古尼虫草益智作用及其活性物质的相关性研究

【摘要】： 目的：本课题总的目标是：确定古尼虫草提高学习记忆的功能及其生物活性物质的相关性。具体的研究目的包括：1．筛选评价不同古尼虫草提取液对提高学习记忆力的影响；2．论证古尼虫草活性物质——多糖与黄酮在改善学习记忆中的作用；3．探明古尼虫草多糖与黄酮提高学习记忆力的机理；4．确定古尼虫草多糖和黄酮的理化特性及其最佳提取工艺条件。 方法：通过30％乙醇与石油醚处理古尼虫草分别得到水溶性和脂溶性提取液，采用动物模型——记忆巩固障碍模型与记忆再现障碍模型确定有促进学习记忆作用的物质是水溶性还是脂溶性。在确定为水溶性物质后，选择性提取多糖与黄酮类物质，以便进一步证实其改善学习记忆的作用。利用昆明小鼠随机分组，用灌胃方式，采用亚硝酸钠和乙醇建立记忆巩固和再现障碍模型后，分别用跳台和避暗仪测量小鼠的记忆行为学指标(错误率和潜伏期)，同时检测相关的大脑生理生化指标(蛋白质、SOD、MDA)及病理学指标(病理学切片、HE和尼氏染色)，比较用药前后的指标变化，探明相关活性物质提高学习记忆的机理。利用微波，超声波及传统萃取技术，通过正交设计筛选出古尼虫草多糖和黄酮的最佳提取条件。进一步采用气相色谱，高效液相色谱，红外和紫外等测定方法确定相关物质的理化特性。 结果：1)古尼虫草水溶性组，虫草多糖组和黄酮组分别与空白组、模型组比较，错误率明显降低(P＜0.05)，潜伏期显著缩短(P＜0.05)；2)与模型组比较，多糖组和黄酮组的相关大脑生理生化指标：蛋白质和SOD含量提高，MDA含量降低。其神经元数目明显多于模型组，模型组小鼠大脑皮层及海马神经细胞出现退化，衰退和坏死等病例现象；3)三种提取方法比较，结果表明：用超声波法提取古尼虫草多糖和黄酮的效果最佳。其多糖提取工艺为：料液比(1：25)，温度(60℃)，时间(20min)，次数(3次)，测得多糖含量为11.52％。其黄酮提取工艺为：料液比(1：30)，温度(80℃)，时间(10min)，次数(1次)，测得黄酮含量为6.56％。通过气相色谱证明古尼虫草多糖是由阿拉伯糖、木糖、半乳糖和一种未知单糖组成的杂多糖，古尼虫草黄酮化合物可能为双氢黄酮或异黄酮。 结论：古尼虫草水溶性提取液、古尼虫草多糖和黄酮均有改善和提高小鼠学习记忆的功能，这与古尼虫草多糖和黄酮能够减缓海马神经细胞凋亡，改善脑供血量、提高大脑蛋白质与SOD含量、降低脑中MDA含量及抗氧作用有关。各项指标与脑复康比较显示：古尼虫草多糖和黄酮在改善小鼠学习记忆的作用效果与脑复康相似，进一步论证了古尼虫草改善提高学习记忆的功能与其活性物质的相关性，同时鉴定了古尼虫草多糖系杂多糖，古尼虫草黄酮化合物可能为双氢黄酮或异黄酮，有关古尼虫草多糖与黄酮的最佳提取工艺条件也得到了确定。