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《成都中医药大学》 2014年
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艾灸调控RA滑膜细胞功能的JAK-STAT信号通路负反馈机制研究

杨馨  
【摘要】:目的: 在艾灸抗炎效应明确、明显抑制滑膜细胞异常分泌功能、良性调控JAK-STAT信号通路的基本事实下,本研究旨在通过针灸理论指导,艾灸“肾俞”、“足三里”穴治疗实验性RA,围绕滑膜炎症关键病理环节和滑膜细胞分泌功能目标效应,以JAK-STAT信号通路为研究主线,选择对胞内炎症信号转导通路中具有决定性作用的负反馈调节因子SOCS1、PTPN22、PIAS1作为研究切入点,运用RNAi, RT-PCR、Western blot等方法技术,探索艾灸调控RA滑膜细胞分泌功能的JAK-STAT信号通路负反馈机制,以期更全面和深入地揭示艾灸治疗RA的作用原理。 方法: 36只日本大耳白兔,随机分为空白对照组、RA模型组、艾灸治疗组、艾灸+SOCS1基因干扰组、艾灸+PTPN22基因干扰组、艾灸+PIAS1基因干扰组,6只动物/组。按0.5ml/Kg体重剂量,将福氏完全佐剂平均注入模型组、艾灸各组动物的双后膝关节腔内(对照组动物同法注入无菌生理盐水作为对照),运用慢病毒介导的SOCS1、PTPN22、PIAS1RNAi作为干预手段,麦粒灸“肾俞”、“足三里”穴治疗实验性RA(5壮/穴/天,6天1疗程,共治疗3个疗程,疗程之间休息1天)。 1.观察艾灸治疗实验性RA家兔的抗炎治疗效应:RA家兔的整体状况、膝关节周长、滑膜组织炎症病理形态; 2.研究艾灸对实验性RA滑膜细胞分泌功能的影响:Elisa法检测滑膜液中IL-1β、TNF-α EGF、FGF含量; 3.研究艾灸对实验性RA模型滑膜细胞JAK-STAT信号通路SOC1、 PTPN22、PIAS1表达的影响:western blot法及RT-PCR法分别检测滑膜组织SOCS1、PTPN22、PIAS1蛋白及mRNA的表达; 4. SOCS1、PTPN22、PIAS1对艾灸调控RA滑膜细胞JAK-STAT通路影响的研究:RT-PCR法检测JAK-STAT信号通路相关分子JAK1、JAK2、STAT1、 STAT3、STAT4、STAT5、STAT6的表达。 结果: 1.艾灸“肾俞”、“足三里”穴可以明显改善RA家兔全身状况、膝关节肿胀、关节滑膜炎症病理变化,而在SOCS1、PTPN22、PIAS1被干扰的情况下其作用显著降低。 2.滑膜液细胞因子含量检测结果显示:与对照组比较,模型组IL-1β、 TNF-α、EGF、FGF含量显著升高(P0.01);与模型组比较,艾灸组IL-1β、TNF-α EGF、FGF含量显著降低(P0.01);SOCS1干扰组、PTPN22干扰组、PIAS1干扰组与艾灸组比较,下调IL-1β、TNF-α、EGF、FGF含量效果不及艾灸组(P0.05)。 3.滑膜组织SOCS1、PTPN22、PIAS1表达检测结果显示:与对照组比较,SOCS1、PTPN22、 PIAS1干扰组滑膜组织SOCS1、PTPN22、PIAS1基因、蛋白的表达有显著减小(P0.05),表明慢病毒介导的SOCS1、PTPN22、PIAS1RNAi模型塑造成功;与对照组比较,模型组家兔滑膜组织SOCS1、PTPN22、PIAS1基因及蛋白表达显著下降(P0.01);与模型组比较,艾灸组家兔滑膜组织SOCS1、 PTPN22、PIAS1基因及蛋白表达显著增加(P0.01)。 4.滑膜组织JAK-STAT信号通路相关信号分子表达检测结果显示: (1)与对照组比较,模型组家兔滑膜组织JAK1、JAK2、STAT1、STAT4基因的表达有显著提高(P0.05),STAT3、STAT5、STAT6基因的表达有显著减小(P0.05); (2)与模型组比较,艾灸组家兔滑膜组织JAK1、JAK2、STAT1、STAT4基因的表达有显著降低(P0.05), STAT3、STAT5、STAT6基因的表达有显著增加(P0.05); (3)与艾灸组比较,SOCS1干扰组家兔滑膜组织JAK2、STAT1、STAT4基因的表达有显著升高(P0.01),STAT3基因的表达有显著的下降(P0.05);PTPN22干扰组家兔滑膜组织JAK1、STAT1、STAT4基因的表达有显著升高(P0.05), STAT3基因的表达有显著的下降(P0.05);PIAS1干扰组家兔滑膜组织JAK1、STAT1基因的表达有显著升高(P0.05),STAT3、STAT5、STAT6基因的表达有显著的下降(P0.05)。 结论: 1.艾灸“肾俞”、“足三里”穴可以明显改善实验性RA家兔全身状况、膝关节肿胀、关节滑膜炎症病理变化,说明艾灸抗炎效应明确,能有效控制RA滑膜炎症,但在SOCS1、PTPN22、PIAS1被干扰的情况下其抗炎作用显著降低,提示艾灸治疗RA的抗炎效应可能与SOCS1、PTPN22、PIAS1对JAK-STAT信号通路的负反馈调控关系密切。 2.艾灸“肾俞”、“足三里”穴可显著降低实验性RA家兔滑膜液炎症相关细胞因子IL-1β、TNF-α、EGF、FGF的含量,但在SOCS1、PTPN22、PIAS1被干扰的情况下其作用显著降低,提示SOCS1、PTPN22、PIAS1对JAK-STAT信号通路的负反馈调控可能与艾灸抑制实验性RA滑膜细胞的异常分泌功能密切关联。 3.艾灸“肾俞”、“足三里”穴可提高实验性RA家兔滑膜组织SOCS1、 PTPN22、PIAS1蛋白及基因的表达,提示艾灸治疗RA的抗炎效应可能与SOCS1、 PTPN22、PIAS1对JAK-STAT信号通路的负反馈调控密切相关。 4.艾灸“肾俞”、“足三里”穴可降低实验性RA家兔滑膜组织JAK1、JAK2, STAT1、STAT4的基因表达,提高STAT3、STAT5、STAT6的基因表达,在SOCS1、PTPN22、PIAS1被干扰的情况下,不同信号分子有不同的表达情况,提示SOCS1、PTPN22、PIAS1分别通过不同途径影响JAK-STAT信号通路的激活状态,其对JAK-STAT信号通路的良性调控可能是艾灸治疗RA抗炎效应实现的途径之一。
【学位授予单位】:成都中医药大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2014
【分类号】:R245

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【参考文献】
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