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《西南大学》 2009年
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高羊茅(Festuca arundinacea Schreb.)高频再生体系的建立及转基因初探

黎岚  
【摘要】: 高羊茅(Festuca arundinacea Schreb)系禾本科羊茅属多年生冷季型草,因其具有建坪快,抗旱,耐高温,耐践踏,适应多种土壤和气候条件等特点,而被广泛应用于运动场、园林绿化、机场和斜坡防护等。但在运用过程中也存在一些不足之处,如叶片较粗糙,没有匍匐茎,草坪扩展性差,夏季生长缓慢等。本实验的目的是以高羊茅(新秀和夜明珠2号)的成熟种子为试材,采取切除部分胚乳的方法,利用组织培养技术,对愈伤组织和不定芽的形成进行研究,建立高羊茅稳定、高频的再生体系;同时采用根癌农杆菌浸染方法,探讨影响转化的因素,初步建立起高羊茅(夜明珠2号)的遗传转化系统,为其诱变育种,细胞工程操作和基因工程操作奠定基础,从而促进品种改良,使其更好地用于生产。实验结果如下: 1.建立以成熟种子为外植体的高频再生体系 以高羊茅新秀和夜明珠2号两品种的成熟种子为外植体,研究了不同植物生长调节剂种类组合及浓度的配比对愈伤组织诱导、分化的影响,结果表明:含生长素2,4-D、NAA和细胞分裂素6-BA的诱导培养基对两品种愈伤组织的诱导频率差别较大,诱导率幅度范围分别为9-92%、12-94%,两品种对2,4-D敏感性很强,夜明珠2号以5.0mg/L2,4-D+0.1mg/L6-BA效果最好,愈伤组织诱导率达到92%;新秀以5.0mg/L2,4-D+0.1mg/L6-BA和5.0mg/L2,4-D+0.1mg/LNAA效果较好,但前者的愈伤组织诱导率较后者大,可达94%;6-BA对愈伤组织的分化起着重要作用,夜明珠2号以2.0mg/L6-BA分化效果最好,新秀则以1.0mg/L6-BA效果最好,分化率分别高达78%和76%;两品种最佳的生根培养基均为1/2MS+0.5mg/LNAA,生根率可达100%。 2.初步建立了以愈伤组织为受体的高羊茅(夜明珠2号)遗传转化体系 在高羊茅遗传转化过程中,对影响其转化效率的因素进行了比较详细的试验,初步建立了高羊茅的遗传转化体系。根据本次实验结果统计,确定转化最优条件如下:将诱导30d的愈伤组织在MS+0.5mg/L6-BA+0.5mg/LNAA中预培养2-3d备用;取对数生长期OD值为1.0左右的农杆菌菌液离心,再用液体MS重悬至OD值为0.6-0.7,同时加入100umol/L乙酰丁香酮,浸染预培养愈伤组织10-15min,滤纸吸干多余的菌液,接种于MS+5.0mg/L2,4-D+0.1mg/L6-BA+100umol/LAS的共培养基中(培养基上添加滤纸),暗培养3-4d;液体MS清洗三次,MS+500mg/LCef脱菌2h,转入MS+5.0mg/L2,4-D+0.1mg/L6-BA+30mg/LCef中进行延迟培养,2-3d后,转入MS+5.0mg/L2,4-D+0.1mg/L6-BA+20mg/LG418+100mg/LCef诱导筛选培养基中培养,待分化出抗性愈伤组织后,即转入MS+1.0mg/L6-BA+30mg/LG418+100mg/LCef的分化筛选培养基中培养,待长出3-4cm的幼苗时,转入1/2MS+0.5mg/LNAA+30mg/LG418的生根筛选培养基中诱导生根。得到2株GUS+染色呈蓝色的抗性苗。
【学位授予单位】:西南大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2009
【分类号】:S688.4

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