华重楼内生菌抗菌肽的分离纯化及其性质研究
【摘要】：
植物内生菌(Endophyte)是一类应用前景广阔的资源微生物,具有固氮、促进植物生长、增强宿主植物抗逆性等作用,可通过组织学方法或表面消毒等方法从植物组织中分离。重楼属植物是一类极具药用价值的植物,具有解毒、镇痛、抗菌、抗癌等功效,是许多中成药和新药的有效成分。随着医药产业对重楼的开发利用,野生重楼遭到了毁灭性的人为破坏,濒临枯竭。药用植物内生菌的研究表明,其内生菌具有合成与宿主植物相同或相似的活性成分的能力,有的内生菌还具有促进宿主植物合成活性成分的能力。本文选择对四川华重楼内生菌的研究,从分离药用植物的活性成分方面解决重楼资源不足的问题。
通过表面灭菌,从药用植物华重楼(Paris polyphylla var.chinensis )的地下根状茎中分离得到82株内生菌。通过滤纸片扩散法初筛和平板对峙法复筛,有多株菌有抑菌活性,本文对其中一株具有较好抑制作用的内生细菌PCE45进行了研究。根据形态学特征、生理生化特征及16SrDNA序列分析,确定PCE45为一株枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)。
通过硫酸铵盐析、透析、丙酮低温沉淀,得到PCE45的粗提液,采用管碟法测得硫酸铵最佳饱和度为50%~70%。粗提液经SephadexG75柱、DE52纤维素柱和SephadexG25凝胶柱纯化得到一种抗菌肽,命名为PCP-1。稳定性测试表明,该抗菌肽对对蛋白酶不敏感,对高温、强酸、强碱有较好的耐受性,可造成稻瘟病菌菌丝畸形并抑制孢子萌发。抑菌谱表明该抗菌肽对玉米弯胞病菌等真菌和大肠杆菌等细菌有较强的抑菌效果。质谱测得其分子量为1058.3D。氨基酸组成分析表明该小肽主要由7种氨基酸组成。结合茚三酮反应呈阴性,酸水解后,茚三酮反应和双缩尿反应呈阳性的性质,推测PCP-1可能为低分子量的环状小肽。
【关键词】：华重楼 内生菌 抗菌肽 分离 纯化 【学位授予单位】：四川师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2009
【分类号】：S567.239
【目录】：
- 摘要3-5
- Abstract5-9
- 第一章 文献综述9-27
- 1 植物内生菌研究概况9-18
- 1.1 植物内生菌起源和演化9
- 1.2 植物内生菌的定义9-10
- 1.3 植物内生菌的普遍存在性和生物多样性10-11
- 1.4 常见的内生菌11-12
- 1.5 植物内生菌的代谢物质12-15
- 1.6 植物内生菌的生物学及生态学作用15-18
- 2 重楼属植物研究状况18-24
- 2.1 重楼属植物的分布18
- 2.2 重楼属植物的形态特征18-19
- 2.3 重楼属植物的分子生物学特征19
- 2.4 重楼属植物的主要化学成分19-21
- 2.5 重楼属植物的药理作用21-23
- 2.6 重楼属植物研究进展23-24
- 3 重楼属植物内生菌研究进展24-25
- 4 研究意义及研究路线25-27
- 第二章 华重楼内生菌的分离、筛选及鉴定27-44
- 1 材料与方法27-35
- 1.1 材料27-29
- 1.2 方法29-35
- 2 结果与分析35-39
- 2.1 华重楼内生菌的分离35-36
- 2.2 PCE45 的形态学特征和生理生化鉴定36-38
- 2.3 PCE45 分子生物学鉴定38-39
- 3 讨论39-44
- 3.1 从药用植物华重楼中寻找微生物资源39-40
- 3.2 华重楼内生菌的分离筛选40-42
- 3.3 华重楼内生菌的鉴定42-44
- 第三章 华重楼内生菌抗菌肽的分离纯化及性质研究44-62
- 1 材料与方法44-51
- 1.1 材料44-45
- 1.2 方法45-51
- 2 结果与分析51-59
- 2.1 抗菌肽粗体液的制备51-52
- 2.2 PCP-1 的分离纯化52-53
- 2.3 PCP-1 对病菌的抑制作用53-56
- 2.4 PCP-1 对真菌菌丝和孢子的影响56
- 2.5 PCP-1 的性质56-59
- 3 讨论59-62
- 3.1 华重楼内生菌抗菌肽的分离纯化59-60
- 3.2 华重楼内生菌抗菌肽的抑制作用60
- 3.3 华重楼内生菌抗菌肽的性质研究60-62
- 参考文献62-71
- 附录71-72
- 致谢72-73
- 研究生在校期间的科研成果73
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| 1 |
王建,黎海蒂,徐海伟,方勇飞,龚发云,李希成;重楼皂甙对急性吗啡耐受大鼠痛反应及海马ACTH和β-EP含量的影响[J];第三军医大学学报;2000年12期 |
| 2 |
韦金育,李延,韦涛,吕琳,曾振东;50种广西常用中草药、壮药抗肿瘤作用的筛选研究[J];广西中医学院学报;2003年04期 |
| 3 |
宋守荣,魏羽佳,曹煜,杨柳依,吴承龙,朱树珍;中药山宝皮宁治疗单纯疱疹临床及实验研究[J];贵阳医学院学报;2004年03期 |
| 4 |
陈雪珍;综合治疗慢性盆腔炎80例[J];江苏中医;1999年05期 |
| 5 |
张玲琪,谷聲甦,邵华,魏蓉城;发酵产鸢尾酮真菌的分离鉴定及生香特性的初步研究[J];菌物系统;1999年01期 |
| 6 |
万近福;刘传东;;大孔吸附树脂分离重楼中偏诺类皂苷的研究[J];昆明师范高等专科学校学报;2005年04期 |
| 7 |
詹锋,李质怀,刘和强;部分抗癌中药对Hela细胞的抵制实验[J];兰州医学院学报;2003年04期 |
| 8 |
张继峰;田青;汤健;苏静怡;唐朝枢;杨连春;王幼珍;;从抗蛇毒药探寻内皮素拮抗剂的初步报告[J];南京医学院学报;1993年03期 |
| 9 |
唐荣华,王丽,唐小为,李云飞;十一种重楼属植物的RAPD分析[J];四川大学学报(自然科学版);2003年04期 |
| 10 |
陈小静,冯定胜,赵明,张小洁,王一丁;四种华重楼内生细菌的初步研究[J];四川大学学报(自然科学版);2005年04期 |
|
|
|
|
|
| 1 |
徐云(昌鸟);于力文;;霍山石斛种子的萌发和试管苗的培养[J];安徽农学院学报;1984年01期 |
| 2 |
明军,张启翔,晏小兰,邱丽娟;梅花基因组AFLP银染反应体系的建立和优化[J];北京林业大学学报;2003年03期 |
| 3 |
汤健,梁熙南,张万琴,韩济生;大鼠针刺耐受与吗啡耐受[J];北京医学;1979年01期 |
| 4 |
程丽莉,苏淑钗,秦岭,尹伟伦;板栗叶片DNA的提取及AFLP反应体系的建立[J];北京农学院学报;2005年02期 |
| 5 |
金学洙;因子抗体血清凝集法鉴定念珠菌之研究[J];白求恩医科大学学报;1989年03期 |
| 6 |
项勇,崔京霞,吕安国;东北红豆杉内生真菌的分离和筛选[J];东北林业大学学报;2002年02期 |
| 7 |
吴俊,束怀瑞,张开春,张学宁,姜立杰;桃AFLP技术体系的优化及集群分离分析研究[J];西北植物学报;2005年03期 |
| 8 |
何红,蔡学清,洪永聪,兰成忠,关雄,胡方平;内生菌BS-2对蔬菜立枯病的抑制效果[J];福建农业大学学报;2004年01期 |
| 9 |
翁启勇,陈庆河,赵健,刘素萍,何玉仙;利福平标记菌株BS1在番茄、茄子根部及土壤中的定殖动态[J];福建农业学报;2003年02期 |
| 10 |
高冬,高永琳,白平;重楼对宫颈癌细胞钙信号的影响[J];福建中医学院学报;2003年04期 |
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