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《贵州大学》 2018年
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丁香酚对鲤鱼中枢单胺类神经递质影响的研究

刘金平  
【摘要】:丁香酚作为鱼用麻醉剂在生产实践中的应用越来越普遍,其麻醉机理的研究一直是热点。单胺类神经递质在中枢神经系统内参与多项重要的生理活动,大量的研究表明其参与了麻醉剂的麻醉过程,但单胺类神经递质是否参与丁香酚对鲤鱼的麻醉过程未见相关报道。本研究通过对比研究丁香酚纳米乳和乳剂对鲤鱼的麻醉效果,确定更适用于鲤鱼麻醉的丁香酚制剂和最适麻醉浓度。建立了同时测定鲤鱼中枢中多种单胺类神经递质的高效液相色谱-荧光检测器的新方法;在丁香酚纳米乳最适麻醉浓度下,测定鲤鱼在诱导期、麻醉期、深度麻醉期及恢复期中枢肾上腺素(E)、去甲肾上腺素(NE)、多巴胺(DA)、左旋多巴胺(L-DOPA)3,4-二羟基苯乙酸(3,4-DOPAC)、5-羟色胺(5-HT)、5-羟基吲哚乙酸(5-HIAA)和高香草酸(HVA)等8种单胺类神经递质含量的变化情况,探讨8种神经递质在丁香酚的麻醉过程的作用和丁香酚的麻醉机理。结果1、体重为0.75±0.1 kg的鲤鱼,用丁香酚纳米乳和丁香酚乳剂进行麻醉,随着丁香酚浓度的增加,鲤鱼麻醉时间越来越短,恢复时间越来越长;同一浓度下的丁香酚纳米乳较乳剂使鲤鱼进入各麻醉期的时间短,麻醉过程平稳,并且恢复时间也缩短,是一种更为安全和有效的鲤鱼的麻醉剂。对体重为0.75±0.1 kg的鲤鱼,丁香酚纳米乳的最适麻醉浓度是40 mg/L,而参比药物MS-222的最适麻醉浓度是160 mg/L。2、建立的同时测定鲤鱼中枢中多种单胺类神经递质的高效液相色谱-荧光检测器新方法:在不添加离子对试剂,不对样品进行衍生化的情况下,通过梯度洗脱的方法,使8种单胺类神经递质完全分离,各物质之间分离度达到要求且无拖尾现象出现;各单胺类神经递质在其浓度范围内与峰面积都呈良好的线性关系,相关系数R2都大于0.999;日间精密度范围是0.32%~3.82%,日内精密度范围是0.22%~4.78%;NE、E、L-DOPA、DA、3,4-DOPAC、5-HT、5-HIAA和HVA的平均添加回收率分别为101.51%、94.71%、92.69%、101.47%、99.73%、100.35%、98.34%和91.47%;RSD范围为0.00%~2.56%。因此,该方法操作简便、快速,测定结果准确度较高,可用于鲤鱼脑内此8种单胺类递质的测定。3、鲤鱼各脑组织中NE含量差异较大,含量高低依次为端脑(294.29 ng/m L)、间脑(140.89 ng/m L)、小脑(111.14 ng/m L)、中脑(97.76 ng/m L)、延脑(54.97ng/m L)和脊髓(38.90 ng/m L),功能越高的脑区NE含量越高。鲤鱼各脑组织中DA含量差异较小,含量高低依次为脊髓(1349.99 ng/m L)、端脑(1048.38ng/m L)、延脑(1007.13 ng/m L)、中脑(934.08 ng/m L)、间脑(893.11 ng/m L)和小脑(855.79 ng/m L)。鲤鱼各脑组织中5-HT含量差异更小,含量高低依次为端脑(29.82 ng/m L)、脊髓(19.90 ng/m L)、间脑(17.98 ng/m L)、延脑(17.78ng/m L)、中脑(9.82 ng/m L)和小脑(8.96 ng/m L)。5-HIAA在正常鲤鱼的间脑(15.30 ng/m L)、端脑(13.36 ng/m L)和脊髓(12.37 ng/m L)中检测到,其余脑区未检出。各脑区中均未检测出E、L-DOPA、3,4-DOPAC和HVA。4、丁香酚麻醉后,随鲤鱼进入诱导期、麻醉期、深麻醉期和恢复期,各脑区NE含量依次出现极显著降低(P0.01),极显著地升高(P0.01),再极显著地降低(P0.01),再极显著升高(P0.01)的态势。麻醉各期各脑区(尤其是高级中枢)NE含量的变化较大,与丁香酚麻醉效应变化相应。说明丁香酚麻醉鲤鱼可能是通过抑制NE神经通路功能来发挥的。5、丁香酚麻醉后,鲤鱼间脑、中脑、小脑和延脑DA含量诱导期极显著升高(P0.01),在麻醉期达最高(P0.01),深度麻醉期除间脑外极显著下降(P0.01),恢复期再升高;而间脑DA含量在诱导期升高、麻醉期和深麻期达到最高、恢复期下降;脊髓DA含量也经历先降低,在麻醉期最高,然后逐渐下降。6、丁香酚麻醉后,鲤鱼各脑区5-HT含量诱导期极显著升高(P0.01),麻醉期极显著地下降(P0.01),除中脑和延脑外深度麻醉期再极显著地升高(P0.01),恢复期升高下降并存的态势。7、MS-222麻醉鲤鱼后,端脑的NE含量变化与丁香酚相似,其他脑区NE含量诱导期和麻醉期逐步升高,深麻期和恢复期逐渐下降。间脑、延脑和脊髓的DA含量逐步降低,端脑、中脑和小脑则出现诱导期升高,然后逐渐下降。除间脑外,各脑区5-HT含量在各个时期均逐步降低。8、丁香酚麻醉可引起部分脑区5-HIAA含量的变化,MS-222麻醉后各脑区均未测到5-HIAA。结论:丁香酚麻醉鲤鱼可能是通过抑制NE神经通路功能来发挥的。
【学位授予单位】:贵州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2018
【分类号】:S948

【参考文献】
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