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《贵州大学》 2018年
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兴义鸭MEF2C和MEF2D基因的SNPs分析及原核表达研究

师新彩  
【摘要】:肌细胞增强因子2C(myocyte enhancer factor 2C,MEF2C)和肌细胞增强因子2D(myocyte enhancer factor 2D,MEF2D)是肌细胞增强因子2(myocyte enhancer factor 2,MEF2)基因家族的成员,被认为与骨骼肌发生发育和再生有关。本研究以贵州省地方品种兴义鸭为研究对象,以MEF2C和MEF2D基因为候选基因,利用直接测序方法检测两个基因外显子的多态性,并与屠宰性状各指标进行相关性分析,同时构建两个基因的原核表达载体,以期为兴义鸭屠宰性状的分子标记辅助选育提供依据,为其他畜禽相关基因的研究提供参考,为下一步相关蛋白质功能的研究提供基础。研究结果如下:1、兴义鸭MEF2C和MEF2D基因多态性与屠宰性状的关联性研究。在本试验群体MEF2C基因外显子中没有发现SNP位点。在MEF2D基因外显子发现了6个多态位点,均为同义突变;群体遗传学分析显示,6个多态位点均表现为中度多态(0.25PIC0.5),经χ2检验表明兴义鸭群体在这6个多态位点均处于Hardy-weinberg平衡状态(P0.05);各SNPs与屠宰性状关联分析发现,T16236C和A16305C位点的不同基因型在活重、屠体重、半净膛重、全净膛重、胸肌重和胸肌率(或腿肌率)存在显著或极显著差异(P0.05或P0.01);G16359C位点的CC基因型个体半净膛重、全净膛重显著高于GG基因型个体(P0.05);A21071G位点的不同基因型在屠体重、全净膛重、腿肌重、屠宰率存在显著或极显著差异(P0.05或P0.01);其余SNPs对屠宰性状无显著影响(P0.05);除个别指标外,总体上T16236C、A16305C、G16359C位点的CC基因型(突变型),A21071G位点AA基因型(野生型)个体均值高于其他基因型。单倍型分析结果表明,兴义鸭TATAGA单倍型的全净膛率显著高于其他单倍型(P0.05);TACCCA单倍型的腿肌重显著高于其他单倍型(P0.05);CGCCCG单倍型的半净膛重和半净膛率显著或极显著高于其他单倍型(P0.05或P0.01)。2、成功克隆兴义鸭MEF2C、MEF2D基因的CDS区,构建原核表达载体p ET32a(+)-MEF2C-1/MEF2C-2、p ET32a(+)-MEF2D。以c DNA为模板,扩增出MEF2C基因2种可变剪接体,长度分别为1398 bp、1302 bp,分别编码465、433个氨基酸;扩增出MEF2D基因的CDS区,长度为1557 bp,编码518个氨基酸,分别与原核表达载体p ET32a(+)连接,成功构建原核表达载体p ET32a(+)-MEF2C-1/MEF2C-2、p ET32a(+)-MEF2D。3、成功进行原核表达。将p ET32a(+)-MEF2C-1/MEF2C-2、p ET32a(+)-MEF2D重组质粒转入BL21(DE3)菌株后,利用IPTG进行重组蛋白的诱导表达,利用Western-blot技术进行验证,获得了兴义鸭的MEF2C、MEF2D原核表达蛋白。
【学位授予单位】:贵州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S834

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【参考文献】
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