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《西南大学》 2012年
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家蚕精巢和雄性附腺的蛋白质组学分析及小热激蛋白20.2功能初探

张利平  
【摘要】:家蚕不仅是重要的经济昆虫,也是重要的模式生物,故而被认为是研究发生、分化、生长发育及其调节、遗传、变异的生物之一。家蚕精巢是产生精子的生理器官,精子细胞的形成需要经过增殖、生长、成熟、变形4个时期,精子成熟之后与附腺的分泌物形成精液,附腺分泌物能够活化精子,给精子提供能量。 生物体形成成熟精子过程中,受很多外界因素影响,如温度、饥饿、pH、高渗透压等;对于不同的遗传品系它们生殖情况也不相同,具体机理还很清楚。鉴于此,本研究首先是通过比较蛋白质组学的方法对受精率不同的家蚕品系以及高温和饥饿条件处理下家蚕精巢进行双向电泳,寻找差异蛋白点,并进行定性分析;同样用蛋白质组学方法对家蚕雄性附腺进行了蛋白质组学分析,最终筛选到后续研究基因,进行深入研究,目前获得的主要研究结果如下: 1.家蚕不同处理条件下的精巢蛋白质组学分析 通过对家蚕大造与16-500(受精率低)两种品系及在高温和饥饿条件处理家蚕大造精巢的蛋白质组学分析发现,在受精率不同的两种品系以及饥饿和高温条件处理情况下,发现在蛋白水平上一些蛋白质有所变化。经过质谱鉴定这些差异蛋白点分别为谷胱甘肽S-转移酶σ,基因编号为(?)GIBMGA009107;小热激蛋白20.2,基因编号为(?)GIBMGA005784;小热激蛋白19.9,基因编号为BGIBMGA004540。 2.家蚕化蛾第1天雄性附腺蛋白质组学分析 利用同样方法对家蚕雄性附腺及高温处理雄性附腺进行蛋白质组学分析。首先是家蚕雄性附腺的蛋白质组学分析,由于在取家蚕雄性附腺组织时,上面会粘附大量的脂肪体,故取脂肪体作为对照,最终发现有四个蛋白点在家蚕附腺组织中高量表达,并通过质谱成功鉴定出了这四个蛋白点。其基因编号分别为BGIBMGA009423、BGIBMGA000168、BGIBMGA001815、BGIBMGA014604。通过信息分析发现这四个蛋白结构域都是未知的,且没有相关功能的研究。我们进一步通过芯片数据分析和RT-PCR验证了这四个基因在组织以及时期上表达的特异性。另外对于高温处理家蚕雄性附腺的蛋白质组学分析,发现在受热刺激的情况下,蛋白水平有所变化,但对其变化的蛋白质未鉴定成功。 3.家蚕BmsHSP20.2基因的克隆及蛋白原核表达 通过对家蚕精巢及雄性附腺的蛋白质组学分析,对鉴定出的一些蛋白质进行筛选,我们最终确定BGIBMGA005784基因做为后续研究的基因,该基因编码一个分子量约为20.2kDa的小热激蛋白,依据分子量的大小对其命名为BmsHSP20.2。BmsHSP20.2是一个较新的小热激蛋白,目前没有相关功能的报道。通过家蚕的芯片数据和RT-PCR表达谱分析发现该基因在家蚕精巢组织中特异表达,并且在蛹期高量表达,为了进一步研究其功能,我们对该基因进行克隆和蛋白原核表达,并制备多克隆抗体。 4. BmsHSP20.2组织定位 芯片数据和RT-PCR表达谱分析结果显示该基因在家蚕精巢组织中特异表达,为了进一步验证该基因在蛋白水平表达特征,我们进行Western-blot实验,结果表明该基因在家蚕精巢组织中特异表达,并且时期表达谱分析发现BmsHSP20.2在五龄第5天至蛾期是逐渐减少,该时期精子进入变形期逐渐形成成熟的精子。另外通过免疫荧光定位实验,将BmsHSP20.2定位于精子束内,推测BmsHSP20.2可能在家蚕精子细胞内表达。以上结果表明BmsHSP20.2可能与精子的形成存在必然联系。 5. BmsHSP20.2应激性和分子伴侣功能的验证 Western-blot实验表明家蚕在受到高温和饥饿条件刺激时,BmsHSP20.2表达量增加,说明BmsHSP20.2具有应激性。溶菌酶DTT诱导实验进一步验证了BmsHSP20.2具有分子伴侣功能。
【学位授予单位】:西南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:Q966

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【引证文献】
中国博士学位论文全文数据库 前1条
1 魏冬;基于组学技术的桔小实蝇雄性生殖蛋白鉴定[D];西南大学;2015年
【参考文献】
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1 聂红毅;钟晓武;衣启营;张利平;邹勇;赵萍;;家蚕精巢中小热激蛋白在不同发育时期的蛋白质组学分析[J];中国农业科学;2011年09期
2 李德军;田文儒;刘运枫;吕占军;;热应激对鼠精液质量影响的研究[J];黑龙江畜牧兽医;2010年09期
3 赵恩伟;吕正兵;盛清;陈健;聂作明;王丹;沈红丹;刘立丽;舒建洪;陈剑清;吴祥甫;张耀洲;;家蚕小热休克蛋白基因BmHSP20.8的表达及功能研究[J];蚕业科学;2009年03期
4 高洁;嵇保中;刘曙雯;田铃;金凤;宋伙林;;昆虫雄性附腺功能蛋白研究进展[J];生命科学;2008年04期
5 高熹;吴国星;叶恭银;;昆虫雄性附腺分泌物的生理功能[J];云南大学学报(自然科学版);2008年S1期
6 夏佳音;张耀洲;;小热休克蛋白的结构和功能[J];中国生物化学与分子生物学报;2007年11期
7 郭坤;刘银坤;;小热休克蛋白家族的研究现状[J];国际检验医学杂志;2006年04期
8 王荫长,陈长琨,卢中建,李国清,尤子平;高温对小地老虎和东方粘虫精子发生和形成的影响[J];昆虫学报;1996年03期
9 陈革,潘洁玲,甘礼珍;高温对家蚕蛹期生殖细胞与产卵质量的影响[J];蚕业科学;1986年02期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 钱岑;王芳;李胜;刘朝良;;柳蚕小热休克蛋白20.8基因的克隆与表达分析[J];生物学杂志;2015年04期
2 程玉芳;赵美林;李秀花;刘立文;王慧文;耿光瑞;刘伟;刘顺钦;;日粮铬水平对热应激种公兔睾丸组织及血清生殖激素的影响[J];中国兽医学报;2015年06期
3 董福家;陈倩;孔保华;孙钦秀;;肌肉中的小热休克蛋白及其对肌肉品质的影响[J];食品工业;2015年02期
4 陈玉婷;徐燕;纪德华;陈昌生;谢潮添;;坛紫菜两种小分子热激蛋白(sHSP)基因的克隆及表达特征分析[J];水产学报;2015年02期
5 张伟龙;张妮静;钟杨生;陈芳艳;林健荣;;昆虫生殖腺发育的调控[J];广东蚕业;2014年04期
6 闫喜中;孙学俊;邓彩萍;郝赤;;日龄和温度对小菜蛾交配行为的影响[J];山西农业科学;2014年08期
7 韩俊岭;孔晓君;李建远;;阴囊热应激引起小鼠生殖系统HSP90α表达变化和抗氧化能力改变[J];医学研究杂志;2014年08期
8 黄桂琼;周迎春;刘彬;陈洪;华玥;洪晓华;;补阳还五汤对心肌梗死大鼠心肌细胞凋亡及Hsp20表达的影响[J];贵阳医学院学报;2014年04期
9 彭金霞;赵永贞;韦嫔媛;蒋伟明;李咏梅;陈秀荔;殷勤;陈晓汉;;凡纳滨对虾3个sHSP成员的序列与表达特征分析[J];西南农业学报;2013年05期
10 施力光;曹婷;侯冠彧;周汉林;黄显洲;荀文娟;;海南黑山羊小分子热休克蛋白9cDNA克隆及其生物信息学分析[J];中国畜牧兽医;2013年10期
【同被引文献】
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1 杨文佳;桔小实蝇几丁质和保幼激素合成与代谢中重要基因的研究[D];西南大学;2014年
2 申光茂;桔小实蝇消化和解毒代谢相关基因鉴定及其对药剂胁迫的应激反应[D];西南大学;2013年
3 夹福先;桔小实蝇抗热胁迫反应的机制研究[D];西南大学;2012年
4 陈玉华;家蚕精巢蛋白表达谱分析及精子形成的相关研究[D];苏州大学;2011年
【二级引证文献】
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1 桂顺华;桔小实蝇Tachykinin和Natalisin信号系统的生理功能及其药靶潜力评估[D];西南大学;2017年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 聂红毅;钟晓武;邹勇;衣启营;赵萍;夏庆友;;家蚕精巢蛋白质的双向电泳及质谱分析[J];昆虫学报;2010年04期
2 高熹;吴国星;叶恭银;潘贤丽;;棕尾别麻蝇雄性附腺分泌物的生理功能[J];昆虫知识;2007年06期
3 孙卫忠;李斌;王彦文;柴春利;刘彬斌;鲁成;;家蚕HSP20·8基因体外表达及荧光原位杂交研究(英文)[J];蚕业科学;2007年01期
4 穆兰芳;董双林;;昆虫雄性生殖腺分泌物的功能[J];生物技术通报;2006年S1期
5 李俊杰,桑润滋,田树军,杨庆华,赵驻军,胡月超,吴云海;环境高温对荷斯坦种公牛精液品质、生理常值及血清生化指标的影响[J];黑龙江畜牧兽医;2005年09期
6 李斌,夏庆友,藤井博,伴野丰,鲁成;低分子量热激蛋白Bmhsp19.9基因的表达[J];农业生物技术学报;2005年02期
7 赵春生,吕文发,王恒,车东升;温度对小鼠睾丸生精机能的影响[J];吉林农业大学学报;2002年06期
8 金朝阳,丁兆兵,龚和;昆虫雄性生殖附腺生理功能及其生殖因子研究进展[J];科学通报;2001年14期
9 司胜利,许少甫,杜家纬;烟夜蛾雄蛾性附腺因子对雌蛾性信息素合成的抑制作用[J];昆虫学报;2000年02期
10 史彬林,闫素梅;奶牛耐热性评定指标的研究[J];中国奶牛;1996年02期
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1 ;家蚕蛋白质组学研究进展 国内外重要学术期刊发表论文简介[J];蚕业科学;2010年06期
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5 王彦青;韩菲;;蛋白质组学研究热点及展望[J];中学生物教学;2006年03期
6 周倩;朱宏建;;蛋白组学教学内容与教学方式的改革初探[J];课程教育研究;2017年10期
7 彭昌文;蛋白质组学研究进展[J];中学生物教学;2003年03期
8 陈龙;蛋白质组学[J];生物学教学;2000年11期
9 黄毅;万瑛;;第三军医大学第二届蛋白质组学和代谢组学论坛会讯[J];第三军医大学学报;2016年22期
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3 李伽诺;姜子涛;李荣;;二氧化钛在磷酸蛋白质组学研究中的应用[A];2009食品科技(北京)论坛会议指南[C];2009年
4 李学任;魏路清;;蛋白质组学技术在肺部疾病应用及进展[A];中华医学会第三届全国间质性肺病暨弥漫性泛细支气管炎学术会议论文汇编[C];2010年
5 张薇;杨拴盈;尚文丽;刘晓丽;周丹菲;蒋梅花;;定量蛋白质组学研究肺腺癌细胞及正常支气管上皮细胞线粒体[A];中华医学会第五届全国胸部肿瘤及内窥镜学术会议论文汇编[C];2011年
6 李学军;;蛋白质组学—药物发现的新途径[A];中国药理学会第八次全国代表大会论文摘要集(第一部分)[C];2002年
7 曾嵘;夏其昌;;蛋白质组学的国内外进展[A];华东六省一市生物化学与分子生物学会2003年学术交流会论文摘要集[C];2003年
8 曾嵘;夏其昌;;蛋白质组学研究的一些体会[A];中国蛋白质组学首届学术大会论文摘要集[C];2003年
9 郝佩;刘琪;黄音;林建;杨少友;李亦学;;整合的蛋白质组学数据分析系统[A];中国蛋白质组学首届学术大会论文摘要集[C];2003年
10 梁宋平;张丽军;柳亦松;曹锐;谢锦云;;细胞质膜蛋白质组学研究方法与应用[A];中国蛋白质组学首届学术大会论文摘要集[C];2003年
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2 吴志军 沈基飞;唱响东方红 再揽九天月[N];科学时报;2011年
3 李吉亮;何大澄:“享受探索,享受奋斗”[N];科学时报;2011年
4 本报记者 潘锋;中国蛋白质组学面临的机遇和挑战[N];科学时报;2010年
5 记者 付东红 通讯员 李紫艺;单细胞蛋白质组学研究获突破[N];健康报;2018年
6 本报记者 白毅 通讯员 沈基飞;行进在蛋白质组学的“登月之旅”[N];中国医药报;2014年
7 通讯员 吴志军 王来国;“人类重大疾病的蛋白质组学研究”项目启动[N];光明日报;2002年
8 本报记者 李雪墨;专家看好蛋白质组学研究[N];中国高新技术产业导报;2002年
9 李江;第六届中国蛋白质组学大会召开[N];医药经济报;2009年
10 郝成涛;我国蛋白质组学研究势头强劲[N];中国医药报;2009年
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1 孙欣;鸭坦布苏病毒感染细胞蛋白质组学分析及DDX3X对复制的影响[D];华中农业大学;2017年
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1 张利平;家蚕精巢和雄性附腺的蛋白质组学分析及小热激蛋白20.2功能初探[D];西南大学;2012年
2 翟芳;鸟枪法蛋白质组学质谱平台性能标准和参考数据集的建立[D];重庆大学;2018年
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