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《四川师范大学》 2004年
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L-甲硫氨酸产生菌诱变育种和突变株发酵条件研究

马燕  
【摘要】: L-甲硫氨酸(L-Met)是人体的必需氨基酸之一,广泛应用于医药、食品、饲料等行业。利用微生物海因酶系统生产L-Met的方法,具有经济、环保等特点,有较高的工业应用价值。本实验室从川西高原土样中分离到具有M-海因水解酶活性的芽孢杆菌属菌株MV0073,能催化M-海因(D,L-5-甲硫基乙基乙内酰脲)生成L-Met,但其产量较低。为了选育L-Met高产菌株,对MV0073进行了诱变处理,选育各种抗性高产菌株,并对突变株发酵条件进行了一定的研究。 以MV0073为出发菌株,用紫外线照射为诱变因子,选取致死率为82.5%,正突变率为13.67%的诱变剂量进行诱变处理。用L-Met的结构类似物乙硫氨酸(Eth)筛选培养基平板进行筛选,没有得到L-Met高产突变株。 实验表明亮氨酸(Leu)对MV0073生长有抑制作用,而L-Met对此生长抑制有恢复作用,表明可利用含Leu平板筛选L-Met高产突变株。用Leu筛选培养基平板进行筛选,经3轮诱变后,得到突变株M0361。M0361的L-Met产量是MV0073的1.86倍左右。 用亚硝酸诱变处理M0361后,筛选Leu抗性株,突变株L-Met产量无明显增加。 用0.3mg/mL溶菌酶溶液,37℃作用2.5-3h,制备M0361菌株的原生质体,原生质体形成率为86.2%。原生质体再经紫外线处理后,用含M-海因类似物5-氟尿嘧啶(5-FU)平板筛选,得到L-Met高产突变株M0537。 以M0537为出发株,紫外线诱变后,涂布于含0.059/L Eth、69/L Leu 和19/LS一f7U的多重抗性筛选培养基平板,得到L一Met产量大于1.09/L的突 变株M0658。由洗脱法测得M0658的L一Met产量为1.099/IJ,是出发菌株MV0073 的3.14倍。M0658连续传代六次,L一Met产量稳定。 通过单因子试验和正交试验,对M0658发酵条件进行了优化研究。确定 l%蔗糖,0.1%NH,NO:,,0.3%KZHPO,,0.2%KHZPO。,M一海因0.59/L,金属离子混 合物1%,维生素混合物2%为较适的L一Met高产培养基组成。培养基的起始 PlI在8.0一9.0,培养温度在35℃一37℃为较适的培养条件。在以上发酵条件下, MO658的L一Met产量为1.379/L,是原发酵培养基L一Met产量的1.22倍。
【学位授予单位】:四川师范大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2004
【分类号】:TQ920

【引证文献】
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