收藏本站
《重庆医科大学》 2010年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

RNA干扰沉默PDGF-D基因对胃癌细胞SGC-7901影响的实验研究

赵林  
【摘要】: 第一部分PDGF-D和VEGF在胃癌中的表达及临床意义 目的探讨血小板源性生长因子D(Platelet-derived growth factor-D, PDGF-D)和血管内皮生长因子(Vascular endothelial growth factor ,VEGF)在胃癌中的表达及其与胃癌临床病理特征的关系。 方法用免疫组织化学(SP法)检测组织中PDGF-D和VEGF蛋白的表达,用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)对其中的40例胃癌组织标本进行PDGF-D和VEGF mRNA的半定量分析,分析两者之间的相关性及其与临床病理特征之间的关系。 结果胃癌组织中PDGF-D和VEGF蛋白的表达显著高于癌旁组织和正常胃组织(P0.05);PDGF-D和VEGF的表达与胃癌的TNM分期、浸润深度及淋巴结转移有关(P0.05),PDGF-D的表达还与胃癌的分化程度有关(P0.05); PDGF-D和VEGF在mRNA水平和蛋白水平的表达均呈正相关(均P0.05)。 结论PDGF-D和VEGF在胃癌组织中特异性高表达,可能在胃癌的发生、发展与转移中起着重要作用。 第二部分RNA干扰抑制SGC-7901细胞PDGF-D表达的研究 目的构建PDGF-D的shRNA质粒载体,检测其在胃癌细胞株SGC-7901中对PDGF-D表达的抑制作用,并筛选出其稳定表达细胞株。 方法设计合成两条针对靶基因(PDGF-DmRNA)的干扰序列和阴性对照序列,连接至pGPU6/GFP/Neo载体上,分别转染至胃癌细胞株SGC-7901,RT-PCR和Western Blot检测干扰后胃癌细胞株SGC-7901的PDGF-DmRNA和PDGF-D蛋白表达量,筛选出抑制效率高的质粒,用G418筛选出稳定表达干扰序列的胃癌细胞株。 结果酶切电泳分析和DNA测序证实成功构建PDGF-D-shRNA质粒,转染48小时后与未处理组和阴性对照组相比,PDGF-D-shRNA1,PDGF-D-shRNA2重组载体均能使SGC-7901细胞中PDGF-D基因在mRNA和蛋白水平上的表达明显下调(P0.05),且后者抑制效果更好;其抑制率在mRNA和蛋白水平分别达68.2%和65.2%(P0.05)。并成功筛选出稳定表达的胃癌细胞株。 结论构建的重组质粒PDGF-D-shRNA2能有效抑制PDGF-D基因在胃癌细胞中表达,且成功筛选出其稳定表达细胞株,为下一步研究打下基础。 第三部分RNA干扰下调PDGF-D表达对胃癌SGC-7901的生物学特性的影响及其机制的研究 目的研究下调胃癌细胞SGC-7901的PDGF-D表达对其体外增殖、粘附、迁移、侵袭、血管形成的影响及其机制。 方法分别检测PDGF-D下调前后的胃癌细胞SGC-7901生物学特性的变化,MTT法检测细胞增殖,流式细胞检测细胞周期,粘附实验检测细胞粘附力,划痕实验检测细胞迁移,Transwell小室检测细胞侵袭,以及对脐静脉血管内皮细胞的管状结构形成的影响;利用Western Blot和ELISA法检测与PDGF-D相关信号通路的因子表达的变化。 结果下调PDGF-D的表达后,胃癌细胞SGC-7901的增殖、粘附、迁移、侵袭、血管形成都受到一定程度的抑制(P0.05);细胞周期分析发现,S期细胞减少,而G0/G1期细胞增加(P0.05);Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、VEGF蛋白和核内的β-catenin表达下调(P0.05),其培养液上清的VEGF浓度也有明显的下降(P0.05)。 结论下调PDGF-D的表达对胃癌细胞SGC-7901的体外增殖、粘附、迁移、侵袭、血管形成有明显抑制作用,其机制可能和PDGF-D下调后使核内的β-catenin表达下调进而使得其下游的Cyclin D1、MMP-2、MMP-9、VEGF蛋白表达下降有关。 第四部分RNA干扰PDGF-D表达对SGC-7901细胞裸鼠移植瘤生长和血管形成研究 目的观察下调胃癌SGC-7901的PDGF-D的表达对裸鼠移植瘤的生长和血管形成的影响。 方法通过裸鼠的移植瘤模型观察下调PDGF-D表达后胃癌细胞在裸鼠体内的生长情况,观测其对移植瘤生长的影响,Western Blot检测移植瘤内PDGF-D和VEGF的变化,检测组织微血管密度的变化。 结果发现PDGF-D下调的胃癌SGC-7901细胞裸鼠移植瘤生长缓慢,30天后检测体积明显较对照组小(P0.05),VEGF的表达下调,微血管密度较对照组明显下降(P0.05)。 结论下调PDGF-D可以抑制胃癌细胞裸鼠移植瘤的生长,其机制可能是通过下调VEGF的表达来抑制移植瘤的血管形成。
【学位授予单位】:重庆医科大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R735.2

手机知网App
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前7条
1 沈乐,周爱儒;血管内皮生长因子的生物学作用及其临床意义[J];基础医学与临床;1999年03期
2 高炜,盛琴慧,朱国英,周爱儒,汤健;血管内皮生长因子基因的表达及血管生成作用[J];基础医学与临床;2000年05期
3 封巍;祝淑钗;王玉祥;;反义VEGF寡核苷酸联合放射线抑制食管癌细胞移植瘤生长[J];基础医学与临床;2008年08期
4 康世荣;李俊;;胃癌病人血清中VEGF的表达与其癌组织中MVD的研究[J];内蒙古医学院学报;2009年01期
5 牛新捷,王作仁,张云峰,吴胜利;胆囊癌组织微血管密度的临床意义[J];世界华人消化杂志;2002年01期
6 刘小平,宋少柏,李岗,王殿军,赵海潞,韦立新;结直肠肿瘤微血管计数与临床病理的相关性[J];世界华人消化杂志;1999年01期
7 张玉英;丰义宽;李国庆;张居民;孙善明;;黏蛋白和血管内皮生长因子在胃癌及癌前病变中的表达及意义[J];中华消化杂志;2005年10期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 崔伯康;张昌卿;张颖;元云飞;张亚奇;石明;陈敏山;李升平;李锦清;;骨桥蛋白检测对预测肝细胞癌转移复发的意义[J];癌症;2006年07期
2 王鑫,杨广顺;围手术期输血与肝癌复发[J];第二军医大学学报;2005年10期
3 王东盛;陆英;王成纲;刘明;刘海洋;;原发性肝癌TACE治疗后并发肝衰竭相关因素分析[J];中国医药导刊;2010年10期
4 蔡欣然;黄长玉;周浩辉;周良艺;;HBsAg阳性原发性肝癌根治术后血清HBV DNA水平对肝癌复发的影响[J];福建医科大学学报;2008年05期
5 徐瑶;官阳;杨木兰;;β-连环素和上皮钙粘连素在肝细胞癌中的表达及其意义[J];中国组织化学与细胞化学杂志;2006年03期
6 莫钦国;原发性肝癌以外科为主的综合治疗研究进展[J];广西医学;2004年01期
7 郭苹;葛莲英;罗小玲;谢裕安;;胃癌组织中树突状细胞和记忆T淋巴细胞浸润与患者预后的关系[J];肿瘤基础与临床;2008年03期
8 王金果;刘亚娴;;甲乙煎影响H_(22)小鼠肝癌组织黏附分子E-cadherin表达的实验研究[J];河北中医药学报;2009年01期
9 荆春霞;张洹;;VEGF siRNA的筛选、评价及siRNA的设计规则探讨[J];基础医学与临床;2006年06期
10 徐滨;宋来君;徐国本;张智峰;;COX-2和VEGF在人脑星形细胞瘤中的表达及与临床病理分级的相关性[J];基础医学与临床;2006年10期
中国重要会议论文全文数据库 前1条
1 谢长生;吴良村;;养阴清热方对615小鼠HCa-F肝癌皮下移植瘤抑制作用的研究[A];浙江省中晚期肿瘤姑息治疗研讨会资料汇编[C];2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 韩秀婕;超声引导瘤区注射高聚生协同微波治疗肝癌局部细胞免疫变化与临床疗效的研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2003年
2 张国安;生物质谱新技术及其在疾病蛋白质组研究中的应用[D];复旦大学;2003年
3 温朝阳;微波凝固与手术切除治疗原发性小肝癌对癌细胞播散入血的影响[D];中国人民解放军军医进修学院;2004年
4 于晓玲;低机械指数实时灰阶超声造影评价治疗后残存肝癌及复发转移的实验及临床研究[D];中国人民解放军军医进修学院;2004年
5 罗速;肝肿瘤标志物与肝癌早期诊断的研究[D];吉林大学;2004年
6 毛煜;蛋白组高通量、高效、高灵敏分离分析新技术与新方法研究[D];复旦大学;2004年
7 彭艳;肝癌转移相关蛋白及其兔单克隆抗体的筛选和鉴定[D];第二军医大学;2004年
8 高建;人自体肝癌细胞裂解物致敏的树突状细胞瘤苗预防肝癌术后复发转移的研究[D];重庆医科大学;2005年
9 王志学;艾康颗粒抑制肿瘤血管生成及抗转移作用的基础与临床研究[D];山东中医药大学;2005年
10 宋丽杰;8号染色体上肝癌转移抑制基因的功能性定位及相关研究[D];复旦大学;2005年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 孙轶男;平调饮对原发性肝癌患者AFPmRNA、GPC-3mRNA影响的研究[D];黑龙江中医药大学;2010年
2 王丙国;应用逆转录聚合酶链反应检测肝细胞癌淋巴结微转移的初步研究[D];桂林医学院;2010年
3 陈巧佩;转移、非转移肝癌病人血清糖蛋白聚糖组的研究[D];广西医科大学;2011年
4 刘燕;1-甲基色氨酸对荷肝癌小鼠皮下移植瘤生长抑制作用的研究[D];山西医科大学;2011年
5 苗龙;P53、MUC2、Ki67、PCNA在胃癌及癌前病变中的表达及辅助诊断价值[D];兰州大学;2011年
6 丁成明;ESM-1与MMP-3在肝细胞癌侵袭转移中的研究[D];南华大学;2011年
7 朱蔚;恩度联合榄香烯治疗晚期肝癌的临床观察[D];第四军医大学;2011年
8 周远;微波消融联合氟尿嘧啶缓释剂治疗肝癌的实验与临床研究[D];泰山医学院;2011年
9 陈玉;晚期胆管癌的临床特征及预后分析[D];大连医科大学;2011年
10 秦如斋;EpCAM及HNF4alpha蛋白在肝细胞癌中的表达及其与预后的相关性研究[D];南方医科大学;2011年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 罗君;吴小翎;;血管内皮生长因子与胃癌的研究进展[J];重庆医学;2007年07期
2 荆春霞;张洹;;VEGF siRNA的筛选、评价及siRNA的设计规则探讨[J];基础医学与临床;2006年06期
3 李勇;杨进强;赵增仁;王益民;邝钢;范立侨;赵群;;脂质体转染VEGF-C反义寡核苷酸对人胃癌OCUM-2MD3细胞VEGF-C表达的影响[J];基础医学与临床;2007年02期
4 付生法,陆应麟,张朝山,陈坤;检测血管生长因子作用的鸡胚绒毛尿囊膜技术[J];军事医学科学院院刊;1993年04期
5 申兴斌;金小平;王瑞婷;李瑞香;于再东;;VEGF及其受体Flk-1在大肠癌中表达的意义[J];陕西医学杂志;2007年03期
6 邱国光;雷德利;;膀胱移行细胞癌微血管密度与其复发的关系[J];实用医技杂志;2007年14期
7 童允洁,邹萍,张敏,伍晓菲,袁永辉;VEGF反义寡核苷酸对K562细胞VEGF表达的影响[J];现代医学;2004年04期
8 叶古祥,周海茵,周雄文;消化道肿瘤病人血清VEGF变化及意义[J];现代诊断与治疗;2002年04期
9 封巍;祝淑钗;王玉祥;;反义血管内皮生长因子对食管癌细胞体外放射增敏作用[J];肿瘤学杂志;2007年03期
10 马晓明,汪永录,潘伯荣;VEGF研究进展[J];世界华人消化杂志;1999年08期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 付浩;赵丹懿;孙秀菊;滑君;阎杨;邱广蓉;尚超;富伟能;孙开来;;B-RAF基因特异的siRNA干扰对胃癌BGC823细胞的影响[J];遗传;2007年05期
2 刘靖;鲍依稀;刘明学;祝绚;李进;;RNA干扰enolase-1基因治疗胃癌的实验研究[J];中国肿瘤临床;2008年08期
3 王宁宁;沈方臻;林明刚;于丽;姚如永;;Bcl-2shRNA稳定转染联合γ射线对胃癌SGC-7901细胞凋亡的影响[J];山东大学学报(医学版);2011年01期
4 孙鹏;于红;张文卿;刘颖;吕锐;;血管内皮生长因子小干扰RNA诱导胃癌细胞凋亡机制的研究[J];医学研究生学报;2011年04期
5 丁莺;吕宾;;RNA干扰技术及其在胃癌基因治疗中的应用进展[J];国际消化病杂志;2008年05期
6 刘宗文;张艳;赵志华;尹磊;;靶向GCSsi RNA表达载体与胃癌细胞耐药性[J];中国公共卫生;2007年09期
7 李玉明;蒋宏;吴峰阶;于兴泉;宋丙潭;刘春远;;RNA干扰靶向抑制胃癌SGC7901细胞COX-2基因和蛋白表达的研究[J];滨州医学院学报;2009年01期
8 帖君,房殿春,宁晓燕;载体介导的siRNA对SGC-7901胃癌细胞中hPOT1表达的抑制作用[J];解放军医学杂志;2005年09期
9 袁保梅;李国栋;;RNA干扰对胃癌耐药细胞MDR1及P-gP表达的影响[J];山东医药;2008年26期
10 闫杨;付浩;滑君;张瑞秀;陈丹琦;孙开来;孙秀菊;;RNA干扰抑制RPS12基因表达对胃癌细胞凋亡的影响及分子机制探讨[J];中国肿瘤临床;2008年24期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李彦;姜政;;构建EGFP-TRAIL融合表达质粒及表达[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
2 刘振佳;陈晓光;;吉非替尼与紫杉醇合用于HERs高表达胃癌细胞的实验研究[A];全国第十一届生化与分子药理学学术会议论文集[C];2009年
3 董慧敏;魏蕾;范彪;韩国鸽;张懿敏;王永平;周璇;苏可;;小干扰RNA沉默Rac1表达及其对胃癌细胞SGC-7901迁移和侵袭能力的影响[A];中国病理生理学会微循环专业委员会第十二届学术大会会议指南及论文摘要集[C];2007年
4 朱风尚;陈锡美;王毅军;张霞;;环氧合酶抑制剂罗非昔布逆转胃癌细胞BGC-823内在耐药作用[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
5 熊玉霞;周业江;;PI9和GrB在胃癌细胞表达的生物学意义[A];中国生理学会心血管生理学术研讨会论文集[C];2011年
6 袁伟建;;Survivin及bel-2基因表达在吲哚美辛增敏顺铂抗胃癌细胞中的作用[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
7 王春玉;李彦姝;张红艳;李丰;;PAK4负调控胃癌细胞TGF-β1/Smads信号通路[A];“细胞活动 生命活力”——中国细胞生物学学会全体会员代表大会暨第十二次学术大会论文摘要集[C];2011年
8 李庆明;闵存云;;“胃康宁”对胃癌细胞生长和VEGF及其受体表达作用[A];中国中西医结合学会第七次全国实验医学学术研讨会论文汇编[C];2004年
9 双金权;;NS398对SGC7901胃癌细胞生长及CD44V6、MMP-9基因表达的影响[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
10 张金平;陈香宇;李建生;;全反式维甲酸对胃癌细胞BGC-823作用的研究[A];中华医学会第七次全国消化病学术会议论文汇编(下册)[C];2007年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 陆叶清;发现抑制胃癌细胞的重要基因[N];上海科技报;2010年
2 衣晓峰 乔蕤琳 记者 赵宇清;抑制胃癌细胞生长研究有新发现[N];黑龙江日报;2010年
3 记者 衣晓峰 通讯员 乔蕤琳;维生素E衍生物能抑制胃癌细胞生长[N];健康报;2010年
4 王雪飞;黄连素能“诱杀”胃癌细胞[N];健康报;2004年
5 徐铮奎;RNA干扰剂即将浮出市面[N];医药经济报;2004年
6 吴一福 苏玉军;白藜芦醇可诱导胃癌细胞脱落凋亡[N];中国医药报;2005年
7 王振岭;抗癌药抑制胃癌细胞生长研究获重要发现[N];中国中医药报;2002年
8 王振岭;我国抑制胃癌细胞生长研究有重要发现[N];中国医药报;2002年
9 王振岭;7种抗癌药体外抑制胃癌细胞的研究有新发现[N];医药经济报;2002年
10 衣晓峰;维生素E琥珀酸酯可抑制肿瘤细胞生长[N];中国医药报;2010年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 赵林;RNA干扰沉默PDGF-D基因对胃癌细胞SGC-7901影响的实验研究[D];重庆医科大学;2010年
2 吴成利;ALDH1A1在胃癌中的表达及对胃癌细胞生物学的作用[D];第二军医大学;2011年
3 连海峰;RNAi抑制NRP2表达对胃癌细胞SGC7901生长及侵袭转移的实验研究[D];重庆医科大学;2010年
4 王大广;胃癌信号传导蛋白表达谱筛选和分析及XIAP、CDK6抑制剂对胃癌细胞的影响[D];吉林大学;2011年
5 路雅茹;血小板衍生生长因子-BB与经皮冠状动脉介入术后再狭窄的相关性研究[D];天津医科大学;2012年
6 尉坤;KLF4在全反式维甲酸和PDGF调节SM22α表达中的作用及机制研究[D];河北医科大学;2011年
7 刘洁琼;PDGF-D在乳腺癌进展、转移及化疗药物运输中的作用和机制研究[D];中南大学;2011年
8 汪素文;乙酰肝素酶反义寡核苷酸诱导胃癌细胞凋亡的实验研究[D];山东大学;2004年
9 王伟强;程序性细胞死亡4增强胃癌细胞对TRAIL的敏感性及机制研究[D];第三军医大学;2009年
10 吴燕;RhoC与IQGAP1在调节胃癌细胞迁移、增殖中的相互作用[D];江苏大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 张勇;CLC3基因siRNA表达载体构建及对转染的胃癌细胞的增殖抑制作用[D];第四军医大学;2005年
2 李军扩;胃泌素-shRNAs对胃癌细胞系BGC-823的效应[D];郑州大学;2006年
3 陈正荣;siRNA干扰VEGF-C表达抑制胃癌淋巴生成的实验研究[D];苏州大学;2007年
4 高蕊;PDGF-BB对血管平滑肌细胞分化和增殖标志物表达的差异影响[D];河北医科大学;2010年
5 郭艳;PDGF-BB诱导大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞迁移机制的研究[D];大连医科大学;2010年
6 刘新慧;PDGF受体在臀肌挛缩症患者中的表达[D];大理学院;2010年
7 逯义亭;胰岛素干预对糖尿病鼠骨折愈合过程中PDGF表达影响的实验研究[D];泰山医学院;2010年
8 刘大伟;瑞舒伐他汀对PDGF诱导的人脐动脉平滑肌细胞表型转变的影响[D];河北医科大学;2011年
9 杨莉;自体PRP对钛表面成骨细胞增殖的影响及PDGF的变化[D];河北医科大学;2012年
10 李璟妍;PDGF-BB和PKGIα对血管平滑肌细胞形态和合成表型基因表达的影响[D];江苏大学;2010年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026