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《成都中医药大学》 2001年
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应用抑制消减杂交筛选小鼠肾虚证差异表达基因

王刚  
【摘要】: 目的:运用现代分子生物学技术筛选中医肾虚证及其中药治疗后的差异表 达基因,为研究中医肾虚相关基因及中药作用靶基因奠定基础;从不同角度、 层次对“恐伤肾”进行理论阐释。方法:1.以“恐伤肾”理论为指导,通过“猫 吓鼠”法与“水面悬吊应激法”相结合,建立小鼠肾虚证动物模型;同时对部 分小鼠进行中药金匮肾气丸的治疗;2.应用SMART技术逆转录并扩增以获取造 模前后小鼠血液的全长总cDNA;3.运用抑制消减杂交技术获得正反两个方向、 三种状态下(疾病、治疗后以及正常生理状态下)的差异表达基因谱;4.通过 聚丙烯酰胺凝胶电泳分离所得的cDNA片段,再进行扩增、纯化、定量等工作, 最终获得差异表达cDNA片段;5.理论方面,对“恐伤肾”造模法进行中医理 论解释,并从情绪(心理)应激的角度对“恐伤肾”进行阐释,此外,通过资 料查询、中国生物医学光盘检索以及互联网检索等方法,搜集与“惊恐”相关 基因表达的信息,为实验研究提供相关背景资料。结果:1.建立了一种肾虚证 小鼠的动物模型;2.对SMART和SSH技术的多个环节进行摸索,一定程度上优 化了实验方案;3.获得正反两个方向三种状态下的小鼠差异表达基因谱,并对 其中部分cDNA片面进行了分离、回收、扩增、纯化、定量等工作。结论:1. 恐伤肾造模法具有实践和理论上的可行性;2.惊恐所致肾虚与多个基因的差异 表达相关;3.中药金匮肾气丸能影响这种改变,使其差异表达基因谱趋近于正 常生理状态;4.惊恐刺激主要与一些即早基因和与下丘脑一垂体轴系相关的基 因的表达有密切联系。
【学位授予单位】:成都中医药大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2001
【分类号】:R228;R346

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