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《西南医科大学》 2020年 硕士论文
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E-钙粘蛋白、β-连环素和基质金属蛋白酶-7在口腔鳞状细胞癌中的表达及临床意义

李秀  
【摘要】:目的:口腔鳞状细胞癌(oral squamous cell carcinoma,OSCC)是头颈部最常见的恶性肿瘤之一,恶性程度高,常出现糜烂、溃疡、出血及舌活动受限等临床症状,严重影响了患者的日常生活。E-钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)是一种钙依赖性跨膜糖蛋白,对维持正常上皮的极性和完整性起着重要作用,E-cad的低表达降低了同型细胞间的粘附力,促进了多种肿瘤的发生发展。β-连环素(β-catenin,β-cat)是一种多功能蛋白,是经典Wnt信号通路的关键效应分子,参与调节细胞的正常生长及分化,其异常表达可激活体内多数原癌基因,参与肿瘤的发生发展。E-cad功能的发挥离不开β-cat,两者必须形成E-cad/cat复合物才能发挥作用。基质金属蛋白酶-7(Matrix Metalloproteinase-7,MMP-7)是一种蛋白水解酶,可通过降解细胞外基质(Extracellular matrix,ECM)以及基底膜大分子等方式来调节肿瘤的进展。MMP-7是Wnt/β-cat关键下游靶基因之一,并可水解E-cad的胞外结构,使之细胞间粘附功能丧失。E-cad、β-cat和MMP-7在多种肿瘤中可发生相互作用,共同介导肿瘤的发生发展,但关于三者在OSCC中的关系及其相关性研究,目前研究较少。本实验通过收集正常口腔黏膜组织、OSCC新鲜组织、OSCC癌旁组织和OSCC病理切片,采用实时定量聚合酶链反应PCR法(real-time quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)和免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)和分别检测OSCC中E-cad、β-cat和MMP-7在基因水平和蛋白水平的表达,并分析三种蛋白的表达与患者临床病理参数的关系,探讨三者与OSCC发生发展的关系,为进一步明确OSCC的发生机制、诊断及治疗提供新的思路。方法:1.收集符合标准的新鲜OSCC组织、癌旁组织及正常口腔黏膜组织各6例,采用qRT-PCR法分别检测三种组织中E-cad、β-cat及MMP-7mRNA的表达;2.选取新鲜正常口腔黏膜组织10例和符合标准的低、中、高分化OSCC石蜡组织块各10例,共40例,苏木精-伊红染色法(hematoxylin and eosin,HE)染色后进行病理分级,采用免疫组化SP法检测正常口腔黏膜及OSCC中E-cad、β-cat及MMP-7蛋白的表达量,并分析三者与患者临床病理参数的关系。结果:1.qRT-PCR结果:E-cad和β-cat mRNA的相对表达量在正常组最高;与正常组相比,OSCC组中两者的相对表达量依次下调0.58倍和0.76倍,癌旁组中则依次下调0.68倍和0.53倍,差异均具有统计学意义(P0.05);癌旁组与OSCC组相比较,两者mRNA的表达差异均无统计学意义(P0.05)。MMP-7 mRNA在正常组中呈阴性表达,在鳞癌组及癌旁组中均呈强阳性表达,且癌旁组最高(与鳞癌组相比,上调6.90倍),两组间表达差异有统计学意义(P0.05);2.HE染色结果:对正常口腔黏膜组织及所选OSCC蜡块行常规HE染色,由两位资深病理科医师对组织切片复片,确定为正常口腔黏膜组织及高、中、低分化OSCC各10例;3.IHC染色结果:正常口腔黏膜组织中,E-cad和β-cat在上皮细胞的胞膜上呈阳性表达,MMP-7呈阴性表达。随着OSCC分化程度的降低,E-cad在胞膜上表达逐渐下调甚至缺失;β-cat在胞膜上表达逐渐减弱甚至缺失,并逐渐出现胞质或胞核中表达;MMP-7在胞质内表达水平逐渐上调。三种蛋白的表达在四组间比较,差异均具有统计学意义(P0.05),且均与OSCC分化程度相关(P0.05);4.三种蛋白的表达与患者临床病理参数的关系:在OSCC中,E-cad在无淋巴结转移组和无浸润组中的表达均较高,差异均具有统计学意义(P0.05);而在患者年龄、性别、吸烟饮酒、肿瘤大小、临床分期以及复发率(随访3-30月)各组中的表达差异均无统计学意义(P0.05)。β-cat和MMP-7分别在各组中的表达差异均无统计学意义(P0.05)。结论:在OSCC中,E-cad、β-cat和MMP-7的表达与OSCC分化程度密切相关,三者在OSCC进程中可能发挥一定的协同作用,共同促进OSCC的发生发展。


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