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《西南大学》 2011年
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绿豆酸性磷酸酶的分离纯化和性质及功能基团的研究

高亚朋  
【摘要】:酸性磷酸酶Acid phosphatase简称ACP),是一类在酸性条件下水解底物中的磷酸单酯的诱导酶,在生物磷代谢中起着重要作用。ACP不仅与生物的生长调节、代谢调节及信号转导等方面的生理机能关系密切,亦能增强植物对缺磷、干旱、低温等逆境的抗性,因此近年引起学者的广泛重视。 绿豆(Vigna radiata, Mung bean)属于豆科蝶形花亚科豇豆属的一年生草本植物。原产印度及尼罗河流域。它是一种集营养保健、食品饲料,抗菌消炎于一体纯天然绿色作物。绿豆营养丰富,蛋白质的含量是粳米的3倍,且含多种维生素、钙、磷、铁等无机盐,具有很高食用价值;绿豆味甘性寒,具清热解毒,消肿、散翳明目的作用,其绿豆衣提取液还具有明显的抗菌抑菌作用,因此在医学界引起高度重视。近年来,对绿豆的研究越来越多,其中冀绿豆2号由于它比较耐旱、耐瘠、抗病性能好,对环境胁迫适应性很强,这正好符合诱导产生酸性磷酸酶的主要条件。同时,在豆类植物中,冀绿豆2号的蛋白质含量相对要少,这样分离纯化效果会更好。目前对绿豆酸性磷酸酶的分离纯化未见报道。因此本文以冀绿豆2号绿豆芽为原料,对酸性磷酸酶的分离纯化、理化性质、酶促动力学特性、抑制剂以及功能基团的化学修饰等方面进行了研究,以期为进一步研究ACP提供理论参考及耕作改进、对作物遗传改良提供有益帮助。研究结果如下: 1绿豆酸性磷酸酶的分离纯化 采用硫酸铵分部沉淀,DEAE-Sepharose离子交换层析和Superdex-200凝胶层析对酶蛋白进行分离纯化,采用SDS-PAGE鉴定酶的纯度,获得电泳纯的ACP,纯化倍数为156.3,酶活力回收率为4.0%,比活达347.0U/mg。 2.绿豆酸性磷酸酶的性质研究 凝胶过滤法测定酶相对分子质量为34.6 kD, SDS-PAGE测定酶的亚基相对分子质量为33.1 kD。推测绿豆酸性磷酸酶为单亚基酶。该酶最适温度为40℃,最适pH值为5.2,以pNPP为底物测定该酶的表观Km为4.28×10-3 mol/L。 3.金属离子及化学试剂的影响 Mg2+、Co2+对酶有激活作用,而Hg2+,Cu2+,Pb2+和Zn2+对该酶有明显的抑制作用,依次为:Hg2+Cu2+Pb2+Zn2+。K+,Ca2+对酶影响不明显。有机溶剂甲醇、乙醇、乙二醇、异丙醇对该酶有明显抑制作用。化学试剂抗坏血酸对该酶有明显抑制作用:尿素和EDTA对其基本无影响;过氧化氢对其有双重影响,低浓度时有激活作用,超过50mmol/L激活作用消失。 4.绿豆酸性磷酸酶的功能基团修饰 蛋白修饰剂:氯胺T、对氯汞苯甲酸(PCMB)、N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)、苯甲基磺酰氟(PMSF)对该酶抑制作用显著,低浓度的情况下即可使酶活力完全丧失,据此,初步判定甲硫氨酸残基、色氨酸残基、丝氨酸残基是绿豆酸性磷酸酶的活性中心的必需基团;琥珀酸酐(SUAN)、二琉基苏糖醇(DTT)、溴乙酸(BrAc)及乙酰丙酮(BD)对酶的影响不显著,推测组氨酸残基、精氨酸残基、赖氨酸残基和二硫键对维持该酶活性贡献不大。
【学位授予单位】:西南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2011
【分类号】:Q814

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【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 黄朴;徐立红;;蛋白磷酸酶2A与肿瘤关系的研究进展[J];癌变.畸变.突变;2006年05期
2 李覃;黄朴;徐立红;;蛋白磷酸酶2A与乳腺癌[J];癌变.畸变.突变;2010年01期
3 于建伟;李冬梅;李吉龙;朱蓓薇;;仿刺参酸性磷酸酶的提取及粗酶性质研究[J];水产科学;2009年01期
4 高扬,郑易之,李晶,赵耕春;酸性磷酸酶在萌发大豆种子中子叶细胞壁上的分布[J];大豆科学;1994年01期
5 庄萍;黎燕燕;冯志好;;酶解条件对VC多聚磷酸酯水解程度影响的研究[J];广东饲料;2007年05期
6 范洪宽,郑远志,Hamilton Susan,de Jersery John;低分子量紫色酸性磷酸酶多克隆抗体的制备及应用[J];高等学校化学学报;2001年03期
7 董登峰,江立庚,杨杰,陈念平;大豆磷酸烯醇式丙酮酸磷酸酯酶(PEPP)研究:Ⅱ.纯化与特性[J];广西农业生物科学;2005年03期
8 杨杰;董登峰;王永峰;;木豆种子酸性磷酸酯酶AcPase I的部分纯化和动力学特性[J];广西农业科学;2007年04期
9 董登峰,杨杰,江立庚,陈念平;大豆磷酸烯醇式丙酮酸磷酸酯酶研究 Ⅲ、非专一性酸性磷酸酯酶的纯化与特性[J];广西植物;2005年05期
10 董登峰;李杨瑞;杨杰;王永峰;;萌发木豆种子中酸性磷酸酯酶的纯化和动力学特性(英文)[J];广西植物;2008年03期
中国硕士学位论文全文数据库 前3条
1 江琰;工蜂酸性磷酸酶的分离纯化及性质研究[D];四川大学;2003年
2 陆珊;麦芽酸性磷酸酶的部分性质研究[D];四川大学;2006年
3 许敏;白鲢肠碱性磷酸酶的分离纯化及其性质研究[D];西南大学;2007年
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李覃;黄朴;徐立红;;蛋白磷酸酶2A与乳腺癌[J];癌变.畸变.突变;2010年01期
2 张怀俊;六环教学模式探究[J];安徽教育学院学报;2003年03期
3 梁庆玲;刘世琦;于文艳;郝树芹;;大蒜鳞茎冷藏出库后品质特性的变化[J];山东农业科学;2008年02期
4 孙玉军,陈彦,王洵,李燕斐;蜜环菌胞外多糖的分离纯化及其性质研究[J];安徽大学学报(自然科学版);2005年05期
5 叶生梅;;稻草秸秆预处理实验研究[J];安徽工程科技学院学报(自然科学版);2008年04期
6 潘文洁;汤斌;季长路;何静;;天然富硒绿茶醇溶性活性物质提取条件优化[J];安徽工程科技学院学报(自然科学版);2009年03期
7 侯新东;盛桂莲;张桦;腊萍;;质粒DNA提取方法的探讨[J];安徽农学通报;2006年13期
8 刘治刚;徐中平;张可炜;;利用细胞工程建立的耐低磷玉米自交系与原自交系耐低磷性状的比较[J];安徽农学通报;2007年08期
9 李玉清;赵铜铃;;天然野菜食品调制研究[J];安徽农学通报;2007年18期
10 杨筱静;;菠萝蛋白酶研究与应用[J];安徽农学通报(上半月刊);2009年09期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 马天良;谢幸珠;张覃华;孙祥明;;苏云金杆菌发酵动力学研究[A];杀虫微生物[C];1992年
2 刘彩琴;阮晖;傅明亮;周兵;陈启和;何国庆;;α-半乳糖苷酶的液体发酵条件和酶学性质研究[A];饲用酶制剂开发与应用技术交流研讨会论文集[C];2010年
3 郝建华;孙谧;王跃军;;海洋微生物低温碱性蛋白酶QDApr的生物信息学分析及同源模建[A];中国海洋学会2005年学术年会论文汇编[C];2005年
4 陈明;孙昌魁;程剑锋;王希盟;张玉臻;;L15-2几丁质酶及其抑制苹果炭疽病原真菌的研究3[A];中国资源生物技术与糖工程学术研讨会论文集[C];2005年
5 刘建芳;郑刚;杨雪;许芳;;水基润滑剂稳定性能试验[A];2009年全国青年摩擦学学术会议论文集[C];2009年
6 缪晓青;张其康;樊少华;吴珍红;;中华蜜蜂工蜂碱性磷酸酶的分离纯化及部分性质研究[A];海峡两岸第四届蜜蜂生物学研讨会论文集[C];2004年
7 樊少华;刘玉梅;张其康;吴珍红;王建鼎;缪晓青;;中华蜜蜂工蜂碱性磷酸酶功能基团的研究[A];海峡两岸第四届蜜蜂生物学研讨会论文集[C];2004年
8 万学闪;刘文革;阎志红;赵胜杰;何楠;路绪强;刘鹏;;不同染色体倍性西瓜果实不同糖成分含量比较[A];第13次全国无籽西瓜科研与生产协作组会议论文集[C];2010年
9 盖栋梁;邹晓;刘爱英;赵杰宏;;紫红曲菌的诱变育种研究[A];中国菌物学会第二届青年菌物学术讨论会论文集[C];2006年
10 任海霞;宫志远;曲玲;李瑾;任鹏飞;;白灵菇液体培养条件的研究[A];中国菌物学会第四届会员代表大会暨全国第七届菌物学学术讨论会论文集[C];2008年
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1 徐荣燕;嗜热真菌糖苷酶的基因克隆、表达与分子改造[D];山东农业大学;2010年
2 刘伟;怀头鲇Silurus soldatovi早期发育生理生态学研究[D];中国海洋大学;2010年
3 冯玉红;微生物纤维素及其氧化衍生物的合成与性能研究[D];昆明理工大学;2008年
4 华杰;固定化酶膜反应器藕合错流萃取色谱制备5’-核苷酸[D];中南大学;2011年
5 孙涛;Bacillus sp. SK13.002产环糊精葡萄糖基转移酶及其催化芦丁糖基化反应的研究[D];江南大学;2011年
6 马满英;鼠李糖脂的制备及其在修复多氯联苯污染土壤中的应用[D];湖南大学;2009年
7 李琦;鼠李糖脂强化石油污染土壤植物—微生物联合修复研究[D];西安建筑科技大学;2011年
8 屈晓凡;微小空间内光合细菌产氢行为及鼓泡强化产氢实验研究[D];重庆大学;2011年
9 张存政;新型除草剂H9201检测技术及环境残留行为[D];南京农业大学;2011年
10 孙凤霞;三聚氰胺单克隆抗体制备及其高灵敏快速检测技术研究[D];江南大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 宁辉彩;拟南芥和油菜根毛发生转录因子WER表达与磷高效关系的研究[D];华中农业大学;2010年
2 侯玮玮;纳他霉素产生菌的发酵工艺优化[D];华中农业大学;2010年
3 吴婕;多拉菌素产生菌的诱变育种及培养条件的优化[D];华中农业大学;2010年
4 杜学敏;蚯蚓纤溶酶的分离纯化及部分组分的性质[D];河北大学;2007年
5 潘海波;利用DNA体外重组技术构建高活性纤维素酶基因工程菌[D];安徽工程大学;2010年
6 刘海涛;斑点叉尾鮰鱼皮胶原的制备及其应用研究[D];安徽工程大学;2010年
7 季爱云;聚β-羟基丁酸酯高产菌株的选育及发酵和提取工艺研究[D];山东科技大学;2010年
8 郭艳萍;抑黄曲霉乳酸菌的筛选及菌种鉴定[D];安徽农业大学;2010年
9 朱海兰;玉米种皮膳食纤维的提取及改性研究[D];河南工业大学;2010年
10 刘莎莎;大麦芽阿魏酸酯酶的分离纯化及其特性研究[D];新疆农业大学;2010年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 黄朴;徐立红;;蛋白磷酸酶2A与肿瘤关系的研究进展[J];癌变.畸变.突变;2006年05期
2 李平生;;组氨酸残基在焦磷酸:果糖-6-磷酸1-磷酸转移酶催化功能中的作用[J];安徽大学学报(自然科学版);2005年06期
3 于群英;土壤磷酸酶活性及其影响因素研究[J];安徽技术师范学院学报;2001年04期
4 耿芳宋,修波,王秀丽,杜卫,陈培勋;小牛肠碱性磷酸酶激活与抑制的动力学观察[J];青岛医学院学报;1995年03期
5 耿芳宋,王秀丽,张金玉,武淑芳,修波;人类胎盘碱性磷酸酶的分离纯化[J];青岛医学院学报;1998年02期
6 夏春;白鲢MHC Iα2基因克隆及序列分析[J];动物学报;1999年03期
7 陈瑛,邱子健,隋淑光,史新柏;棘尾虫酸性磷酸酶的定位及诱导表达[J];动物学报;2003年02期
8 安韶山,黄懿梅,郑粉莉;黄土丘陵区草地土壤脲酶活性特征及其与土壤性质的关系[J];草地学报;2005年03期
9 次旦伦珠;珠穆朗玛峰自然保护区概况[J];中国藏学;1997年01期
10 李博文;有机物料和有机磷组分对潮土磷酸酶活性的影响[J];河北农业大学学报;1994年04期
中国硕士学位论文全文数据库 前1条
1 梁宏玲;两个不同磷效率甘蓝型油菜品种磷吸收利用的差异性机理研究[D];华中农业大学;2005年
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 雷秋波,何建国,江静波;食蟹猴疟原虫酸性磷酸酶电镜细胞化学研究[J];中山大学学报论丛;1995年01期
2 刘桂荣;康现江;郭明申;孙文佳;王琦;;中华绒螯蟹精子形成过程酸性磷酸酶的分布特征(英文)[J];Marine Science Bulletin;2007年01期
3 朱洪文;陈念祖;;肾上腺皮质激素对蟾蜍输卵管磷酸酶和粘多糖的影响[J];南京大学学报(自然科学版);1963年02期
4 陈海明,丁大连;酸性磷酸酶在豚鼠耳蜗中的显示[J];动物学杂志;1988年06期
5 石玉秀;刘荔;祝淑文;戚万强;高俊峰;刘冬娟;徐延平;王占友;酒井真弘;小川和朗;;中枢神经细胞的高尔基复合体ACP活性分布的电镜观察[J];中国组织化学与细胞化学杂志;1992年01期
6 宋祥福,李铁骥,于光艳;二月桂酸二丁基锡(DBTD)对雄性大鼠睾丸组织中酶活性的影响[J];中国比较医学杂志;2005年05期
7 赵洪新;来奇恒;杨程;张子能;邢新会;;产气肠杆菌磷酸酶基因克隆表达及其特性[J];化工学报;2008年08期
8 姜磊;陈素芸;杨晓玲;易静;李培勇;;生物响应酸性磷酸酶浓度的载药聚电解质的体外控释分析[J];生物工程学报;2008年10期
9 王荣富,何若韫;零下低温对小麦线粒体酸性磷酸酶解离与膜脂过氧化的影响[J];安徽农业大学学报;1990年03期
10 张昆;王铁民;;大白鼠颈丛皮神经对脊髓胶状质投射的节段及区域定位—ACP法研究[J];解剖学杂志;1990年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 杜立阳;刘悦;刘艳;宗士群;邹莉菠;;复方青黛颗粒对溃疡性结肠炎大鼠酸性磷酸酶、5’-核苷酸和一氧化氮的影响[A];中国中西医结合学会第十六次全国消化系统疾病学术研讨会论文汇编[C];2004年
2 王祖龙;孙自学;陈帅垒;王春霞;;男性不育症患者精浆酸性磷酸酶与精液参数的相关性研究[A];中华中医药学会第十一届男科学术大会论文集[C];2011年
3 谷振勇;李德祥;;实验性脑死亡神经细胞ACP酶细胞化学研究[A];第五次全国法医学术交流会论文集[C];1996年
4 冯宝民;史丽颖;唐玲;王永奇;;五种荨麻属植物提取物抑制前列腺增生作用的研究(英文)[A];2008年中国药学会学术年会暨第八届中国药师周论文集[C];2008年
5 孙自学;王祖龙;陈帅垒;王春霞;;男性不育症患者精浆酸性磷酸酶与精浆生化的相关性研究[A];第七次全国中西医结合男科学术会议及全国中西医结合男科提高班论文汇编及讲义[C];2011年
6 高斌;李淑华;宓真;朴顺福;;糖尿病大鼠小肠酸性磷酸酶变化及中药干预的研究[A];2006年中华医学会糖尿病分会第十次全国糖尿病学术会议论文集[C];2006年
7 孙自学;王祖龙;陈帅垒;王春霞;;男性不育症患者精浆酸性磷酸酶与精浆生化的相关性研究[A];中华中医药学会第十一届男科学术大会论文集[C];2011年
8 李路胜;冯定远;左建军;;植酸酶的生产及应用研究进展[A];酶制剂在饲料工业中的应用[C];2005年
9 余霖霖;朱越雄;沈桂芳;张志芳;;高温酸性磷酸酶acp基因的克隆、表达和功能的初步鉴定[A];2006中国科协年会论文集(第13分会场)[C];2006年
10 秦跃娟;章振林;张浩;胡伟伟;顾洁梅;胡云秋;刘玉娟;李淼;;酒石酸抗酸性磷酸酶随女性年龄的变化及其与骨密度的关系[A];中华医学会第四次全国骨质疏松和骨矿盐疾病学术会议论文汇编[C];2006年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 沈书成;为何要查前列腺液[N];健康报;2003年
2 薛勇;如何选留绿豆种子[N];农民日报;2004年
3 驻站记者 闫洪君 通讯员 战勇;阿旗努力做大做强绿豆产业[N];赤峰日报;2005年
4 贾孟春;精液比血还宝贵吗?[N];人民日报海外版;2000年
5 马浩剑李昕;王柯:五年做到国内第一[N];常州日报;2007年
6 林诚;卡那霉素分离纯化新技术通过鉴定[N];医药经济报;2002年
7 驻站记者 闫洪君;阿旗让小绿豆滚出大效益[N];赤峰日报;2007年
8 记者 李中海通讯员 高万宝;为了4万户灾民的希望[N];驻马店日报;2007年
9 汪承柏;中西医结合诊治慢性重型肝炎[N];中国中医药报;2003年
10 ;PCC分离纯化工艺进展速览[N];中国医药报;2006年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 徐冬梅;土壤酸性磷酸酶性质及汞、铜、锌对其影响的机理研究[D];浙江大学;2003年
2 钟传青;解磷微生物溶解磷矿粉和土壤难溶磷的特性及其溶磷方式研究[D];南京农业大学;2004年
3 舒劲松;调免毓麟汤对雄性大鼠免疫性不育的作用及其机理研究[D];湖北中医学院;2007年
4 赵振华;几种低分子量有机酸、磷酸对BSA和酶在土壤胶体、矿物表面的吸附及活性影响[D];华中农业大学;2002年
5 范黎;兰科植物菌根的基础研究[D];中国协和医科大学;1997年
6 侯丕勇;真菌诱导子对铁皮石斛原球茎诱导作用的研究[D];中国协和医科大学;2005年
7 王月;CO_2浓度升高对不同供磷番茄根系生长和根系分泌物的影响[D];浙江大学;2008年
8 陈炅然;蕨麻多糖的免疫增强作用及自由基药理学研究[D];甘肃农业大学;2008年
9 傅阳;神经修复对产瘫近端神经元影响机制的实验研究[D];复旦大学;2006年
10 陈俊意;玉米(Zea mays L.)磷效率及相关性状QTL定位[D];西南大学;2008年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 高亚朋;绿豆酸性磷酸酶的分离纯化和性质及功能基团的研究[D];西南大学;2011年
2 梁宏玲;两个不同磷效率甘蓝型油菜品种磷吸收利用的差异性机理研究[D];华中农业大学;2005年
3 江琰;工蜂酸性磷酸酶的分离纯化及性质研究[D];四川大学;2003年
4 张勇侠;瘦肉型猪(PIC344)精液酸性磷酸酶的分离纯化及性质研究[D];四川大学;2004年
5 黄莹;大肠杆菌酸性磷酸酶的克隆表达与应用研究[D];华东理工大学;2012年
6 王黎明;表面活性剂SDBS、SDS和CTMAB对土壤酸性磷酸酶的影响及机理研究[D];浙江大学;2004年
7 李福后;天麻发育过程中酸性磷酸酶及主要代谢产物累积规律研究[D];华中农业大学;2004年
8 魏凌云;红壤不同活性颗粒对酸性磷酸酶吸附—解吸及活性的影响[D];华中农业大学;2004年
9 孔佑宾;大豆紫色酸性磷酸酶GmPAP4和GmPAP14克隆与功能研究[D];河北农业大学;2012年
10 陆珊;麦芽酸性磷酸酶的部分性质研究[D];四川大学;2006年
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