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超声靶向微泡破坏对支持细胞的生物学效应研究

张波  
【摘要】: 目的:探讨超声靶向微泡破坏对体外培养大鼠支持细胞的影响。 方法:分离与培养大鼠睾丸支持细胞,制作细胞悬液。取细胞悬液添加0.01ml微泡造影剂后即行超声辐照,超声辐照时间为60s,输出声强为0.5 W/cm2,频率为1MHz。分别取照射后5min,2、6、12、24 h作为分组时间点,在各时间点及进行支持细胞波形蛋白免疫组化染色、测定细胞超氧化物歧化酶(Superoxide dismutase,SOD)丙二醛(Malondialdehyde,MDA)以及存活细胞计数。 结果:成功分离与培养出大鼠睾丸支持细胞。超声联合微泡作用于支持细胞后5min,2、6、12、24h,支持细胞内波形蛋白的表达分别为:0.141±0.009、0.149±0.006、0.218±0.007、0.761±0.012、0.847±0.011,与空白对照及单纯超声组比较波形蛋白表达量的下降有显著差异(P0.05)。而空白对照组与单纯超声组比较波形蛋白表达量的下降无显著差异(P0.05)。支持细胞内MDA、SOD的含量在5min时为9.15±0.17、11.37±0.48,2 h时为13.25±0.56、12.54±0.36,6h为14.05±0.28、13.79±0.62,到12 h为9.47±0.12、14.33±0.63,与各自对照组比较均有显著差异。24 h时为3.75±0.48、16.02±0.33与各自对照组比较均无显著差异。而空白对照、单纯超声及超声+微泡组的支持细胞在24h、48h细胞存活数比较均无显著差异(P0.05)。可见超声联合微泡可以降低支持细胞内波形蛋白的表达,引起细胞内MDA早期可逆性升高,SOD活性下降,后期(24h)MDA含量恢复正常,SOD活性升高,而支持细胞的存活不受影响。 结论:超声靶向微泡破坏支持细胞的结构和功能引起可逆性损伤,通过降低支持细胞紧密连接蛋白的表达从而开放血睾丸屏障,继而影响生精细胞功能,为男性避孕的研究提供新的思路。


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