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《泸州医学院》 2009年
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阿奇霉素在结核性胸膜炎中的免疫纠偏作用研究

傅玉琼  
【摘要】: 目的:研究阿奇霉素对结核性胸腔积液中淋巴细胞表达细胞因子(IFN-γ、TGF-β、IL-4、IL-12)功能的影响,探讨阿奇霉素在结核病中可能的免疫纠偏作用。方法:以诊断明确的结核性胸膜炎患者为研究对象;无菌术收集胸腔积液,上清液冻存备用,以人淋巴细胞分离液及贴壁培养方法分离其中细胞;CD4单克隆抗体孵育提纯细胞后经免疫细胞化学染色验证所得细胞类型;并将分离细胞以0.1%台盼蓝染色活细胞计数,调细胞浓度为1×10~6/ml,设阴性对照组(不施加药物干预)、阳性对照组(给予不同浓度多抗甲素干预)、试验组(以不同浓度阿奇霉素干预),接种于12孔板(含10%胎牛血清、100mg/L植物血凝素的完整RPMI 1640培养基),其中,阴性对照组设5个复孔,阳性对照组和试验组分别按同一浓度组设5个复孔,置37℃、5%CO_2孵箱中培养;各培养孔内均不更换培养基,分别于12、24、48、72小时离心,取培养液及细胞沉渣备用;抽提总RNA,用逆转录-聚合酶链式反应法(reverse transcription -polymerase chainreaction,RT-PCR)观察不同干预下各阶段γ-干扰素(interferon-gamma,IFN-γ)、细胞转化生长因子(transforming growth factor-beta,TGF-β)、白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)、白细胞介素-12(interleukin-12,IL-12)mRNA表达水平;同步用酶联免疫吸附试验(enzyme linked immunosorbentassay,ELISA)检测不同阶段各组上清液及培养液内IFN-γ、TGF-β、IL-4、IL-12浓度。结果:以CD4单克隆抗体孵育结核性胸腔积液中分离细胞经免疫化学染色,明显呈棕色反应,提示CD_4+T淋巴细胞阳性率为74.73%。目的基因扩增电泳条带灰度扫描结果显示,试验组IFN-γ、IL-12 mRNA表达上调,TGF-β、IL-4mRNA表达下调,与阴性对照组相比有统计学差异(P<0.05),与阳性对照组差异无统计学意义(P>0.05)。ELISA检测结果与RT-PCR分析结果基本一致,呈同向变化,即试验组IFN-γ、IL-12浓度增加,TGF-β、IL-4浓度减少,与阴性对照组有统计学差异(P<0.05),与阳性对照组差异无统计学意义(P>0.05)。并且,前述结果呈现一定时间以及剂量依赖性,即随阿奇霉素浓度增加、作用时间延长,IFN-γ、IL-12表达上调,及TGF-β、IL-4表达下调逐渐显著;以80μg/ml组孵育细胞、作用48小时,效果最为明显。结论:阿奇霉素体外干预结核性胸腔积液中CD4+T淋巴细胞可上调IFN-γ、IL-12表达以及下调TGF-β、IL-4表达,其作用与多抗甲素相当(P>0.05),并与时间及浓度有一定关系。
【学位授予单位】:泸州医学院
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:R521.7

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