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《西南大学》 2012年
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黄连生物碱降低卷烟烟气中有害成分的作用及机理研究

吴金凤  
【摘要】:随着“吸烟与健康”的矛盾日益显著,低危害卷烟的开发越来越受到烟草研究者的广泛关注。我国拥有丰富的中草药资源及深厚的中医理论基础,运用中草药减轻卷烟烟气对健康的危害已成为发展低危害中式卷烟的特色之路。本论文通过筛选具有降低卷烟烟气中氰化氢作用的中草药,研制出黄连生物碱复合卷烟滤嘴,并研究了该复合滤嘴对卷烟烟气中其它有害成分的影响;采用离体实验研究了黄连生物碱复合滤嘴降低卷烟烟气对口腔过氧化物酶活性的抑制作用机理;通过检测经烟气熏染的人支气管上皮细胞(BEAS-2B)氧化应激反应,研究了黄连生物碱添加在滤嘴中抑制由卷烟烟气刺激引用的细胞氧化应激。实验方法与结果如下: 1.植物生物碱的筛选及提取 采用乙醇浸提法对大量中草药进行生物碱提取,使用Dragendorff试剂、Mayer试剂、Wagner试剂等生物碱检测试剂鉴定,筛选出中草药醇提物经去脂处理后含生物碱的10种中草药,分别为黄连、黄柏、川贝母、荷叶、粉防己、八仙草、延胡索、百部、萝芙木和三尖杉,将提取到的以上10种中草药的生物碱以30mg/cig的添加量添加到卷烟滤嘴中,与空白卷烟对照,黄连生物碱以18.3%的清除率成为10种中草药生物碱中对氰化氢清除效果最好的植物生物碱。采用大孔树脂和硅胶柱等天然产物分离纯化技术对黄连生物碱进一步分离纯化。经HPLC鉴定,分离纯化后制得的黄连总生物碱及其单体小檗碱、巴马汀和黄连碱的纯度都在95%以上。 2.黄连生物碱复合滤嘴对卷烟烟气中有害成分的影响 通过黄连生物碱载体的选择,确定将活性炭纤维(ACF)作为黄连生物碱的载体,经吸附参数优化后,制定出ACF负载黄连生物碱的最佳工艺,并设计了一种黄连生物碱复合滤嘴的制作方法。采用国家标准和行业标准对卷烟烟气进行分析,用15mg ACF负载1.5mg黄连生物碱添加在滤嘴中制成的黄连生物碱复合滤嘴可分别降低卷烟烟气中氰化氢和苯并[a]芘含量20%以上,对烟气自由基含量清除率达50%以上。与同牌号的醋纤滤嘴卷烟进行烟气感官对比评吸,黄连生物碱复合滤嘴可增加烟气细腻柔和程度,对卷烟感官品质没有负面影响。 3.黄连生物碱降低卷烟烟气中有害成分的机理研究 运用离体清除实验对黄连生物碱复合滤嘴的减害机理进行研究,结果表明,黄连生物碱复合滤嘴可清除氰化钾溶液中的氰离子58.7%,而醋纤滤嘴材料和ACF材料对同浓度氰化钾溶液中氰离子的清除率仅为5.3%和17.4%;采用苯并[a]芘荧光淬灭实验研究黄连生物碱单体对苯并[α]芘的作用,结果表明,黄连生物碱单体的浓度对苯并[α]芘荧光淬灭呈线性相关,相关系数为0.991-0.998,结合常数为2.0×103~9.0×103,三种黄连生物碱单体对苯并[α]芘的荧光淬灭作用强度为巴马汀小檗碱黄连碱;在黄连生物碱清除自由基的离体实验中,黄连生物碱表现出对DPPH自由基、氮氧自由基、超氧自由基的清除活性,其抗氧化活性的大小顺序为:巴马汀黄连总生物碱小檗碱黄连碱。 4.黄连生物碱抑制卷烟烟气引起的口腔过氧化物酶活性降低的作用 通过卷烟烟气对唾液的熏染实验,研究了黄连生物碱添加在滤嘴中对烟气抑制口腔过氧化酶(OPO)活性的影响,并在唾液中分别添加抗氧化剂、烟气成分、螯合剂等成分,以及唾液透析法研究了卷烟烟气中抑制OPO活性的主导因子。实验结果表明,与醋纤滤嘴卷烟比较,黄连生物碱复合滤嘴可降低卷烟烟气对OPO活性的抑制率25%以上;抗氧化剂、单支卷烟烟气中主要羰基化合物和烟碱的量对OPO活性都无显著性影响,通过在唾液中添加氰离子、螯合剂以及透析法说明氰离子是烟气中抑制OPO活性的主要因素;黄连生物碱复合滤嘴通过降低卷烟烟气中的氰化氢而降低了烟气对OPO活性的抑制作用。 5.黄连生物碱复合滤嘴减轻卷烟烟气对细胞的氧化损伤 选用人支气管上皮细胞(BEAS-2B),研究了卷烟烟气对细胞氧化应激损伤的影响。MTT实验结果表明,醋纤滤嘴组、ACF复合滤嘴组和黄连生物碱复合滤嘴组的烟气溶液(CSS)对BEAS-2B细胞的半致死量LD50分别为5.21×10-3、6.32×10-3、7.26×10-3cig/mL;细胞ROS水平及MDA含量测定结果表明,与醋纤滤嘴组和ACF复合滤嘴组比,黄连生物碱复合滤嘴可降低卷烟烟气对BEAS-2B细胞ROS水平的增高及导致的脂质过氧化。黄连生物碱复合滤嘴组CSS对BEAS-2B细胞的总抗氧化能力、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽还原酶(GR)的活性具有诱导作用,对总SOD活性具有抑制作用,与对照卷烟组比较,黄连生物碱复合滤嘴可减轻卷烟烟气对细胞的氧化应激损伤。
【学位授予单位】:西南大学
【学位级别】:博士
【学位授予年份】:2012
【分类号】:TS41

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【参考文献】
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