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《泸州医学院》 2012年
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胆红素尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶1A1与原发性肝内胆管结石关系的研究

蒋禹  
【摘要】:目的:胆红素葡萄糖醛酸基转移酶(BilirubinUDP-glucuronsytran-sferase,B-UGT)是胆红素代谢的关键酶,其编码基因为UGT1A1。既往实验研究提示B-UGT活性降低可能是导致胆汁中单结合胆红素增多,形成致石胆汁的重要原因。本实验观察原发性肝内胆管结石(PrimaryIntrahepaticStones,PIS)患者肝细胞内胆红素葡萄糖醛酸基转移酶基因UGT1A1mRNA及其蛋白(B-UGT)表达情况,在基因水平探索原发性肝内胆管结石的发病机理及调控机制 对象与方法:1、以原发性肝内胆管结石病患者肝脏为标本,取33例肝内胆管结石患者肝脏(HS组),其中男性患者19人,女性14人。15例非结石患者肝脏(其中肝囊肿患者8人,肝血管瘤6人,肝癌1人,男性9人,女性6人)为对照组(NS组)。在术中将肝组织切下后,立即切除适当大小装入冻存管,急送泸州医学院附属医院中心实验室液氮速冻,然后转存于-80摄氏度冰箱保存。2、肝脏细胞内UGT1A1基因mRNA表达量测定:以GAPDH为内参照,采用Real-timeQuantitativePCR方法检测UGT1A1基因mRNA的表达量。上游引物序列为TGCCCACTGTATTCTTCTTGC(5’-3’),下游引物序列为TTCTGTGAAAAGGCAATGAGC(5’-3’)。根据标准曲线和样本PCR反应Ct值,用Bio-RadiQ5软件分析计算mRNA表达量。3、UGT1A1基因蛋白(B-UGT)表达量的检测:以β-actin为内参,抗体选择美国ABCAM公司产品UGT1A1(AB62600),采用Westernblot法检测上述基因所编码蛋白表达量。图像结果使用Bio-Rad凝胶摄像分析系统及QuantityOne4.4.0软件分析计算相关蛋白的表达量。检测术前患者空腹12小时以上血清生化指标:总胆红素、直接胆红素、间接胆红素、总胆固醇、甘油三酯、总胆汁酸、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白 结果:1、血清生化指标分析:HS组血清总胆固醇、甘油三酯、总胆汁酸、高密度低蛋白、低密度脂蛋白、总胆红素、直接胆红素、间接胆红素均低于对照NS组,但差异无统计学意义。2、HS组UGT1A1mRNA表达量为10.246±2.151,NS组为1.000±0.242,HS组UGT1A1mRNA表达量显著高于对照组,t=2.89,P=0.018;3、HS组UGT1A1蛋白(B-UGT)表达量为1.059±0.232,NS组为0.835±0.007,HS组UGT1A1蛋白(B-UGT)表达量高于对照组,t=2.487,p=0.020。3、PIS患者UGT1A1基因mRNA表达量与蛋白(B-UGT)表达量无明显相关性(r=-0.039,P=0.827)。血清胆固醇、总胆汁酸、总胆红素、间接胆红素、高密度脂蛋白以及低密度脂蛋白、甘油三酯、直接胆红素与mRNA、蛋白(B-UGT)表达量均无明显相关性,其P值均大于0.05。 结论:UGT1A1是原发性肝内胆管结石重要的致石基因。原发性肝内胆管结石患者体内UGT1A1基因mRNA及其蛋白(B-UGT)表达丰度均增强,两者无明显相关性。。B-UGT活性与UGT1A1基因表达水平不一定呈比例关系,是否是PIS患者UGT1A1基因编码区发生突变使B-UGT结构异常从而使其功能发生缺陷或丧失仍有待于进一步研究。
【学位授予单位】:泸州医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:R575.7

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