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古尼虫草菌丝发酵工艺优化及其多糖对肿瘤细胞免疫抑制因子的影响

梅德强  
【摘要】:采用SAS软件提供的Plackett-Burman设计和响应面分析法对对古尼虫草Cordyceps gunnii的无性型,古尼虫拟青霉Paecilomyces gunnii 5-19菌株发酵培养基重要因素C/N以及初始pH值、发酵时间、和转速等诸因素对菌丝产量的影响进行了优化。最后选择培养基组成为:葡萄糖(4.48%),蛋白胨(1.67%),KH_2PO_4(0.5%)、K_2HPO_4·3H_2O(0.5%)、MgSO_4·7H_2O(0.5%);培养条件温度26℃,接种量5%(v/v),移种时间48h,pH6.9,培养时间126h、转速196rpm。优化以后菌丝干重产率可以达到14.34g/L。最后经5L发酵罐验证,并得到四个明显的生长周期。通过响应面分析法建立模型为: Y=1.370+0.038x_1+0.112x_2+0.212x_1x_2-0.178x_1~2-0.337x_2~2 Y=1.4158-0.0423x_1+0.1245x_2-0.0134x_3+0.212x_1x_2-0.0211x_1x_3-0.1010x_2x_3-0.2288x_1~2-0.2423x_2~2-0.2878x_3~2 古尼拟青霉菌丝体经热水浸提、醇析、脱蛋白,得到粗多糖,再经DEAE-52纤维素柱层析、SephadexG-100葡聚糖凝胶过滤层析得到纯多糖,经紫外光谱分析无核酸、蛋白质、多肽等成分。 用MTT法分别检测MPPG对LPS诱导鼠脾细胞体外增值的影响、体外对S180的影响,检测MPPG培养的各种肿瘤上清液对LPS诱导的鼠脾细胞体外增殖的影响、对小鼠脾NK细胞的活性的影响,以及ELISA法测定各种肿瘤上清液中TGFβ1的分泌量。100μg/ml MPPG培养的肿瘤上清液可明显减少对LPS诱导的鼠脾细胞增值和NK细胞的杀伤活性的抑制作用,同时多糖培养的肿瘤上清液中免疫抑制因子TGFβ1的含量较单纯肿瘤上清液的TGFβ1的含量明显的降低。MPPG可降低肿瘤细胞的免疫抑制作用,减少肿瘤细胞产生免疫抑制因子TGFβ1。


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