收藏本站
《西南大学》 2006年
收藏 | 手机打开
二维码
手机客户端打开本文

几丁酶—蛋白酶融合基因的构建与球孢白僵菌毒力的提高

冯静  
【摘要】:昆虫病原真菌是一类重要的生防真菌,在农林害虫的防治上起着重要的作用。它主要通过机械压力和水解酶的作用来穿透昆虫体壁,Pr1类蛋白酶和几丁质酶在其中起着重要作用。前人的研究表明,超量表达蛋白酶或几丁酶基因可以提高重组菌株的毒力,但目前对于二者在穿透昆虫体壁时是否存在协同作用还不清楚。 为了研究蛋白酶和几丁酶在昆虫病原真菌穿透寄主体壁时的相互作用,本文首先用扫描电镜观察了被蛋白酶CDEP-1、几丁酶Bbchit1及二者混合酶液处理过的桃蚜体壁,结果表明,蛋白酶与几丁酶混合液分解寄主体壁的能力更强。 进而将球孢白僵菌Pr1类蛋白酶基因CDEP-1分别与几丁酶基因Bbchit1和Machit1融合,分生孢子电击转化法将融合基因导入球孢白僵菌中。Northern blotting和Western blotting结果证明,这些基因均在重组菌株中组成性转录和表达。 生物测定结果表明,超量表达CDEP-1、Bbchit1单价基因及二者融合基因CDEP-1::Bbchit1均能提高重组菌株对桃蚜的毒力,且融合基因重组菌株的毒力提高幅度更大。在孢子浓度为1×10~7个/ml时,与野生型菌株Bb0062-15相比,超量表达蛋白酶CDEP-1基因重组菌株的致死中时(LT_(50))平均缩短了8.84%;超量表达几丁酶Bbchit1基因重组菌株的LT_(50)平均缩短了9.92%;而融合基因CDEP-1::Bbchit1重组菌株的LT_(50)平均缩短了21.12%。接种108h及120h后,融合基因CDEP-1::Bbchit1重组菌株CDEP-1::Bbchit1-41的致死中浓度(LC_(50))分别降低了67.42%和60.50%,下降幅度分别为CDEP-1-6和Bbchit1-26 LC_(50)之和的2.22(108h)和1.65倍(120h)。表明超量表达融合基因CDEP-1::Bbchit1能协同提高球孢白僵菌对寄主的毒力。 生物测定结果还表明,单独超量表达绿僵菌几丁酶Machit1基因不能提高重组菌株的毒力,但超量表达融合基因CDEP-1::Machit1的重组菌株却能显著提高球孢白僵菌的毒力。在孢子浓度为1×10~7个/mL时,超量表达融合基因CDEP-1::Machit1重组菌株的LT_(50)平均缩短了18.07%;在108h及120h时,CDEP-1::Machit1-37的LC_(50)分别比野生型菌株缩短了38.89%(108h)和41.68%(120h),均低于相应浓度及时间下蛋白酶基因CDEP-1重组菌株的LT_(50)及LC_(50)。 上述结果表明,昆虫病原真菌的蛋白酶和几丁质酶在分解昆虫体壁时,存在协同作用。据我们所知,目前尚无同类报道。
【学位授予单位】:西南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:S476.12

手机知网App
【引证文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 康曼;;球孢白僵菌分子生物学研究进展[J];广东农业科学;2011年24期
中国硕士学位论文全文数据库 前4条
1 甄伟;白僵菌对小菜蛾、棉铃虫的毒力比较及侵染机制差异性研究[D];河北大学;2011年
2 朱永敏;桃小食心虫病原真菌的致病性及其胞外酶的作用研究[D];山西大学;2011年
3 王刚;球孢白僵菌HFW-05对粉虱、棉铃虫侵染方式及高温胁迫法提高菌株耐热力研究[D];河北农业大学;2010年
4 姜立波;顶孢霉侵染二斑叶螨过程相关酶系的协同作用及常用杀螨剂对其侵染力的影响[D];甘肃农业大学;2012年
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李纯,汤坚,丁珊,孙继美;白僵菌酯酶同工酶薄层等电聚焦电泳分析[J];安徽农学院学报;1991年03期
2 樊美珍,李增智;营养物和培养条件对虫生真菌附着胞形成的影响[J];安徽农业大学学报;1994年02期
3 林华峰;虫生真菌研究进展(综述)[J];安徽农业大学学报;1998年03期
4 徐伟松,李建丰,胡美英;昆虫病原真菌在害虫防治上的应用[J];广西农业科学;2003年06期
5 杨星勇,王中康,夏玉先,卢晓风,裴炎;球孢白僵菌凝乳弹性蛋白酶(BbPr1)的纯化与特性[J];菌物系统;2000年02期
6 裴炎,方卫国,张永军;昆虫病原真菌致病寄主的机制和基因工程改良[J];农业生物技术学报;2003年03期
7 梁宗琦;虫生真菌的多样性[J];生物多样性;1996年04期
8 李君,曾中文,欧阳石文;微生物几丁质酶的特性、基因表达调控及应用[J];微生物学通报;2001年04期
9 冯明光;胞外蛋白酶和脂酶活性作为球孢白僵菌毒力指标的可靠性分析[J];微生物学报;1998年06期
10 肖月华,罗明,方卫国,罗克明,侯磊,罗小英,裴炎;利用YADE法进行棉花基因组PCR步行[J];遗传学报;2002年01期
【共引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 张俊华;;真菌杀虫剂的研究进展与展望[J];安徽农学通报;2007年12期
2 陈官菊;柴一秋;厉晓腊;金轶伟;刘又高;;蝉拟青霉APC20菌株对小菜蛾的室内毒力试验[J];安徽农业科学;2008年06期
3 田志来;阮长春;李启云;谭云峰;孙光芝;;球孢白僵菌对昆虫致病机理的研究进展[J];安徽农业科学;2008年36期
4 何劲;雷帮星;文庭池;康冀川;;一株虫生真菌的分离鉴定及杀虫活性初探[J];安徽农业科学;2009年10期
5 任文彬;张世清;黄俊生;;金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae HN1)几丁质酶与谷胱甘肽S-转移酶GST在大肠杆菌中的高效融合表达[J];安徽农业科学;2009年17期
6 张秋;;绿僵菌毒素的研究进展[J];安徽农业科学;2009年30期
7 史赟;马林;赵彬彬;韩巨才;刘慧平;;植物内生放线菌St24代谢产物对小菜蛾的拒食作用[J];现代农业科技;2008年13期
8 陈先训;;肥东县古城林场虫生真菌资源调查研究[J];现代农业科技;2010年22期
9 曲德鹏;邹晓;;被毛孢属真菌防治植食性螨类的研究进展[J];现代农业科技;2011年04期
10 屈燕;区智;;蛹虫草的研究进展[J];现代农业科技;2012年12期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 冯明光;;影响我国真菌杀虫剂产业化进程的技术与社会因素[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第五卷)[C];2003年
2 王中康;殷幼平;彭国雄;夏玉先;;杀虫真菌功能基因克隆和菌株改良研究进展[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第五卷)[C];2003年
3 李文华;王中康;殷幼平;;虫生真菌附着胞研究进展[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第五卷)[C];2003年
4 王中康;李文华;夏玉先;殷幼平;;影响金龟子绿僵菌附着胞形成的理化因子研究[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第五卷)[C];2003年
5 潘洁茹;;座壳孢菌的研究进展[A];食品安全的理论与实践——福建省科协第四届学术年会“食品安全与农民增收”分会场暨福建省农学会第五届青年学术年会论文集[C];2004年
6 任文彬;张世清;黄俊生;;金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae HN1)几丁质酶基因的克隆及高效表达[A];第十届全国杀虫微生物学术研讨会暨全国生物农药与化学生物学研究与产业化会议论文摘要集[C];2006年
7 刘彩玲;冯明光;顾福康;;蚜虫的病原真菌及其毒力评价方法[A];动物学专辑——上海市动物学会1999年年会论文集[C];1999年
8 李宝玉;张泽华;高松;农向群;;虫生真菌的研究与应用[A];我国2003年草原病虫鼠害发生与防治情况以及2004年发生趋势预测与防治对策研讨会论文集[C];2004年
9 李文华;张永军;王中康;;虫生真菌穿透昆虫表皮相关理化因子的研究[A];昆虫与环境——中国昆虫学会2001年学术年会论文集[C];2001年
10 魏萍;陈斌;李强;李正跃;孙跃先;;我国虫生真菌——球孢白僵菌研究进展[A];2005中国植病学会、中国菌物学会北海联合年会论文集[C];2005年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 刘东;苏云金芽孢杆菌几丁质酶特性分析及其基因启动子序列的确定[D];南开大学;2010年
2 肖亮;地衣芽孢杆菌MY75几丁质酶特性及表达调控元件的研究[D];南开大学;2010年
3 秦毅;表达苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白Vip3Aal的球孢白僵菌工程菌株的构建及其对斜纹夜蛾幼虫的肠道与体壁侵染力[D];浙江大学;2010年
4 杨帆;沙棘木蠹蛾白僵菌高毒菌株筛选和几丁质酶基因克隆及其微胶囊制剂的研究[D];内蒙古农业大学;2011年
5 王靖;十字花科作物根肿病生防放线菌研究[D];四川农业大学;2011年
6 张石柱;球孢白僵菌中疏水蛋白基因功能的研究[D];重庆大学;2010年
7 韩永超;盾壳霉产生抗真菌物质的调控及其分子机理研究[D];华中农业大学;2010年
8 王滨;白僵菌持续控制马尾松毛虫的生物多样性和生态学基础[D];浙江大学;2003年
9 方卫国;昆虫病原真菌降解寄主体壁酶基因的克隆及球孢白僵菌高毒力重组菌株的获得[D];西南农业大学;2003年
10 李洪军;弹性蛋白酶优良菌种选育及酶功能特性研究[D];西南农业大学;2003年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 田化平;海洋枯草芽胞杆菌DM03抗病原真菌物质的研究[D];华中农业大学;2009年
2 武博;多杀菌素固体发酵技术的研究[D];华中农业大学;2010年
3 谢宙;刺糖多孢菌对剪切力抗性的初步研究[D];华中农业大学;2010年
4 刘苏;褐飞虱高毒力真菌筛选及固相发酵培养基组分优化[D];安徽农业大学;2010年
5 俞云峰;不同惰性载体上发酵产蜡蚧轮枝菌分生孢子生物特性的研究[D];浙江理工大学;2010年
6 李明珠;弗氏链霉菌S.fradiae S-221角蛋白酶基因的异源表达及酶学性质研究[D];郑州大学;2010年
7 李兆防;拮抗毛壳和木霉混用防治土传病害的初步研究[D];山东农业大学;2009年
8 侯启会;向日葵菌核病根际拮抗菌的筛选、鉴定及其作用机理的初步研究[D];山东农业大学;2010年
9 叶小真;金龟子绿僵菌与化学农药相容性的初步研究[D];福建农林大学;2009年
10 秦为辉;多杀菌素的提取纯化工艺研究[D];武汉工业学院;2010年
【同被引文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 陶训;张勇;冯建国;屈增明;周东生;陈修会;;白僵菌与对硫磷微胶囊剂混用防治桃小食心虫的研究[J];山东农业科学;1990年01期
2 武新柱;赵芹;纪成杰;王维泉;;果园桃小食心虫的发生及防治[J];山东农业科学;2007年05期
3 陶训,冯建国,庄乾营,张勇,陈修会,屈增明,王彦鸣,李瑞松;白僵菌防治桃小食心虫的研究[J];山东农业科学;1994年05期
4 韩冰;从斌;刘亚臣;付海滨;;不同品系昆虫病原线虫对大蜡螟羧酸酯酶活性的影响[J];安徽农业科学;2006年07期
5 赵培静;任文彬;缪承杜;张世清;黄俊生;;淡紫拟青霉研究进展与展望[J];安徽农业科学;2007年30期
6 黄志;梁昌聪;杨腊英;刘磊;陆红霞;黄俊生;;绿僵菌农药助剂的筛选及混配防治荔枝蝽蟓的研究[J];安徽农业科学;2009年24期
7 王滨,樊美珍,李增智;球孢白僵菌选择性培养基的筛选[J];安徽农业大学学报;2000年01期
8 任小芳;刘振邦;朱虹;黄勃;李增智;;转Vip3Aa基因的球孢白僵菌工程菌的构建及其对马尾松毛虫毒力的增效作用[J];安徽农业大学学报;2011年05期
9 刘振邦;任小芳;宋文婧;朱虹;黄勃;李增智;;苏云金芽孢杆菌晶体杀虫蛋白Cry1Ac基因在虫生真菌球孢白僵菌中的表达[J];安徽农业大学学报;2011年05期
10 樊美珍,李增智,唐晓庆;白僵菌菌种退化及其控制[J];安徽农业大学学报;1996年03期
中国博士学位论文全文数据库 前3条
1 方卫国;昆虫病原真菌降解寄主体壁酶基因的克隆及球孢白僵菌高毒力重组菌株的获得[D];西南农业大学;2003年
2 范艳华;球孢白僵菌降解寄主体壁的几丁质酶和蛋白酶的分子改良[D];西南大学;2006年
3 应盛华;球孢白僵菌孢壁蛋白相关的耐热分子机理及其耐热性状的遗传改良[D];浙江大学;2006年
中国硕士学位论文全文数据库 前8条
1 吕敏;苦皮藤素V的选择毒性与昆虫两种解毒酶的关系研究[D];西北农林科技大学;2003年
2 张海英;根虫瘟霉的生物学特性和对桃蚜致病机理的研究[D];甘肃农业大学;2005年
3 宋丽雯;顶孢霉菌株(Acremonium Hansfordii)的生物学特性和对蚜虫致病机理的研究[D];甘肃农业大学;2006年
4 赵建华;Hog1类Bbhog1的基因敲除对球孢白僵菌毒力和抗逆性的影响[D];西南大学;2006年
5 刘智辉;球孢白僵菌对亚洲玉米螟毒力检测的研究[D];华中农业大学;2005年
6 郭书娟;利用家蚕几丁质酶Bmchi提高球孢白僵菌的毒力[D];西南大学;2007年
7 吕丁丁;球孢白僵菌基因工程菌株构建及杀虫效率评价[D];安徽农业大学;2008年
8 陈珊珊;应用RNAi技术对球孢白僵菌羧基转运蛋白基因BbJEN1的初步研究[D];安徽农业大学;2009年
【二级参考文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 李增智,樊美珍,汤坚;林用真菌杀虫剂生产工艺及应用技术研究[J];安徽农业大学学报;1996年03期
2 樊美珍,李增智,唐晓庆;白僵菌菌种退化及其控制[J];安徽农业大学学报;1996年03期
3 唐晓庆,唐燕平,李增智;球孢白僵菌菌种退化及其对马尾松毛虫防治的影响[J];安徽农业大学学报;1996年03期
4 樊美珍,胡景江;白僵菌酯酶同工酶、脂肪酸与其毒力的关系[J];安徽农业大学学报;1996年03期
5 胡景江,樊美珍;球孢白僵菌胞外蛋白酶与其毒力的关系[J];安徽农业大学学报;1996年03期
6 方自若;侯文英;郑美媛;;几种担子菌胞外漆酶同工酶谱的研究[J];真菌学报;1985年03期
7 陈都珍;成恒嵩;宓晓黎;;凤尾菇酯酶同工酶及其氨基酸含量的变化[J];真菌学报;1987年01期
8 朱衡,瞿峰,朱立煌;利用氯化苄提取适于分子生物学分析的真菌 DNA[J];真菌学报;1994年01期
9 邱守思 ,彭建文 ,殷凤鸣 ,何力春 ,王克祥 ,沈素华;法国森林害虫和生物防治概况[J];林业科技通讯;1986年03期
10 张永安,谈迎春,陈昌洁;白僵菌酯酶型及其与毒力关系的初步研究[J];林业科技通讯;1987年12期
【相似文献】
中国期刊全文数据库 前10条
1 谢翎;陈红梅;汤强;蒲顺昌;李增智;黄勃;;实时荧光定量PCR检测球孢白僵菌热休克蛋白基因hsp70在几种胁迫条件下的表达[J];菌物学报;2009年06期
2 应盛华;邓米霞;冯明光;;三种丝孢类生防真菌孢子类疏水蛋白的含量与组分比较[J];浙江大学学报(农业与生命科学版);2006年04期
3 张艳梅;谢映平;薛皎亮;刘卫敏;;油松毛虫受球孢白僵菌感染的组织病理学变化[J];昆虫学报;2011年05期
4 金凯;张永军;罗志兵;林健文;裴炎;;利用GFP表达系统检测球孢白僵菌侵染昆虫过程[J];菌物学报;2008年03期
5 林海萍;魏锦瑜;毛胜凤;陈喜;张立钦;马良进;;球孢白僵菌蛋白酶、几丁质酶、脂肪酶活性与其毒力相关性[J];中国生物防治;2008年03期
6 马德良;李启云;徐文静;杜茜;赵洪锟;董英山;谭云峰;杨信东;;玉米螟虫生真菌球孢白僵菌几丁酶基因的克隆与分析[J];玉米科学;2007年04期
7 徐均焕,冯明光,许谦;昆虫病原真菌胞外蛋白酶的病理作用与测定技术[J];中国生物防治;1998年03期
8 李建庆,张永安,张星耀,杨忠歧,袁锋;昆虫病原真菌毒素的研究进展[J];林业科学研究;2003年02期
9 王刚;董建臻;曹伟平;王金耀;王容燕;杜立新;宋健;冯书亮;;球孢白僵菌胞外蛋白酶及几丁质酶的研究进展[J];中国农学通报;2009年13期
10 林莲欣,于迎春;卵孢白僵菌防治大豆蛴螬试验简报[J];山东农业科学;1987年03期
中国重要会议论文全文数据库 前10条
1 林海萍;韩正敏;张昕;毛胜凤;;球孢白僵菌研究现状及提高其杀虫效果展望[A];2006中国微生物学会第九次全国会员代表大会暨学术年会论文摘要集[C];2006年
2 冯明光;;病原真菌对咀嚼式口器昆虫的摄人感染:球孢白僵菌对迁徙蚱蜢的生测实验[A];《中国虫生真菌研究与应用》(第四卷)[C];1996年
3 龙华;曾勇;;运动性气单胞菌胞外溶血毒素和蛋白酶产生的研究[A];中国细胞生物学学会第八届会员代表大会暨学术大会论文摘要集[C];2003年
4 张家玉;王建枝;;微管相关蛋白tau是ATP/Mg~(2+)依赖的蛋白酶小体系统的底物[A];湖北省暨武汉市病理生理学会第十二届学术年会论文汇编[C];2004年
5 杨明俊;杨庆尧;杨晓彤;;纳豆激酶的研究进展[A];第六届全国药用植物和植物药学术研讨会论文集[C];2006年
6 周素梅;王立;陈正行;姚惠源;;脱脂米糠中蛋白质提取工艺的研究[A];中国粮油学会第二届学术年会论文选集(综合卷)[C];2002年
7 廖国建;胡昌华;谢建平;;结核分枝杆菌蛋白酶功能基因组学研究进展[A];首届全国微生物基因组学学术研讨会会程与论文摘要集[C];2006年
8 王云华;王睿睿;杨柳萌;李健峰;徐维明;郑永唐;;HIV-1蛋白酶的表达、纯化及其抑制剂体外筛选方法的建立[A];中华中医药学会防治艾滋病学术研讨会暨2006年年会论文集[C];2006年
9 熊善柏;赵思明;刘友明;席文博;;大米蛋白的酶水解动力学研究[A];中国农业工程学会第七次会员代表大会论文集[C];2004年
10 张智红 ;林居强 ;曾绍群 ;骆清铭;;FRET成像实时监测细胞凋亡中起始caspase的活化[A];中国蛋白质组学第三届学术大会论文摘要[C];2005年
中国重要报纸全文数据库 前10条
1 记者 王菲;球孢白僵菌“降伏”马铃薯甲虫[N];新疆科技报(汉);2010年
2 温红;美国CLiPS技术加快蛋白酶药研发速度[N];医药经济报;2006年
3 纹姚;丙肝病毒NS2-3蛋白酶的活性位点被确定[N];医药经济报;2006年
4 何屹;剑蛋白酶对调节细胞运动至关重要[N];科技日报;2011年
5 陈勇;“基因融合”现象可能引发前列腺癌[N];医药经济报;2005年
6 张亮;人猪杂种细胞暗藏杀机[N];科技日报;2004年
7 仇逸闵建颖;我国科学家发现类泛素蛋白酶调控机制[N];医药经济报;2007年
8 江舸;美发明蛋白酶无线遥控法[N];科技日报;2002年
9 记者 尹传红;苏格兰科学家找到基因行为研究新法[N];科技日报;2006年
10 叶成光王立涛;大岭“绿丰源”蛋白酶增胶试验取得成效[N];海南农垦报;2007年
中国博士学位论文全文数据库 前10条
1 方卫国;昆虫病原真菌降解寄主体壁酶基因的克隆及球孢白僵菌高毒力重组菌株的获得[D];西南农业大学;2003年
2 范艳华;球孢白僵菌降解寄主体壁的几丁质酶和蛋白酶的分子改良[D];西南大学;2006年
3 秦毅;表达苏云金芽孢杆菌营养期杀虫蛋白Vip3Aal的球孢白僵菌工程菌株的构建及其对斜纹夜蛾幼虫的肠道与体壁侵染力[D];浙江大学;2010年
4 汤强;玫烟色棒束孢毒力基因的克隆与表达及球孢白僵菌高毒力重组菌株的获得[D];安徽农业大学;2009年
5 谢雪钦;球孢白僵菌超氧化物岐化酶(SODs)的基因克隆、鉴定及功能分析[D];浙江大学;2010年
6 李钧;金龟子绿僵菌耐夏季高温能力的种内变异、一新孢壁蛋白的基因克隆及功能鉴定[D];浙江大学;2009年
7 宋婷婷;害虫生防真菌多药抗性与侵染褐飞虱的高毒力菌株筛选策略研究[D];浙江大学;2011年
8 王正亮;球孢白僵菌两种甘露醇脱氢酶及五种过氧化氢酶的功能分析与对鳞翅目幼虫高口服毒力的工程菌株构建[D];浙江大学;2011年
9 张石柱;球孢白僵菌中疏水蛋白基因功能的研究[D];重庆大学;2010年
10 杨帆;沙棘木蠹蛾白僵菌高毒菌株筛选和几丁质酶基因克隆及其微胶囊制剂的研究[D];内蒙古农业大学;2011年
中国硕士学位论文全文数据库 前10条
1 冯静;几丁酶—蛋白酶融合基因的构建与球孢白僵菌毒力的提高[D];西南大学;2006年
2 孙明;蜱病原真菌的分离、鉴定及其生物学特性研究[D];甘肃农业大学;2011年
3 武增强;钙调磷酸酶催化亚基BbCNA影响球孢白僵菌产孢、毒力和毒力相关生物学性状[D];西南大学;2010年
4 孙召朋;继代培养对球孢白僵菌毒力及毒力相关酶表达的影响[D];吉林大学;2011年
5 郭书娟;利用家蚕几丁质酶Bmchi提高球孢白僵菌的毒力[D];西南大学;2007年
6 吴迪;钙调磷酸酶对球孢白僵菌生物学特性影响[D];西南大学;2008年
7 张芙蓉;利用SSH对犬小孢子菌在不同诱导底物表达差异基因的研究[D];大连医科大学;2008年
8 梁成钦;罗汉果蛋白酶的提取分离、特性及应用研究[D];广西师范大学;2005年
9 张瑞平;猪胸膜肺炎放线杆菌蛋白酶的分离提纯及特性研究[D];山东农业大学;2008年
10 冷波;一种新的球孢白僵菌内切几丁质酶的纯化和抗血清的制备[D];西南农业大学;2003年
 快捷付款方式  订购知网充值卡  订购热线  帮助中心
  • 400-819-9993
  • 010-62791813
  • 010-62985026