收藏本站
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

橘青霉中全局性调控基因Pci-veA的克隆鉴定及其特性的初步研究

冯慧云  
【摘要】:背景:丝状真菌是一类重要的微生物,一些工业菌株能够产生抗生素、有机酸、降胆固醇物质、抗病毒物质、抗癌物质和免疫抑制剂等对人类有益的物质,也会产生一些对人类有害的次级代谢产物,如柄曲霉素、黄曲霉毒素等真菌毒素。在人类生产和生活上起着十分重要的作用。。 真菌次级代谢生物合成途径主要包括PKS和NRPS两个途径,次级代谢生物合成基因总是成簇存在的,其调控体系是一个复杂的网络。调控真菌次级代谢产物的调控因子主要包括:位于生物合成基因簇上的途径特异性调控因子、与生物合成基因簇没有直接关联的信号途径调控性因子、近些年来发现并被提出的全局性调控因子VeA和LaeA。 全局性的调控因子VeA,是E.Kfer等人于1965年第一次在构巢曲霉中发现的一个能够影响构巢曲霉有性繁殖和无性繁殖比例的调控因子,进一步研究发现,它不仅对形态发育有着一定程度的影响,同时也调控着丝状真菌有益物质以及真菌毒素等次级代谢产物的产生,是一个十分重要的丝状真菌的全局性调控因子。它对次级代谢产物生物合成基因簇的调控作用,为真菌理性遗传改造提供了一条重要的全新途径;它对未知次级代谢产物基因簇的调控作用和对沉默基因的转录激活,使基于全局性调控因子的遗传操作成为寻找新型天然产物的新思路。迄今为止,veA的同源基因已经分别在烟曲霉(Aspergillus fumigatus)、寄生曲霉(Aspergillus parasiticus)、产黄青霉(Penicillium chrysogenum)和粗糙脉孢菌(Neurospora crassa)被克隆得到。 他汀类药物由于其它药物所无法比拟的降胆固醇效果,是降血脂药物中的首要选择。自从1987年洛伐他汀获得FDA批准用于临床,成为第一个投入市场的他汀类药物以来,相继开发了许多半合成和全合成的他汀类药物,并且其中许多获得批准上市的药物在市场上都长期占有极大的份额。除常用的最重要的降脂功能外,他汀类药物还开拓了许多新的治疗领域。美伐他汀是最早被发现的他汀类化合物,目前主要作为转化前体受到广泛关注。因此,对其生物来源的寻求和通过菌种改良的方式来进一步提高其产量在工业上有着十分重要的意义。 目的:本实验选取一株美伐他汀产生菌M2,从M2中克隆得到veA的同源基因Pci-veA,并对其进行生物信息学分析。比较它在不同阶段的表达情况、菌体生物量的变化情况和美伐他汀的比生长率变化情况,同时观察光照及黑暗条件对其生长形态上的影响,进而推断它们之间可能存在的调控关系。 方法:本实验中根据同源基因序列设计简并引物,RT-PCR克Pci-veA隆核心序列,分别设计随机引物和嵌套引物,采用TAIL-PCR和RACE技术,克隆3’端和5’端序列,根据拼接得到的全长设计上下游引物克隆得到DNA和cDNA序列,利用生物信息学和生理指标对其特性进行初步分析。 结果:从美伐他汀产生菌橘青霉中克隆得到veA的同源基因Pci-veA,它的cDNA序列为1704个bp,DNA序列为1774bp,编码567个氨基酸,该基因与产黄青霉中发现的veA同源性为91%,和棒状曲霉中的veA相似性为61%。它编码的蛋白质分子量为62762.5道尔顿,等电点为9.10。序列比对在Pci-VeA的N-末端查找到了该基因的保守功能序列NLS区域(bipartite nuclear localization signal motif),和另外一个在构巢曲霉中也存在的pat7区域。表达情况的研究表明该基因的表达伴随橘青霉生长的整个阶段中,是一个组成型表达,而黑暗条件抑制其分生孢子的产生,光照条件上调并且提前分生孢子的产生。 结论:本文成功从美伐他汀产生菌橘青霉中克隆得到veA的同源基因Pci-veA,推断橘青霉Pci-VeA可能正调控美伐他汀的生物合成,并参与光照条件下分生孢子的形成。该基因的成功克隆以及在美伐他汀产生过程中的表达情况的初步研究,为下一步的功能研究和菌种改良提供了依据和平台。


知网文化
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前20条
1 檀贝贝;孙蕾;张克诚;崔增杰;杨振娟;武哲;;抗生素生物合成基因簇的克隆策略[J];中国农学通报;2011年07期
2 朱越雄,曹广力,朱小燕,朱峰;桑叶芽萌发期附生丝状真菌分析[J];江苏蚕业;2003年02期
3 秦鹏;吴振强;;基于BP神经网络的丝状真菌生长预测研究[J];现代食品科技;2009年04期
4 ;一种针对丝状真菌的改进的菌落-滤膜-杂交程序[J];国外医学.遗传学分册;1997年05期
5 陈碧娥,刘祖同;海洋丝状真菌转化石油烃的研究[J];石油学报(石油加工);2002年03期
6 杨丰科;姜萍;李思东;王守满;;丝状真菌基因工程进展[J];氨基酸和生物资源;2009年01期
7 王以光;;抗生素生物合成基因的克隆策略[J];药物生物技术;2009年03期
8 马亚敏;;Genencor公司在酶技术方面取得进展[J];生物技术通报;1987年06期
9 林凤翱,冯志权,李洪,于占国,张映,贺杰;海洋丝状真菌降解原油研究Ⅱ.砂砾中油污去除室内模拟试验[J];海洋学报(中文版);1999年06期
10 杨海龙,吴天祥,章克昌;丝状真菌发酵生产中形态的影响与发酵罐设计[J];生物技术;2003年01期
11 高兴喜,杨谦,宋关玲,金红星;T-DNA在丝状真菌中的插入突变及其应用前景[J];哈尔滨工业大学学报;2005年09期
12 姜天一;朱平;;丝状真菌异源蛋白表达系统研究进展[J];生物技术通讯;2007年06期
13 李锐;贺亮;邓旭明;;丝状真菌蛋白质组分析[J];东北农业大学学报;2008年05期
14 丁月月;李霜;黄和;;反义RNA技术在丝状真菌代谢工程中的应用[J];生物工程学报;2009年09期
15 赵培宝;任爱芝;李多川;;菌寄生真菌纤细齿梗孢FUS3/KSS1类MAPK基因的克隆和序列分析[J];微生物学通报;2010年01期
16 梁蒙;陈志玲;;微管骨架在丝状真菌极性生长中的作用[J];生物技术通报;2010年09期
17 陆师义 ,陈玉梅;丝状真菌的基因工程[J];中国生物工程杂志;1984年03期
18 张志光;李东屏;;丝状真菌原生质体技术的研究——去壁酶对丝状真菌原生质体形成的影响(Ⅱ)[J];湖南师范大学自然科学学报;1993年02期
19 张明,赵呈裕;丝状真菌高分子量DNA的提取研究[J];广西医科大学学报;1998年02期
20 李明春,王俊琦,邢来君;丝状真菌深黄被孢霉RNA的提取方法[J];菌物系统;1999年01期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 李坡;谷守琴;邢继红;董金皋;;玉米大斑病菌STK3基因克隆及生物信息学分析[A];中国植物病理学会2008年学术年会论文集[C];2008年
2 邢伟;黄宇琪;廖国建;胡昌华;;橘青霉全局性调控因子Pci-laeA的分离鉴定及其功能研究[A];2010年第四届全国微生物遗传学学术研讨会论文摘要集[C];2010年
3 张晓利;刘维达;;深部丝状真菌感染的流行病学趋势分析[A];2010全国中西医结合皮肤性病学术会议论文汇编[C];2010年
4 杨惠英;索继江;陈世平;邢玉斌;贾宁;魏华;宋佩茹;;眼部丝状真菌感染13例报道及文献复习[A];中华医院管理学会医院感染管理专业委员会第九届医院感染管理学术年会论文汇编[C];2002年
5 冯冬梅;;丝状真菌的准性循环[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第一卷)[C];1986年
6 王玮;杜艳;林国强;孙秉中;;RNA干涉bcr abl融合基因联合P27基因克隆对K562细胞的影响[A];第12届全国实验血液学会议论文摘要[C];2009年
7 王建华;吴建平;费春红;杨联;张利平;;牦牛钙激活蛋白酶抑制蛋白CAST基因克隆及其测序分析[A];中国动物遗传育种研究进展——第十五次全国动物遗传育种学术讨论会论文集[C];2009年
8 孙玲;余少波;刘榜;;猪Nudt6基因克隆以及与眼肌面积性状相关SNP发现[A];第十二次全国畜禽遗传标记研讨会论文集[C];2010年
9 戴佳琳;吴璇;黄江;杜武英;胡旭初;徐劲;余新炳;;亚洲牛带绦虫肌动相关蛋白2/3复合体亚单位4基因的克隆、表达及免疫反应性鉴定[A];全国寄生虫学与热带医学学术研讨会论文集[C];2008年
10 方卫国;肖月华;冷波;杨星勇;张永军;裴炎;;一种新的球孢白僵菌几丁酶Bbchit1的纯化和基因克隆[A];首届中国青年学者微生物遗传学学术研讨会论文摘要集[C];2002年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 张晓利;病原性丝状真菌快速诊断和鉴定的实验研究[D];中国协和医科大学;2010年
2 李志勇;调控玉米大斑病菌生长发育和致病性的CaM基因的克隆与功能分析[D];河北农业大学;2008年
3 谢科;水稻WRKY10基因的功能研究[D];浙江大学;2005年
4 邢继红;拟南芥抗灰葡萄孢相关基因的克隆和功能分析[D];河北农业大学;2006年
5 魏继承;白桦花期抑制性消减文库的构建及花发育相关基因的克隆[D];东北林业大学;2006年
6 赵明莲;食线虫真菌侵染性胞外蛋白酶的基因克隆与表达[D];云南大学;2003年
7 郭虹;弓形虫侵入相关分子ROP1基因的克隆及其DNA免疫研究[D];中山医科大学;1999年
8 王昕;巨噬细胞集落刺激因子可溶性受体的克隆表达及其相关性研究[D];中国协和医科大学;1998年
9 李伟;圆锥小麦地方品种遗传多样性研究[D];四川农业大学;2006年
10 段冷昕;梅花鹿茸多肽的化学结构及其抗肝纤维化作用[D];吉林大学;2007年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 冯慧云;橘青霉中全局性调控基因Pci-veA的克隆鉴定及其特性的初步研究[D];西南大学;2011年
2 高雯;绿色木霉LTR-2β-1,3-葡聚糖酶基因的克隆及其在毕赤酵母中的表达[D];山东理工大学;2007年
3 朱涛;一株丝状真菌胞外中性纤维素酶系的分离纯化与酶功能的研究[D];山东大学;2008年
4 王乐媛;重组小鼠gAcrp30的基因克隆、表达及生物活性研究[D];中国人民解放军第一军医大学;2003年
5 辜旭辉;芽孢杆菌A-47鞭毛蛋白基因的克隆及其与定殖相关性初探[D];中国农业大学;2005年
6 鲍鸣;鸡IFN-γ基因的克隆与原核表达[D];安徽农业大学;2005年
7 李运千;马尔尼菲青霉特异性基因的克隆表达及多克隆抗体的制备[D];广西医科大学;2005年
8 王琪;芋螺毒素的纯化、基因克隆及进化分析[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2005年
9 唐霞;柿果ACC合成酶基因cDNA克隆及其植物表达载体的构建[D];河北农业大学;2005年
10 陈敦忠;香蕉延长因子1A(EF-1A)基因全长cDNA的克隆及其特征分析[D];华南热带农业大学;2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 李秀萍;石河子大学转基因克隆绵羊研究取得突破[N];兵团日报(汉);2011年
2 刘越西 徐仁元 记者 金姝;世界首例赖氨酸转基因克隆奶牛在吉大农学部培育成功[N];吉林日报;2011年
3 黄勇娣;世界首例转基因克隆兔在沪诞生[N];解放日报;2007年
4 许沈华;什么是基因克隆[N];家庭医生报;2007年
5 王婷婷;我国完成世界首例转基因克隆兔实验[N];科技日报;2007年
6 曹斌;血癌新病毒基因克隆成功[N];团结报;2000年
7 王有佳;全球首例转基因克隆兔在沪诞生[N];人民日报;2007年
8 李建平;首例荧光转基因克隆猪所产猪崽再次被确认具有荧光特征[N];大众科技报;2008年
9 记者 王中宙;25只转基因克隆绵羊在内蒙古农业大学诞生[N];呼和浩特日报(汉);2010年
10 吴一福;四军医大构建HBV全基因克隆质粒细胞系[N];中国医药报;2006年
中国知网广告投放
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62982499
  • 010-62783978