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《泸州医学院》 2011年
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FXR调控下Bsep和Ntcp在高脂血症大鼠胆固醇代谢中的作用机制

张孟瑜  
【摘要】:目的:本研究通过建立高脂血症大鼠模型,以法尼基衍生物X受体(FXR)和FXR的靶基因-肝脏中小胆管侧肝细胞毛细胆管膜上分布的胆盐输出泵(bile salt export pump, BSEP/Bsep),肝细胞血窦面基底膜上的牛磺胆酸钠转运蛋白(sodium/ taurocholate cotransporting polypeptide, NTCP/Ntcp)为研究对象,探讨在FXR调控下Bsep和Ntcp在高脂血症大鼠胆汁酸及胆固醇代谢中的作用及与高脂血症形成的相关性,为防治高脂血症提供新的依据和分子理论基础,有望为治疗胆汁酸代谢紊乱及相关性疾病提供一种新的思路。方法:取Wistar大鼠(雄性、体重145±8.5g)60只,随机分为2组,每组30只:普通饮食对照组(简称对照组)、高脂饮食实验组(简称实验组)。对照组予以普通饮食,实验组予以高脂饮食(配方为:在基础饲料中加入质量分数为0.04胆固醇、0.1猪油、0.05蔗糖、0.005胆酸钠、0.002丙基硫氧嘧啶),喂食90天,建立高脂血症模型,定期取血用自动生化仪检测胆固醇含量,8~12周监测血胆固醇水平,观察建模是否达到要求。两组入选大鼠均需排除已饮用含其它类药物饮食、高脂血症、糖尿病、畸形等疾病存在。建模成功后,所用实验方法分为以下两个环节:1.取对照组和实验组肝脏组织的RNA,应用逆转录-聚合酶链反应(RT-polymerase chain reaction; RT-PCR)技术检测两组模型肝脏组织的FXR,Bsep和Ntcp基因表达的强度;2.取对照组和实验组肝脏组织,石蜡切片后用免疫组化SP(streptavidin-perosidase)法检测两组模型肝脏组织的FXR,Bsep和Ntcp表达的强度。统计数据运用SPSS14.0 for windows统计软件包作统计学处理,P 0.05为有统计学意义。结果:1.电泳结果显示:实验中肝脏组织扩增产物都出现了内参β-actin基因的425bp扩增带和FXR , Bsep及Ntcp基因的283bp,289bp,325bp扩增带,实验组FXR基因及其调控下的Bsep基因扩增带亮度均强于对照组;实验组Ntcp基因扩增带亮度弱于对照组。半定量结果分析:利用Quantity One软件计算比较每一泳道中PCR产物条带的光密度值,计算FXR,Bsep及Ntcp基因与β-actin条带的光密度的相对比值,通过比较各样本FXR,Bsep及Ntcp基因的相对值,最终得出FXR,Bsep及Ntcp基因在肝脏组织中mRNA表达的相对含量。半定量结果的相对光密度值需每组每一实验对象同等处理条件下均重复测定3次,取其最终平均值作为统计用数据。最后结果显示:实验组大鼠FXR,Bsep基因mRNA表达高于对照组(0.8519±0.0270, t=65.398 P0.05),(0.8641±0.0221,t=61.110 P0.05),对照组大鼠Ntcp基因mRNA表达高于实验组(0.8645±0.0204,t=61.945 P0.05)。三种基因表达均出现差异,有统计学意义。2.免疫组化SP(streptavidin-perosidase)法结果显示:在高倍显微镜镜下肝脏组织中出现黄色染色颗粒为阳性细胞。每张切片随机选取5个视野,每个视野内观察100个细胞,阳性细胞≥10%为阳性,否则为阴性,利用四格表的Fisher确切概率法检验。结果显示:实验组FXR,Bsep,Ntcp表达阳性率为75%,76.7%,24.5%;对照组FXR,Bsep,Ntcp表达阳性率为17.3%,18.5%,71%。它们之间的差异有显著性,存在统计学意义FXR(X2=10.932 P0.05),Bsep(X2=10.773 P0.05),Ntcp(X2=9.759 P0.05)。结论:1.实验组大鼠的FXR基因mRNA的表达较对照组明显增加。2.实验组大鼠FXR调控下的Bsep基因mRNA表达高于对照组,Ntcp基因mRNA的表达低于对照组。故高脂血症时,肝脏胆汁酸排泄率增加,摄取率减少,减慢高脂血症的形成,减轻肝脏的负担,维护肝脏的功能。3.作为FXR的靶基因, Bsep与FXR的变化一致,Ntcp与FXR呈相反方向变化。提示我们可致力发展作用于FXR的药物,为高脂血症及其相关疾病找到新的治疗方法和手段。
【学位授予单位】:泸州医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:R589.2

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