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苦荞麦叶黄酮提纯及其功能活性研究

贾雪峰  
【摘要】: 为了综合利用苦荞麦资源,本研究对处于盛花期(播种后第58天)苦荞麦叶干燥粉碎物中的黄酮进行了定性定量分析,并利用苦荞麦叶为原料生产苦荞黄酮精粉(tartary buckwheat flavonoids powder,TBFP),对提取、纯化工艺进行了优化,测定了TBFP的总黄酮含量、芦丁含量,研究了TBFP功能性,并采用结晶法制备了纯化芦丁,完善了一个快速准确地测定苦荞麦中芦丁含量的高效液相色谱法。实验结论如下: (1)超声波乙醇回流浸提工艺是苦荞麦叶黄酮提取的理想工艺,最佳条件为:超声波(20kHz)处理40min,料液比1:30、pH=8的60%乙醇溶液70℃浸提120min,浸提率达95.26%。 (2)本试验中苦荞麦叶黄酮的纯化工艺采用了DA—201小型大孔吸附树脂柱,最佳工艺是:将浸提液真空(60℃,0.09MPa)浓缩;200mL丙酮(AR级)萃取浓缩液,除去杂质;上样液中黄酮浓度为0.5mg/mL以1mL/min通过DA—201树脂柱(f20mm×300mm);150 mL80%的乙醇(AR级)以1 mL/min洗脱并收集洗脱液;真空(60℃,0.09MPa)浓缩,制得苦荞麦叶黄酮精粉(TBFP)。 (3)用苦荞麦叶黄酮精粉(TBFP)进一步结晶精制芦丁工艺:用甲醇加热回流溶解TBFP,过滤,滤液放冷,结晶,过滤得湿粗芦丁。母液回收甲醇,放冷结晶,过滤得湿芦丁,将2次得到的湿芦丁于烘箱中40℃,0.09MPa避光条件烘去大部分甲醇,然后逐渐升温至90℃烘干,然后利用正丁醇加热至80℃左右溶解前步制得的芦丁,过滤,滤液加5mL去离子水,放冷结晶,过滤得湿芦丁,置于0.09MPa避光条件烘箱中90℃烘干得纯芦丁。本工艺制得的纯化芦丁含量和总黄酮含量分别为95.13%、97.89%。 (4)HPLC测定苦荞麦中芦丁含量的色谱条件是:色谱柱:Agilent C_(18),10μm,4.6×250nm不锈钢柱;流动相:甲醇—水—冰乙酸(40:60:1);流速:1.0mL/min;检测波长:330 nm,柱温:室温(20℃)。芦丁峰形对称,与相邻杂质峰之间能达到基线分离,灵敏度和精密度高,方法简便,芦丁浓度与峰面积显著相关,回归方程为:y=806.16x+297.45,R~2=0.999。 (5)苦荞麦叶提取物(TBFP)具有清除O_2、清除羟自由基以及还原的能力,且随着黄酮含量的增加而增加,但其清除能力及还原能力要比抗坏血酸的能力弱一些;苦荞麦叶提取物对亚硝酸钠有消除作用,对亚硝酸钠的最大清除率为67.18%。结果表明,此提取物具有较好的阻断清除亚硝酸钠的效果。


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