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《西南大学》 2006年
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中药丹参提取物对大肠杆菌(E.coli)环丙沙星耐药性的消除作用

杨柳  
【摘要】: 目的:研究中药丹参提取物对大肠杆菌环丙沙星耐药性的消除作用。 方法:采用随机抽样调查的方法,在十个重庆市荣昌县、大足县、永川市、合川市、江津市等地较大规模的养猪场中,随机选择抽取五个养殖场进行采样调查大肠杆菌的耐药性。通过耐药消除试验筛选有效的中药耐药消除剂。通过对标准菌株K_(88)-S进行人工诱导来观察中药丹参提取物对诱导大肠杆菌环丙沙星耐药株的影响。采用微量棋盘稀释法测定中药丹参提取物与环丙沙星联用对受试菌的部分抑菌浓度指数(FIC),以判定两药联合作用的效果。观察丹参提取物亚抑菌浓度(1/2MIC)培养的大肠杆菌对环丙沙星的耐药性消除率;以丹参提取物为消除剂,以SDS作为对照,采用影印培养法对受试菌进行培养,分离提取受试菌质粒,并进行琼脂糖凝胶电泳,以研究中药丹参提取物对大肠杆菌耐环丙沙星耐药质粒的消除情况。采用荧光测定法测定环丙沙星在受试菌体细胞内的蓄积浓度,观察丹参提取物对环丙沙星在菌体细胞内蓄积量的变化。 结果:对五个养殖场大肠杆菌耐药谱的调查,发现大肠杆菌对氟喹诺酮类抗菌药的耐药已相当严重,耐药率普遍较高,多重耐药也相当严重。试验结果显示:150株菌株中对目前常用药物的耐药率分别是:氧氟沙星30%、诺氟沙星44%、环丙沙星56%、依诺沙星60%、罗美沙星84%、氟诺沙星88%、链霉素62%、阿米卡星20%、庆大霉素64%、妥布霉素72%、米诺环素92%、多西环素96%、四环素96%。 从黄连、丹参、钩藤、鱼腥草、艾叶、葛根、野菊花的提取物中筛选出了有效的耐药消除剂-中药丹参提取物。 诱导耐药试验中,敏感菌株K_(88)-S加入环丙沙星诱导得到耐药菌株K_(88)-Y,环丙沙星对其MIC值由0.156μg/ml上升到40μg/ml,是诱导前的256倍,而K_(88)-S当加入环丙沙星和1/4MIC的丹参提取物诱导相同代数得到K_(88)-D,环丙沙星对其MIC值由0.15μg/ml上升到5μg/ml,是诱导前的32倍,而没加丹参提取物诱导的K_(88)-Y,环丙沙星对其MIC是加入丹参提取物诱导的K_(88)-D的8倍,可以看出中药丹参提取物在诱导耐药的过程中虽然没能阻止细菌耐药的产生,但是却抑制了细菌耐药的程度。 中药丹参提取物与环丙沙星联用时对大肠杆菌K_(88)-S,K_(88)-Y、K_(88)-D,RC-0,所测定FIC指数分别为1,1,0.75,0.63,表明二者具有相加作用。 丹参提取物亚抑菌浓度(1/2MIC)作用24h,对耐约菌株K_(88)-Y、K_(88)-D,RC-0的消除率分别为0.8%、1.0%和1.4%;延长作用至48小时,消除率分别为1.2%、1.0%和1.6%。而对照组100μg/ml SDS作用24h的消除率分别为1.0%、1.0%和1.4%;延长作用至48小时,其消除率可分别提高为1.6%、2.0%和2.2%。经x~2检验,中药丹参提取物与SDS两种药物对细菌耐药性的消除率差异不显著。消除子进行质粒抽提,经琼脂凝胶糖电泳后,结果显示,临床分离的多重耐药株RC-0与经中药感触后的菌株RC-1丢失了部分的质粒条带,而诱导耐药株的质粒条带无变化。 加入中药丹参提取物培养后,K_(88)-Y,RC-0菌体内环丙沙星稳态浓度均较未加时增加(P<0.05),而ATCC25922和K_(88)-S菌体内环丙沙星浓度上升不明显(P>0.05)。加入外输泵抑制剂氰氯苯腙(CCCP)后,K_(88)-Y,RC-0菌体内环丙沙星浓度随时间的延长而递增,并保持高水平的稳态浓度,与未加CCCP时有显著性差异(P<0.05)。而敏感菌株ATCC25922、K_(88)-S不论有无CCCP存在,菌体内环丙沙星浓度都随时间的延长而呈递增趋势。 结论:试验结果提示丹参提取物和环丙沙星联合应用有相加作用;能降低细菌对环丙沙星的耐药率,并有一定的消除耐药质粒的作用;能增加菌体内环丙沙星的浓度。
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