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《西南师范大学》 2004年
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根癌农杆菌介导的CryIA抗虫基因转化菘蓝(Isatis indigotica Fort.)的研究

曾建军  
【摘要】: 菘蓝(Isatis indigotica Fort.)是十字花科常用的中药材,用量极大,在全国范围内广为栽培。目前,影响菘蓝产量和品质的主要因素之一是病虫害。CryIA基因是一类编码对鳞翅目昆虫有毒性的杀虫晶体蛋白。本研究以根癌农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)为载体,将外源CryIA基因导入菘蓝核基因组,以获得可抗鳞翅目昆虫的转基因植株,从而解决菘蓝栽培中虫害问题。 Ⅰ.菘蓝离体培养的组织学观察 利用常规石蜡切片法,研究了菘蓝外植体子叶和下胚轴离体培养中愈伤组织和再生芽的发生。实验结果表明,外植体中子叶再生能力大于下胚轴。在诱导芽培养基上,子叶先分化少量愈伤组织后分化出大量不定芽;下胚轴可不经愈伤组织,在切口处直接分化出不定芽。组织学观察表明,二种外植体内部均见愈伤组织形成,但愈伤组织表层细胞很快启动分化形成芽原基,抑制了愈伤组织形成。这表明它们的芽起源方式均为外起源,适于做为遗传转化外植体。外植体培养2~5d,分生细胞分裂旺盛,是接受外源DNA最佳时期。 Ⅱ.菘蓝离体遗传转化系统优化与高频转化体系的建立 比较分析了抗生素筛选剂和除菌剂种类及剂量对菘蓝外植体生长的影响。结果表明,Kan浓度大于50mg/L时,外植体不定芽分化明显受抑制。因此,以Kan50mg/L为抗性芽最终选择压,Kan30mg/L作为抗性芽生根选择压。在抗性芽选择阶段用Cef500mg/L除菌,抗性芽生根阶段用Cb250mg/L除菌。 根癌农杆菌OD600二0.6左右时浸染外植体,子叶和下胚轴30d后Kanr芽得率最高, 分别为13.33%和11.42%。子叶染菌时间5一smin,下胚轴3一smlnKanr芽得率最高。 萌发4一5d幼苗所处的生理状态最适宜转化。子叶预培养2d,共培养3d;下胚轴预培 养Zd,共培养Zd,Kanr芽得率最高。在预培养和共培养阶段加入4mg/L硝酸银可提高 转化率。结果还表明,子叶延长筛选3d,下胚轴延迟筛选Zd Kanr芽得率可提高。切 下Kanr芽在生根培养基上,80%抗性芽生根。 1 11.转基因落蓝的鉴定及表型特征分析 通过PCR分子检测表明,CryIA基因已整合到落蓝基因组中。对转化植株和未转 化植株的离体叶片饲虫实验表明:未转化植株叶片虫害严重,大部分被吞噬。转基因 植株叶片明显抑制小菜蛾取食,幼虫生长受阻,并有一定的杀虫作用,所获得的转基 因植株有一定的抗虫性。转基因植株与对照相比,生物量无显著性差异。
【学位授予单位】:西南师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:S567.2

【引证文献】
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1 李娜;褪黑素合成酶基因转化体系的建立及外源褪黑素对菘蓝生长的调节[D];西北大学;2011年
【参考文献】
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1 李咏梅;菘蓝的开发利用价值与栽培技术[J];中国林副特产;2003年01期
2 李海燕,朱延明,马凤鸣;植物抗虫基因工程的研究进展[J];东北农业大学学报;2000年04期
3 梁一池,杨华;植物组织培养技术的研究进展[J];福建林学院学报;2002年01期
4 余建清,雷嘉川,何光明,蔡鸿生;板蓝根冲剂制备工艺的改进[J];广东药学院学报;1999年01期
5 高成伟,王任翔,李凤英;小白菜离体培养植株再生方式的组织学研究[J];广西师范大学学报(自然科学版);2001年01期
6 钟名其,楼程富,谈建中,周金妹,张有做;硝酸银对桑树遗传转化的作用(简报)[J];热带亚热带植物学报;2002年01期
7 张鹏,凌定厚;硝酸银与脱落酸相配合影响菜心离体培养之植株再生方式的组织学研究[J];热带亚热带植物学报;1996年01期
8 付凤玲,张莉萍,朱祯;玉米优良自交系转基因受体系统建立及转化后的筛选与再生[J];四川农业大学学报;2000年02期
9 皮灿辉,易自力,王志成;提高转基因植物外源基因表达效率的途径[J];中国生物工程杂志;2003年01期
10 郑玉梅,马袆,刘青林;月季遗传转化研究进展[J];中国生物工程杂志;2003年02期
【共引文献】
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1 王鹏;赵强;刘蕾;;植物源抗虫基因在作物育种中的应用[J];山东农业科学;2007年02期
2 陈莉;程朝霞;原红娟;;玉米不同外植体愈伤组织的诱导研究进展[J];山东农业科学;2009年04期
3 张晓东;李利斌;宋宜现;李化银;刘立峰;高玲;高建伟;;大白菜高效稳定遗传转化体系的建立[J];山东农业科学;2010年02期
4 郭文文;诸葛玉平;李建勇;宗晓庆;娄燕宏;;转基因番茄栽培对土壤生物学特性的影响[J];山东农业科学;2010年03期
5 徐忠东,余庆来;植物生物技术的应用现状及其发展前景[J];安徽农学通报;2003年05期
6 魏玉娇;杨克冬;;转基因抗虫作物对天敌昆虫影响的研究进展[J];安徽农学通报;2006年11期
7 盛玉婷;;植物组织培养技术及应用进展[J];安徽农学通报;2008年09期
8 李莹莹;;苦瓜育种研究进展[J];安徽农学通报;2008年21期
9 王娟;余渝;孔宪辉;刘丽;王旭文;;棉花转基因育种研究现状与前景展望[J];安徽农学通报(上半月刊);2010年15期
10 黄传杰;植物基因工程技术在病虫害防治中的应用与展望[J];安徽农业科学;2001年03期
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1 李际红;;基质添加稀土及多胺对欧石楠瓶苗生根的影响[A];2011新型肥料研发与新工艺、新设备研究应用研讨会论文集[C];2011年
2 李晚忱;杜娟;;外源超氧化物歧化酶基因(MnSOD)在玉米中的过量表达及其对提高抗逆性的作用[A];2003年全国作物遗传育种学术研讨会论文集[C];2003年
3 杨广东;李艳娥;上官晓霞;;大白菜遗传转化系统优化的研究[A];中国园艺学会第四届青年学术讨论会论文集[C];2000年
4 高国训;顾自豪;靳力争;陆子梅;;蔬菜抗虫种质资源的收集与鉴定[A];全国蔬菜遗传育种学术讨论会论文集[C];2002年
5 雷建军;;抗虫基因工程及其在蔬菜育种上的应用[A];全国蔬菜遗传育种学术讨论会论文集[C];2002年
6 李连国;贾宇臣;何勇;韩红岩;李巧玲;;河套蜜瓜子叶离体培养再生芽发生的形态学和组织学研究[A];中国园艺学会第六届青年学术讨论会论文集[C];2004年
7 张丽;王国英;张玉星;贾志国;;生物技术在梨树研究中的应用[A];全国第四届梨科研、生产与产业化学术研讨会论文集[C];2005年
8 李汉霞;张晓辉;张余洋;王涛涛;叶志彪;;转Bt基因青花菜的抗虫性研究[A];中国园艺学会十字花科蔬菜分会第六届学术研讨会暨新品种展示会论文集[C];2008年
9 崔磊;杨丽梅;方智远;刘玉梅;庄木;张扬勇;孙培田;;农杆菌介导的Bt基因crylAh转化结球甘蓝的研究[A];中国园艺学会十字花科蔬菜分会第六届学术研讨会暨新品种展示会论文集[C];2008年
10 李世茂;黄丽莉;李丽;麦荣章;李振坚;张晓慧;王彩云;;石斛兰再生体系建立与分子育种研究进展[A];中国观赏园艺研究进展 2009[C];2009年
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2 李华;基于系统仿真和情景模拟的崇明生态安全评估[D];华东师范大学;2011年
3 孙国清;不同抗虫棉品种杀虫蛋白表达研究及影响抗虫性分析[D];新疆农业大学;2010年
4 刘宏波;甘蓝型油菜抗病虫基因遗传转化及转基因植株抗性鉴定的研究[D];浙江大学;2010年
5 吕豪豪;转Bt基因对水稻根际及残茬降解土壤微生物生态的影响研究[D];浙江大学;2010年
6 郝金凤;无载体无选择标记转基因耐贮藏甜瓜的培育[D];内蒙古大学;2010年
7 代平礼;转Bt cry1Ah基因玉米对蜜蜂的安全性研究[D];中国农业科学院;2011年
8 付伟;罗汉果二倍体及四倍体遗传变异研究[D];北京协和医学院;2011年
9 王钱洁;AP2/ERF转录因子与水稻产量相关基因LRK6等位基因的表达差异[D];复旦大学;2011年
10 张志勇;RNA干扰抗矮花叶病转基因玉米培育[D];四川农业大学;2010年
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1 邓雅丽;土壤中铁铝氧化物对Bt毒素吸附的影响[D];华中农业大学;2010年
2 刘冉冉;枫香遗传转化体系的优化及转化PaFT基因的研究[D];华中农业大学;2010年
3 付雪林;转Bt基因甘蓝的抗虫性研究[D];华中农业大学;2010年
4 张献芳;利用半夏凝集素构建内生工程菌及其抗同翅目害虫效果研究[D];华中农业大学;2010年
5 刘鑫;利用分子标记辅助选择培育和评价三种BT基因(CRY1AC、CRY1C~*和CRY2A~*)抗虫水稻[D];华中农业大学;2010年
6 吴寿明;转基因抗虫棉单交种、三交种的优势分析[D];华中农业大学;2010年
7 高岩;拟南芥fad8基因在烟草叶绿体基因组表达研究[D];哈尔滨师范大学;2010年
8 蒋淑磊;丹红杨和巨尾桉组织培养技术的研究[D];中南林业科技大学;2009年
9 俞艳栋;杞柳瘿蚊的生物学特性及防治技术研究[D];安徽农业大学;2010年
10 刘小云;楸树优良类型—圆基长果楸组织培养技术的研究[D];安徽农业大学;2010年
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1 韦媛媛;陈晓伟;周吴萍;廖兰;;板蓝根提取物对林可霉素体外抑菌作用的影响[J];安徽农业科学;2010年06期
2 刘盛,陈万生,乔传卓,郑水庆,曾明,张汉明,宋赵军;不同种质板蓝根和大青叶的抗甲型流感病毒作用[J];第二军医大学学报;2000年03期
3 许铁峰,张汉明,张威,丁如贤,李博华;应用发根农杆菌RiT-DNA建立菘蓝的毛状根优质株系和植株再生系统[J];第二军医大学学报;2000年10期
4 李国旺;苗志国;赵恒章;;板蓝根等10种中草药对沙门氏菌的体外抑菌试验[J];贵州农业科学;2010年02期
5 段飞;杨建雄;周西坤;马天利;俞嘉宁;;逆境胁迫对菘蓝幼苗靛玉红含量的影响[J];干旱地区农业研究;2006年03期
6 李国旺;;大青叶体外抑菌试验[J];甘肃畜牧兽医;2008年04期
7 孙广莲,胡志力,孟红,李焱,王秀丽,刘菊华;MTT法检测板蓝根抗巨细胞毒效应[J];山东中医药大学学报;2000年02期
8 王英娟;贾敬芬;步怀宇;赵宇玮;许耀;Carl Hirschie Johnson;Jan Kolár;;褪黑素合成酶基因转化烟草及转化植株抗氧化系统变化[J];生物工程学报;2009年07期
9 王英娟;步怀宇;贾敬芬;索志荣;;RP-HPLC法测定不同芦荟中褪黑激素含量[J];食品科学;2008年06期
10 甘午君,杨天楹,王志澄,钱林生,马洁,葛韵琴,程伯基,李仲敏,薄慧卿;靛玉红治疗慢性粒细胞白血病作用原理的研究[J];生物化学杂志;1987年03期
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1 王英娟;褪黑素合成酶基因对烟草和贯叶连翘的转化及转基因植株抗氧化能力的增强[D];西北大学;2008年
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1 叶青;菘蓝生物学特性的研究[D];西北农林科技大学;2006年
【二级参考文献】
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1 姚洪军,罗晓芳,田砚亭;植物组织培养外植体褐变的研究进展[J];北京林业大学学报;1999年03期
2 钟名其,楼程富,周金妹,谈建中;农杆菌介导的桑树遗传转化条件的研究[J];蚕桑通报;1999年04期
3 谈建中,楼程富,钟名其,平野久;大豆球蛋白基因表达载体的构建及对桑树的遗传转化[J];蚕业科学;1999年01期
4 陶静,詹亚光,由香玲,杨传平,刘玉喜;白桦组培再生系统的研究(Ⅲ)——组培过程中内源激素的变化[J];东北林业大学学报;1998年06期
5 吴擢溪,李振问,吴大忠;杉木组织培养繁殖体系建立的研究[J];福建林学院学报;1991年01期
6 吴若菁;马尾松离体胚组织培养初报[J];福建林学院学报;1993年01期
7 陈碧华;‘香水’白鹤芋组织培养快速繁殖的研究[J];福建林学院学报;2000年03期
8 苏秀城;杉木无性系不同继代代数组培苗差异研究[J];福建林学院学报;2000年04期
9 阮少宁,杨华,梁一池,刘荣忠;香水百合组织培养的试验研究[J];福建林学院学报;2001年02期
10 吴丽君;神灯白掌组织培养的研究[J];福建林学院学报;2001年02期
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3 董汉松,孙爱香;根瘤菌、根癌土壤杆菌与寄主植物相互识别的机制[J];山东农业大学学报;1994年03期
4 邓世平;注意防治柰李根癌病[J];江西园艺;1995年01期
5 傅向东,毛碧增,李德葆;根癌农杆菌介导转化抗虫基因获得转基因烟草[J];浙江大学学报(农业与生命科学版);1997年06期
6 周小云,饶力群;根癌土壤杆菌转化水稻研究进展[J];生物技术;2003年03期
7 刘永巍,孟巧霞,党永志,孟昭河,李春光,刘国权;根癌农杆菌介导获得粳稻转基因植株研究[J];中国农学通报;2004年05期
8 张志宏,景士西,王关林,方宏筠,吴禄平;新乔纳金苹果遗传转化及转基因植株再生[J];园艺学报;1997年04期
9 陈善春,张进仁,黄自然,高峰,陈凤珍,隆有庆;根癌农杆菌介导柞蚕抗菌肽D基因转化柑桔的研究[J];中国农业科学;1997年03期
10 潘学彪,刘巧泉,周永力,李欣,翟文学,邹军煌,陈宗祥,顾铭洪;根癌农杆菌介导法将Xa21基因导入水稻[J];江苏农业研究;1998年04期
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1 周洁;郭兰萍;M.G.Kulkarni;杨光;曾燕;黄璐琦;;烟水提高菘蓝幼苗地上部分生物量及靛蓝积累[A];2010年中国药学大会暨第十届中国药师周论文集[C];2010年
2 张凤兰;;白菜根癌农杆菌介导法基因转化体系的建立[A];蔬菜分子育种研讨会论文集[C];2004年
3 王康才;陈暄;郭庆海;晏枫霞;;4种不同栽培类型菘蓝生长及指标成分研究[A];全国第8届天然药物资源学术研讨会论文集[C];2008年
4 陆树良;杨丽英;金曙雯;向军;王志勇;乔亮;廖镇江;史济湘;;极早期削痂防治深二度创面进行性加深的组织学观察[A];中华医学会第六届全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];2001年
5 李振伟;谷长勤;胡薛英;程国富;周诗其;;鲫鱼消化道形态及组织学观察[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十四次学术研讨会、中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十三次学术研讨会论文集[C];2006年
6 李春顺;陈利萍;张明方;周雪平;;根癌农杆菌介导芜菁花叶病毒Hc-Pro基因转化榨菜的研究[A];蔬菜分子育种研讨会论文集[C];2004年
7 马春全;赵德明;刘美丽;邓桦;卢玉葵;;鹅高致病性禽流感病理组织学观察[A];中国畜牧兽医学会兽医病理学分会第十三次学术讨论会和中国病理生理学会动物病理生理专业委员会第十二次学术讨论会论文集[C];2005年
8 张玲;刘蕾;王卫红;;猪圆环病毒病的病理组织学观察[A];吉林省畜牧兽医学会2007学术年会论文集[C];2007年
9 杨丽英;陆树良;向军;金曙雯;金再敏;孔令雯;廖镇江;;深Ⅱ度烫伤大鼠炎症反应强度与创面组织进行性死的组织学观察[A];中华医学会第六届全国烧伤外科学术会议论文汇编[C];2001年
10 徐春香;李华平;肖火根;范怀忠;;香蕉束顶病毒运动蛋白基因的初步转化[A];中国园艺学会第六届青年学术讨论会论文集[C];2004年
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1 曾海东 万来邦;菘蓝加工青黛法[N];中国中医药报;2002年
2 果宁;咋防果树“癌症”[N];山西科技报;2002年
3 王杰;如何防治果树“癌症”[N];科学导报;2005年
4 蒋明;湖北武大医学院研究表明:菘蓝可抗柯萨奇病毒[N];中国医药报;2005年
5 励月辉 励宏;板蓝根价升 种植正当时[N];中国中医药报;2003年
6 韦红霞;新建大樱桃园应注意的几个问题[N];陕西科技报;2006年
7 通讯员 陈大银 王明全 徐进前;咸安区果业协会为果农解忧愁[N];湖北科技报;2006年
8 南京农业大学 王康才 唐晓清;板蓝根[N];江苏农业科技报;2002年
9 综信;新型转基因棉花培育技术平台建成[N];中华合作时报;2004年
10 华哲;我市在国际上率先构建新型植保体系[N];大连日报;2007年
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1 徐威;根癌农杆菌介导的vgb对β-内酰胺抗生素生产菌的转化[D];沈阳药科大学;2004年
2 曾黎辉;农杆菌介导荔枝(Litchi chinensis Sonn.)遗传转化体系的建立及导入LEAFY基因研究[D];福建农林大学;2002年
3 王洪利;桑树转水稻半胱氨酸蛋白酶抑制剂(Oryzacystatin)基因的研究[D];浙江大学;2002年
4 蒋建雄;苎麻的分子育种研究[D];湖南农业大学;2000年
5 蒋盛军;甘薯胚性悬浮细胞的遗传转化和转基因植株的有效再生[D];中国农业大学;2003年
6 杨广东;基因工程改良几种重要蔬菜的抗虫性[D];浙江大学;2002年
7 陈怡平;He-Ne激光对增强UV-B辐射损伤菘蓝幼苗的防护、修复效应及机理研究[D];西北大学;2004年
8 王慧梅;喜树组织培养与遗传转化的研究[D];东北林业大学;2004年
9 黄雪清;农杆菌介导的玉米优良自交系遗传转化研究及成熟胚再生系统的建立[D];中国科学院研究生院(上海生命科学研究院);2004年
10 郑丽;根癌农杆菌介导SAG_(12)-ipt和3DN-iaaL基因转化切花菊及抗早衰研究[D];西南农业大学;2003年
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1 曾建军;根癌农杆菌介导的CryIA抗虫基因转化菘蓝(Isatis indigotica Fort.)的研究[D];西南师范大学;2004年
2 王丹;根癌农杆菌介导ubiC基因转化甘蓝的研究[D];南京理工大学;2002年
3 尹鸿瑛;影响根癌农杆菌介导水稻转化因素的研究[D];大连理工大学;2001年
4 杨成丽;根癌农杆菌介导的甜蛋白thaumatin基因导入烟草的遗传转化研究[D];华中师范大学;2002年
5 黄琼华;根癌农杆菌介导法将FPF1基因导入甘蓝型油菜(Brassica napus L.)[D];西南农业大学;2002年
6 沈烨;根癌农杆菌介导的甜樱桃茎尖遗传转化体系的建立[D];西南农业大学;2002年
7 彭春秀;根癌农杆菌介导的Ipt基因对矮牵牛遗传转化的研究[D];西南农业大学;2003年
8 李忠;根癌农杆菌介导转化鄂抗棉9号愈伤组织获得含Chitinase和β-(1,3)-glucanase基因的棉花再生植株[D];华中农业大学;2003年
9 晁岳恩;根癌农杆菌介导的菊花遗传转化体系的建立及ipt基因的导入[D];西南农业大学;2002年
10 陆万香;根癌农杆菌介导几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因转入甘蓝型油菜[D];西南农业大学;2001年
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