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《西南医科大学》 2020年 硕士论文
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甲连盆腔胶囊对盆腔炎性疾病后遗症模型大鼠sICAM-1、FGF-2及TGF-β1/Smads通路的影响

杨静  
【摘要】:目的:通过甲连盆腔胶囊干预盆腔炎性疾病后遗症(SPID)模型大鼠,观察甲连盆腔胶囊对SPID大鼠的治疗作用,并着眼于纤维化角度,从形态学、病理学、分子生物学层面,对其可能的作用机制进行初步探讨,为其临床推广应用提供理论依据。方法:90只SPF级SD雌性大鼠随机分为空白对照组(NC组,n=12)和假手术组(Sham组,n=12),采用苯酚胶浆法对剩余大鼠建立SPID模型,造模10天后随机抽取3只模型大鼠进行形态学和病理学观察用于模型验证,验证成功后再随机分为模型组(Model组,n=12)、妇科千金胶囊组(FKQJ组,n=12)、甲连盆腔胶囊低、中、高剂量组(JLPQ-L、JLPQ-M、JLPQ-H组,n=12)。NC组、Sham组和Model组灌服蒸馏水(10 mL/kg),FKQJ组灌服妇科千金胶囊药液(0.25 g/kg)灌胃,JLPQ-L、JLPQ-M和JLPQ-H组分别灌服甲连盆腔胶囊药液(0.375 g/kg、0.75 g/kg和1.5 g/kg),每天1次,持续21天。每天观察大鼠一般情况,每隔5~7天测量大鼠体重,末次灌胃后取材,肉眼观察盆腔大体形态,测量脾脏和子宫湿重,计算脏器系数,马松(Masson)染色观察子宫组织纤维化情况,计算纤维面积比率,ELISA测定血清中可溶性细胞间黏附因子-1(sICAM-1)和成纤维细胞生长因子-2(FGF-2)含量,免疫组化(IHC)和蛋白印迹法(WB)检测子宫组织中转化生子因子-β1(TGF-β1)、TGF-β1 II型受体(TβRII)、磷酸化Smad2/3(p-Smad2/3)和Smad7蛋白的表达量。结果:1.模型建立:造模10天后模型大鼠的观察结果符合SPID病理特征,模型制备成功。2.一般情况:造模前,各组大鼠一般情况良好,造模后,Model组大鼠开始精神亢奋,暴躁易怒,随着造模时间的增加,逐渐精神萎靡,动作迟缓,进食减少,饮水增多,阴道分泌物较多,干预后,各治疗组上述情况得到不同程度地改善,以JLPQ-H组改善最为明显。3.体重变化:Model组和各治疗组在造模第5天体重降至最低,与NC组差异明显(P0.05),随着干预时间的延长,Model组上升幅度最小,到灌胃21天,Model组与其他组存在差异(P0.05),JLPQ各剂量组两两比较均有统计学差异(P0.05)。4.大体形态:Model组盆腔广泛粘连充血,子宫严重变形,宫腔扩张或狭窄;各治疗组均较Model组有所好转。5.脾脏和子宫系数:Model组脾脏和子宫系数明显升高(P0.05),各治疗组均较Model组下降(P0.05),JLPQ-L与JLPQ-H之间差异有统计学意义(P0.05)。6.子宫组织纤维化情况:(1)定性分析:Model组内膜中腺体极少,间质和肌层大量蓝色胶原纤维聚集;各治疗组间质胶原纤维不同程度减少,可见腺体再生。(2)半定量分析:Model组纤维面积比率显著增加(P0.05),各治疗组较Model组降低(P0.05),JLPQ各剂量组之间差异均有统计学意义(P0.05)。7.血清sICAM-1和FGF-2含量:Model组sICAM-1和FGF-2含量明显升高(P0.05),各治疗组较Model组下降(P0.05),JLPQ各剂量组之间差异均有统计学意义(P0.05)。8.子宫组织TGF-β1/Smads通路相关蛋白表达:(1)大致定位和定性分析:Model组TGF-β1、TβRII和p-Smad2/3颗粒信号较NC组强,范围广,子宫各层细胞均可见分布,Smad7表达弱,各治疗组TGF-β1、TβRII和p-Smad2/3蛋白染色较Model组浅,而Smad7染色加深,趋近于NC组,以JLPQ-H组最为接近。(2)半定量分析:各组大鼠IHC和WB蛋白表达趋势大致相同,与NC组比较,Model组Smad7蛋白表达下降,其余蛋白表达升高(P0.05),经药物干预后,各治疗组Smad7蛋白表达量较Model组增多,而其余蛋白表达减少(P0.05),且这种变化趋势在甲连盆腔胶囊各剂量组表现出剂量依赖性,剂量越大,变化越明显。结论:1.甲连盆腔胶囊可修复SPID大鼠盆腔组织形态,缓解脾脏和子宫肿胀,改善盆腔粘连,减轻组织纤维化损伤。2.甲连盆腔胶囊可能通过调控血清中sICAM-1和FGF-2的水平,以及抑制TGF-β1/Smads信号通路的病理活化(下调子宫组织中TGF-β1、TβRII和p-Smad2/3蛋白的表达,上调Smad7蛋白的表达),从而发挥抗组织粘连与纤维化的作用。3.甲连盆腔胶囊对SPID的治疗作用表现出剂量依赖性,以高剂量组最优,但大部分指标仍未恢复至正常水平,说明甲连盆腔胶囊仅能减轻组织纤维化损伤程度和阻止纤维化进一步发生发展,但对已经形成的纤维化病变并不能达到完全逆转和消除。4.甲连盆腔胶囊与妇科千金胶囊对SPID的疗效及在抗纤维化方面的作用机制可能相似。


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