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《泸州医学院》 2009年
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大鼠脑出血蛋白激酶C与细胞凋亡关系的实验研究

张德绸  
【摘要】: 目的:观察脑出血后血肿周围蛋白激酶C(Protein kinase C ,PKC)、神经细胞凋亡、一氧化氮(NO)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达及其多黏菌素B(PMB)对上述表达的影响,进一步阐明脑出血损伤机制及其可能的脑保护应对措施,为临床治疗脑出血提供实验理论基础。方法:1、应用大鼠脑立体定位仪定向技术,将自体不凝血注人大鼠壳尾核制备脑出血模型;2、健康雄性SD大鼠(n=100)随机分为假手术组(n=25)、脑出血组(n=25)、小剂量多黏菌素B干预组(n=25)、大剂量多黏菌素B干预组(n=25);3、给药方法:小剂量多黏菌素B干预组在大鼠造模成功后2h给予腹腔注射多黏菌素B(0.4mg/kg.d),以后q12h给药;大剂量多黏菌素B干预组在大鼠造模成功后2h给予腹腔注射多黏菌素B(0.8mg/ kg.d),以后q12h给药;ICH组大鼠在造模成功后相应时间点给予同剂量的生理盐水;假手术组除手术过程不注入自体血外,其余与ICH组完全一致;4、断头取脑时间分别为6h、12h、24h、72h、120h,每亚组5只动物;5、脑组织匀浆、脱水、浸蜡、软石蜡包埋制成蜡块,连续切片作PKC抗体免疫组化染色和TUNEL染色,脑组织匀浆NO硝酸还原酶法,TNF-a放射免疫法,病理图文处理并照片观察;6、结果用SPSS 13.0统计分析。结果:1、假手术组蛋白激酶C少量表达,偶见凋亡细胞(TUNEL阳性细胞);2、蛋白激酶C同工酶在实验性脑出血大鼠脑组织中大量表达。主要以出血周围区最明显,蛋白激酶C在脑出血后6h表达已开始上升,12h明显上升,24h达高峰,72h仍保持较高水平,120h基本降至正常;3、脑出血组6h血肿周边组织出现TUNEL阳性细胞,72h达高峰,120h时仍有较高表达;4、脑出血周边组织NO含量,脑出血后6h起,出血周边脑组织NO含量明显增高,72h达高峰,持续至120h仍有较高表达;5、TNF-α在脑出血后6h含量明显增加,72h达高峰, 120h时仍保持较高水平,下降不明显;6、脑出血组血肿周围PKC与TUNEL阳性细胞(r=0.842,P=0.0000.05)、NO含量(r=0.783,P=0.0000.05)、TNF-α含量(r=0.664,P=0.0010.05)呈正相关。小剂量多黏菌素B干预组血肿周围蛋白激酶C与TUNEL阳性细胞(r=0.774,P=0.0000.05)、NO含量(r=0.814,P=0.0000.05)、TNF-α含量(r=0.605,P=0.0050.05)均呈正相关;7、应用多黏菌素B干预后自6h起各时间点蛋白激酶C表达、TUNEL阳性细胞、NO及TNF-α含量均较脑出血组减少,有明显抑制作用,以各自高峰时间最为显著;8、多黏菌素B干预组剂量的大小无明显差异性。结论:1、自体血注入法制作大鼠脑出血动物模型方法较为简单,成功率较高;2、实验性脑出血可诱导血肿周围神经元PKC表达上调,可能与出血灶周围缺血缺氧、再灌注等有关,机理尚不清楚;3、ICH后血肿周围PKC上调、神经细胞凋亡、TNF-α及NO明显增多,说明它们可能参与脑出血继发性损害病理生理过程;4、ICH后PKC被激活,血肿周围PKC与TUNEL阳性细胞数、NO和TNF-α含量呈明显正相关;5、多黏菌素B能够明显抑制PKC激活,减少血肿周围细胞凋亡,减少NO和TNF-α释放,起到神经元保护作用。
【学位授予单位】:泸州医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R743.3

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