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《贵州大学》 2006年
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石斛的离体培养及遗传稳定性的分子检测

宋常美  
【摘要】:石斛属(Dendrobium S W.)是兰科(Orchidaceae)多年生草本植物。在《本草纲目》中石斛被列为上品,具有明目强身、镇痛消炎、抗肿瘤、抗衰老、增强机体免疫力等功效。本研究以金钗石斛为材料,在离体培养、遗传稳定性两领域开展了工作,以期为资源的离体保存、快繁等提供理论指导和构建技术平台,现取得以下结果: 1 茎段离体培养技术的建立与优化 选用金钗石斛的嫩茎为外植体,用70%酒精浸泡30s后,分别用以下两种方式灭菌,1)0.1%升汞灭菌12min,2)0.1%升汞+数滴Tween80灭菌10min;两种灭菌方式的灭菌效果差别很大,污染率分别为73.3%、16.7%。随后接种在MS+BA(1.0mg/L)+NAA(0.4mg/L)+蔗糖(3.0%)+琼脂粉(0.7%)培养基上,萌发后转接到MS+BA(1.2mg/L)+NAA(0.4mg/L)+蔗糖(3.0%)+琼脂粉(0.7%)培养基上,通过器官型方式,诱导侧芽的萌发增殖;壮苗培养以1/2MS+NAA(0.5mg/L)+IBA(0.5mg/L)+蔗糖(2.0%)+琼脂粉(0.7%)培养基上效果最佳;生根培养以1/2MS+NAA(1.0mg/L)+蔗糖(2.0%)+琼脂粉(0.7%)培养基上效果最佳;移栽时将一次性塑料杯底部及四周打上孔,先放入两个松果后再铺上苔藓或者树皮均能获得90%以上的移栽成活率。 2 金钗石斛愈伤组织培养体系 愈伤组织诱导:采用无菌试管苗的茎段诱导愈伤组织,不同的基本培养基、生长激素、细胞分裂素及激素浓度对愈伤组织的诱导上有一定差异,诱导率为改良MS_2>MS>1/2MS>>改良MS_1;NAA>IBA;BA>KT;在MS+NAA(0.8mg/L)+BA(0.5mg/L)+蔗糖(3.0%)+琼脂粉(0.7%)培养基上诱导率稍高。 愈伤组织增殖:经综合评定,MS>1/2MS>改良MS_2>>改良MS_1;NAA、IBA>IAA;蔗糖>葡萄糖;在MS+NAA(0.8mg/L)+BA(0.5mg/L)+蔗糖(3.0%)+琼脂粉(0.7%)培养基上增殖效果最好,约90d左右增殖倍数可达23.98倍。愈伤组织培养的最佳时间是90—100d。 愈伤组织再分化:GA对愈伤组织的再分化效果极强,远远强于BA、KT,当GA浓度为0.5—1.0mg/L时有利于诱导愈伤组织再分化,出苗整齐,生长状况好。 丛生芽壮苗增殖培养:经愈伤组织再分化形成的丛生芽在MS+IBA(0.4mg/L)+蔗糖(2.0%)+琼脂粉(0.7%)培养基上增殖效果及苗的生长状况最好。 3 愈伤组织遗传稳定性的RAPD检测 采用42个随机引物对金钗石斛不同继代次数的愈伤组织DNA进行RAPD检测,结果表明,愈伤组织在继代15代以内,没有检测到遗传变异,但在16代时,DNA分子标记变异率为0.11%。
【学位授予单位】:贵州大学
【学位级别】:硕士
【学位授予年份】:2006
【分类号】:Q943.1;S567.239

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