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《成都中医药大学》 2010年
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补肾中药对卵细胞体外成熟的影响

段恒  
【摘要】:目的探讨含补肾中药鼠血清对小鼠卵细胞体外成熟的影响及其机制。 方法未成熟卵细胞来自孕马血清促性腺激素(PMSG)刺激后的90只ICR小鼠的卵巢。将收集的小鼠卵丘细胞-卵母细胞复合体(COCs)245个随机分为含补肾中药鼠血清1#、2#、3#组、空白鼠血清组、空白组,分别置入添加了2%含补肾中药鼠血清1#、2#、3#、2%空白鼠血清及未添加鼠血清的M199培养液中,采用微滴法培养24h,体视显微镜和倒置显微镜观察并计算小鼠卵细胞体外第一极体(PB1)排出率即成熟率。将COCs约238个随机分为含药鼠血清1#组、卵泡刺激素(FSH)组、空白鼠血清组、空白组,分别置入添加了2%含药鼠血清1#、100IU/L FSH、2%空白鼠血清及未添加鼠血清的M199培养液中,显微镜观察并计算小鼠卵细胞体外成熟率、受精率及卵裂率,实验重复3次。将COCs随机分为含药鼠血清1#组、卵泡刺激素(FSH)组、空白鼠血清组、空白组,免疫荧光标记法结合反射荧光显微镜观察细胞骨架指标(纺锤体、染色体),及成熟促进因子(MPF)调节亚基周期蛋白B(CyclinB)的表达;荧光检测仪定量分析Cyclin B1的表达强度。将COCs随机分为含药鼠血清1#组、空白鼠血清组,半定量RT-PCR检测卯母细胞MPF调节亚基Cyclin Bl mRNA的表达。采用酶联免疫法测定含药鼠血清1#、2#、3#与空白鼠血清FSH和雌二醇(E2)水平。 结果 1.含药鼠血清1#、2#组均较空白组卵细胞成熟率明显增高(42.31%、36.17% vs 16.67%,分别P0.01、P0.05);含药鼠血清1#组较空白鼠血清组卵细胞成熟率明显增高(42.31% vs 22.92%,P0.05);含药鼠血清1#组较空白组生发泡破裂和第一极体(GVBD+PBl)出现率明显增高(84.62% vs 66.67%,P0.05);含药鼠血清各组之间GVBD+PBl和成熟率比较,无显著性差异。 2.FSH组、含药鼠血清1#组均较空白组卵细胞成熟率明显增高(33.69%、40.98% vs 17.71%,P0.01):FSH组、含药鼠血清1#组均较空白鼠血清组卵细胞成熟率明显增高(33.69%、40.98% vs 22.81%,分别P0.05、P0.01);FSH组、含药鼠血清1#组均较空白组GVBD+PBl明显增高(80.75%、83.61% vs 64.00%,P0.01):FSH组、含药鼠血清1#组均较空白鼠血清组GVBD+PBl明显增高(80.75%、83.61% vs 71.35%,分别P0.05、P0.01);FSH组与含药鼠血清1#组GVBD+PBl和成熟率比较,无显著性差异;各组之间受精率及卵裂率总体上无明显差异。 3次重复实验分次结果显示基本一致。FSH组、含药鼠血清1#组均较空白组卵细胞成熟率明显增高,分别P0.05、P0.05或P0.01;含药鼠血清1#组均较空白血清组卵细胞成熟率明显增高,P0.05;FSH组、含药鼠血清1#组均较空白组GVBD+PBl明显增高,分别P0.05、P0.05或P0.01;FSH与含药鼠血清1#组GVBD+PBl和成熟率比较,无显著性差异。 3.FSH、含药鼠血清1#组CyclinBl的荧光强度较空白组、空白鼠血清组明显增强(15069.00±3908.88、17936.50±4717.42 vs 5029.50±1656.61、6625.33±1777.41,P0.01);FSH与含药鼠血清1#组比较,无显著性差异。含药鼠血清1#组Cyclin Bl mRNA的表达(Cyclin Bl/GAPDH=2.78)较空白鼠血清组(Cyclin Bl/GAPDH=2)增强。空白组、空白鼠血清组、FSH组、含药鼠血清1#组卵子骨架各组之间比较,无显著性差异。含药鼠血清1#、2#、3#组血清FSH和E2水平均较空白鼠血清组高,无显著性差异。 结论含补肾中药鼠血.清1#体外可以促进小鼠未成熟卵细胞生长发育,主要是促进卵细胞核成熟,并且不增加成熟卵细胞细胞骨架的异常几率。其机制与增强卵细胞成熟促进因子调节亚基Cvclin Bl的表达有关。
【学位授予单位】:成都中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2010
【分类号】:R285

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【参考文献】
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