结果显示,高剂量(760mg/kg)反复给予PRF可使大鼠红细胞、血红蛋白减少和红细胞压积降低,对大鼠肝功能指标有一定影响,可能引起肝脏病理改变,但恢复期(14天)结束后均恢复正常,其毒性作用是可逆的。PRF对大鼠的安全剂量为190mg/kg。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R282.71

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