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《成都中医药大学》 2016年
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从Leptin-AMPK调脂通路研究黄连吴茱萸配伍降血脂作用机制

林晶晶  
【摘要】:目的本实验以高脂血症模型大鼠为载体,黄连吴茱萸配伍1:1(小檗碱吴茱萸碱配伍)为研究对象,考察黄连吴茱萸配伍的降血脂作用,以Leptin-AMPK信号通路为靶点研究其降脂作用机制,揭示黄连吴茱萸的配伍机理。实验方法本实验采用SD雄性大鼠108只,造模期间随机抽取12只作为空白对照组,其余均为模型组。以自由进食高脂饲料方式建立大鼠高脂血症模型,造模期间每天记录大鼠一般情况及饲料消耗量,每3天记录体重变化。每周随机抽取6只大鼠(空白对照组3只,模型组3只)尾静脉取血检测血清胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)水平,以评价造模是否成功。造模第6周,随机抽取的模型组大鼠血清TC水平较空白对照组显著升高,约为空白对照组2倍,提示造模成功。造模成功后,除空白对照组外,所有大鼠按血脂水平随机分为8组,即模型组、阳性药组(辛伐他汀)(10mg/kg)、小檗碱高剂量组(72.8mg/kg)、小檗碱低剂量组(36.4mg/kg)、吴茱萸碱高剂量组(16.8mg/kg)、吴茱萸碱低剂量组(8.4mg/kg)、配伍高剂量组(89.1mg/kg)、配伍低剂量组(44.6mg/kg),共9组,每组8只;空白对照组灌胃CMC溶液,给药体积1ml/100g。给药期间,除空白对照组进食普通饲料外,其余均进食高脂饲料。给药期间,每天记录大鼠一般情况(毛发、活动、粪便、精神状态)及饲料消耗量,每3天记录体重变化。连续给药60天,实验结束前一天,禁食不禁水16小时。末次给药后,腹主动脉取血,分离血清,检测血脂水平(胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白)及血清瘦素(Leptin)含量。手术分离大鼠肝脏拍照记录其外形并称重,计算肝指数,Elisa试剂盒检测肝脏TC、TG,进行肝脏组织病理形态学检测。Western blot方法检测肝脏单磷酸腺苷活化蛋白激酶(AMPK)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、肉毒碱棕榈酰转移酶-1(CPTl)蛋白表达,RTreal-timePCR方法检测肝脏AMPK、ACC、CPT1基因表达。统计实验数据并分析。实验结果1实验性高脂血症大鼠模型的建立与评价正常对照组大鼠一般情况良好。模型组大鼠食量减少,个别大鼠皮毛萎黄耸立,无光泽;大便稀溏,排泄物较多,异味重;精神亢奋,活动增加。造模期间,模型组大鼠体重显著低于空白对照组(P0.01)。造模第六周,模型组大鼠血清TC水平显著高于空白对照组(P0.01),约为空白对照组2倍,提示造模成功。2黄连吴茱萸配伍对高脂血症大鼠体重水平的影响模型组大鼠体重较空白对照组降低(P0.05)。等倍数剂量组比较,配伍高剂量组体重升高显著(P0.01),其体重水平高于单用小檗碱、吴茱萸碱。3黄连吴茱萸配伍对血脂水平的影响给药60天后,配伍高剂量组降低血清TC、LDL作用显著(P0.01),低于单用小檗碱、吴茱萸碱。各给药组对血清TG无改善作用。模型组大鼠血清HDL值低于空白对照组,但无统计学意义。4黄连吴茱萸配伍对肝脏指数、肝脏TC、TG及肝脏病理的影响模型组大鼠肝指数较空白对照组显著升高(P0.01),各给药组对肝指数均有改善作用(P0.01)。等倍数剂量组比较,配伍高、低剂量组肝指数均低于等倍数剂量组单用小檗碱、吴茱萸碱。模型组大鼠肝脏TC、TG较空白对照组显著升高(P0.01)。吴茱萸碱高、低剂量组肝脏TC、TG水平低于等倍数剂量下小檗碱及配伍组。空白对照组肝细胞正常或极轻度脂肪变性。模型组肝细胞重度脂肪变性。各给药组大鼠的肝组织为肝细胞轻度或中度脂肪变性(P0.01)。5黄连吴茱萸配伍降血脂与Leptin-AMPK信号通路蛋白表达的关系模型组大鼠血清Leptin较空白对照组显著降低近8倍(P0.01);配伍低剂量组Leptin水平高于小檗碱、吴茱萸碱低剂量组。给药60天后,模型组AMPK-P、ACC-P、CPT1蛋白表达较空白对照组降低。相对于模型组,配伍低剂量组AMPK-P、ACC-P、CPT1水平高于单用小檗碱、吴茱萸碱。6黄连吴茱萸配伍降血脂与Leptin-AMPK信号通路基因表达的关系给药60天后,模型组AMPK、ACC、CPT1基因表达较空白对照组降低。相对于模型组,配伍低剂量组AMPK、CPT1水平高于单用小檗碱、吴茱萸碱。结论黄连吴茱萸辛开苦降配伍具有降血脂功效,在改善高脂血症大鼠体重、下调血清TC、LDL水平、降低肝指数方面具有协同增效、相反相成的作用。黄连吴茱萸辛开苦降配伍对Leptin-AMPK信号通路中除ACC基因表达外,对各靶点蛋白、基因表达量的调节亦有协同增效、相反相成的作用。
【学位授予单位】:成都中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2016
【分类号】:R285.5

【参考文献】
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